GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽

目的 体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法 首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b／p50和pET22b／p65，并在大肠杆菌E．coli BL-21中诱导表达，后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果 经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50、p65蛋白，GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论 证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用，这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。     

PKC途径和P13K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的 研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(P13K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用.方法 人PBMC先用P13K抑制剂Ly29400Z、PKC抑制剂Rottlerin或NT-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-T分泌;并同时检测,αβT细胞作为对照.结果 无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P＜0.05或P＜0.01),后二组分泌IFN-γ的78T和αβT细胞亦显著减少(P＜0.05或P＜0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P＜0.01).结论 PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PDK亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用.     

大鼠杏仁中央核血管活性肠多肽标记神经元的年龄变化

用免疫细胞化学和图像分析研究了大鼠杏仁中央核内管活性肠多肽标记神经元的分布和形态的增龄性变化，血管活性肠多肽标记神经元胞体主要位于杏仁中央核的外侧亚区，外囊亚区内亦有少量分布，偶见于内侧亚区和腹侧亚区。     

多肽在前体药物与药物载体方面的应用

多肽是一种生物活性物质，无毒，具有良好的生物降解性，已经受到许多研究的关注。多肽主要应用于前体药物，利用肿瘤细胞的选择性激活机制，用于癌症治疗或将其引入缓释系统，制成各种载体材料，控制药物释放。本将介绍国外最近几年关于多肽在前体药物以及药物载体方面的应用研究。     

表皮生长因子应用简介

鼠表皮生长因子(mEGF)是一个具有53个氨基酸的促细胞分裂多肽,分子量为6045,含有由6个半胱氨酸组成的二硫键。人的表皮生长因子(hEGF)已于1974年由人尿中提纯出来,由于它具有抗胃酸分泌作用又称抑胃素,与mEGF同源。 表皮生长因子(EGF)主要由颌下腺,十二指肠Brunner氏腺合成。在人体的绝大多数体液中均已发现hEGF,在乳汁、尿液、精液中的含量特异性地增高。它在人血清中的浓度为0.2～2.0ng/ml。 EGF可以刺激或抑制细胞的增殖、促进细胞的分化,它与其细胞膜上受体的结合导致了一系列生化事件的发生,首先是EGF受体酪氨酸激酶活性的激活,然后是内在化和磷酸脂酶C的活性增加等等,其中酪蛋白激酶Ⅱ的改变有着相当重要的作用。EGF的作用有时是难以区分为直接或间接作用于靶细胞的。     

抗68KD核糖核蛋白抗体的临床意义探讨

<正> 近年来在抗核抗体谱的研究中,应用免疫印迹技术(IBT)证实细胞核中分子量为68KD的核糖核蛋白具有RNP抗原性。Pette-rsson等认为抗68KD多肽抗体可能是混合性结缔组织病(MCTD)的血清标记抗体。为了明确抗68K多肽抗体在MCTD诊断上的意义,本文应用IBT法分别对MCTD与系统性红斑狼疮(SLE)患者进行抗68K多肽抗体的研究,并探讨其临床意义。     

人LAK细胞抗菌杀菌活性多肽HLP—2b的分离纯化

目的：分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽，并检测其抗肿瘤细胞株K562活性。方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，并用IL-2和PHA刺激培养。5%乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽，Tricine-SDS-PAGE鉴定其分子量，并运用琼脂糖弥散法，MTT法鉴定其抗菌、抗肿瘤活性。结果：从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出一多肽，分子量为7.8kD，命名为HLP-2b，具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗肿瘤细胞株K562活性。结论：HLP-2b可能为LAK细胞一新的抗菌抗瘤效应分子。     

人膀胱粘膜抗菌多肽的部分纯化及抗菌活性研究

以５％乙酸冲洗正常人膀胱，获得膀胱粘膜酸溶性提取物。电泳凝胶琼脂糖弥散法抗菌实验分析表明，膀胱粘膜酸溶性提取物中有一条主蛋白带（称之为ＨＢＰ）对致病性大肠杆菌ＭＬ－３５Ｐ株有抗菌活性。以超滤方法对膀胱粘膜酸溶性提取物进行分离纯化，获得分子量低于１×１０~４的超滤纯化样品，其中主要含ＨＢＰ。琼脂糖弥散法抗菌实验结果表明，超滤纯化样品对大肠杆菌ＭＬ－３５Ｐ株、绿脓杆菌ＡＴＣＣ２７８５３株、金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３株及血链球菌Ｓ_３４Ｓｒ株均有很强的抗菌活性。采用Ｔｒｉｃｉｎｅ－ＳＤＳ－ｐＡＧＥ鉴定，超滤纯化样品主要显示为两条分子量分别为６．７×１０~３和８．５×１０~３的多肽。研究结果首次提示，人膀胱粘膜内存在抗菌活性很强的内源性抗生肽，是膀胱抗感染防御的主要因素。     

45例SLE患者抗CyP与ENA多肽抗体谱测定结果分析

0　引　　言系统性红斑狼疮 ( SLE)是一种全身性的自身免疫病 ,其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体 ,如抗 Sm、抗 ds- DNA、抗 U1- RNP等 ,其中可提取的核抗原 ( ENA)多肽抗体谱的出现在 SLE的发病机制中具有重要作用。近年来 ,国外有学者发现 SLE患者存在有较高水平的亲环素 ( Cy P)自身抗体 ,并与疾病的活动性密切相关 [1]。为探讨 Cy P自身抗体与 ENA多肽抗体间的关系 ,作者以 SLE患者为研究对象 ,对二者进行了测定和比较 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂　重组人 Cy PA( rh Cy PA)抗原、辣根过氧化…     

SepharoseFF凝胶柱分离参数变化对蝎毒抗癌多肽纯化的影响

目的：优选毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离参数,方法：Ｅ 同长度的ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阳离子交换凝胶柱及不同样品洗脱速度,比较ＡＰ－Ⅲ的分离效果。结果：当柱长为２５ｃｍ,直径为５ｃｍ,流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ时,可分离,ＡＰ－Ⅲ纯度为８９％;分别０．８,０．５和０．２ｍｌ／ｍｉｎ流速进行层析,可分别同６,４,３个峰,ＡＰ－Ⅲ相应的纯度为８９％,８５％,８３％。当柱长为１２．５ｃｍ,而其他条件相同时,得到