骨髓间充质干细胞联合3D生物打印技术治疗骨缺损的研究进展

骨缺损一直以来都是临床治疗中的难题,目前主要是行自体骨或人工骨移植治疗。但自体骨取骨的损伤和人工骨资源有限且价格昂贵使得骨移植手术在临床广泛应用受到限制。近年来国内外学者对骨髓间充质干细胞诱导分化成骨的研究愈加重视,对其分离提取和定向分化的研究取得了长足的进步。骨髓间充质干细胞可向成骨细胞、软骨细胞等分化且不存在排斥反应及伦理问题,其结合3D生物打印技术修复骨缺损具有精准化和可控性的优势,是一种极具潜力和应用前景的新型骨缺损修复技术。文章对骨髓间充质干细胞的生物学特性、成骨诱导及结合载体支架治疗骨缺损的研究进行阐述,为今后在骨缺损的临床治疗中提供理论依据。     

circPVT1在胆囊癌组织中的表达及对胆囊癌细胞增殖和转移的影响

目的 研究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)在胆囊癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系,并分析其对胆囊癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR检测circPVT1在胆囊癌和癌旁组织中的表达水平,分析circPVT1的表达水平与胆囊癌患者临床病理参数的关系;常规培养胆囊癌细胞系GBC-SD,分为对照组si-NC和实验组si-circPVT1,分别转染NC siRNA和circPVT1 siRNA,实时荧光定量PCR检测circPVT1在各组细胞中的表达水平;MTt实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;裸鼠成瘤实验检测各组细胞体内成瘤能力;Western blotting检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a和β-catenin的表达.结果 实时荧光定量PCR结果显示,circPVT1在胆囊癌中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05),且circPVT1的表达与患者远处转移和TNM分期相关(P<0.05).与对照组si-NC相比,实验组si-circPVT1细胞中circPVT1的表达降低(P<0.05),si-circPVT1组细胞增殖、转移和体内成瘤能力均降低(P<0.05);与对照组si-NC相比,si-circPVT1组细胞中Wnt5a和β-catenin蛋白的表达减少(P<0.05).结论 circPVT1在胆囊癌组织中异常高表达,且其表达水平与远处转移和TNM分期相关,其可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胆囊癌的增殖和转移能力.     

骨纤维异常增殖症全身骨显像影像特征分析

目的 研究骨纤维异常增殖症(OFD)患者的核素全身骨显像表现特征,探讨骨显像在诊断和鉴别诊断中的应用价值.方法 回顾性研究2013年1月至2015年12月间122例经病理证实为OFD的患者,男61例,女61例,年龄4～69岁,平均28±14.1岁,分析这些患者全身骨显像的影像特征.结果 、单骨型OFD患者占46.7％(57/122),受累部位前三位依次为,股骨29例(50.1％),胫骨16例(28.1％),肋骨5例(0.9％).多骨型OFD占53.3％(65/122),单侧骨骼受累38例(58.5％),双侧骨骼受累27例(41.5％).多骨型患者共发现病灶472处,受累部位前三位依次为肋骨94处(19.9％),股骨64处(13.6％),胫骨45处(9.5％).单骨型OFD全身骨显像表现为轻度到高度异常放射性增高,病变特征不明显.多骨型O FD在四肢长骨多表现为沿骨长轴走行的异常放射性浓聚,放射性增高可见截段样分布,股骨上段受累,可见"羊拐征"表现;肋骨受累表现为沿肋骨长轴分布的条状放射性增高,多肋骨受累呈连续分布特征;颅面骨、骨盆、脊柱多表现为块状放射性浓聚;多骨受累有单侧骨骼受累趋势,若双侧受累表现为一侧病灶多于对侧,或表现为一侧骨病变放射性浓集程度高于对侧.结论 全身骨显像是诊断O FD的一种重要的影像手段,可评价骨骼受累范围,多骨型典型影像表现,有助于O FD的诊断及鉴别诊断.     

薯蓣皂苷通过下调Notch 1信号通路抑制甲状腺癌SW579细胞增殖与侵袭

目的 观察薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞的抑制作用并探讨其可能的作用机制.方法 体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组、不同浓度薯蓣皂苷组(10、20、30、40、50μM),CCK-8方法检测各组甲状腺癌SW579细胞存活率;随后将细胞分为对照组、薯蓣皂苷(30μM)组、Jagged 1组(5mg/L)组及薯蓣皂苷+Jagged 1组.EDU染色观察各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2及Caspase-3基因表达;Transwell实验观察各组细胞侵袭能力;Western blot检测Notch 1、Jagged 1及Hes 1蛋白表达.结果 薯蓣皂苷能抑制SW579细胞活性,抑制其增殖;能够促进SW579细胞凋亡,增加Bax/Bcl-2比例,增加Caspase-3基因表达;并抑制细胞侵袭;薯蓣皂苷还可下调Notch 1、Jagged1及Hes1蛋白表达(P＜0.05);并且薯蓣皂苷部分逆转了Jagged 1的作用.结论 薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞具有一定的抑制作用,其作用机制可能在一定程度上与抑制Notch 1信号通路有关.     

沉默S100A12对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 评价沉默S100A12基因对甲状腺乳头状癌细胞K1的增殖、侵袭与迁移能力的影响.方法 用shRNA质粒转染K1细胞沉默S100A12基因,将细胞分为shRNA-NC组和shS100A12组,通过MTT实验评价细胞增殖生长趋势,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数量,Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,细胞划痕实验评价细胞的迁移能力,Western blot实验检测K1细胞E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达情况.结果 与shRNA-NC组比较,shS100A12组K1细胞生长趋势明显受到抑制(P＜0.01),细胞克隆形成数量明显下降(P＜0.01),通过通透膜的细胞数量明显减少(P＜0.05),细胞的迁移速率明显减慢(P＜0.01).与shRNA-NC组比较,shS100A12组细胞E-cadherin的表达增高、N-cadherin的表达下降.结论 沉默甲状腺乳头状癌K1细胞中S100A12可以降低细胞增殖、侵袭与迁移能力,S100A12可能通过诱导EMT增强甲状腺乳头状癌细胞的侵袭与迁移能力.     

circZFR促进HT29和LOVO细胞增殖和迁移

目的 研究环状RNA锌指样RNA结合蛋白(circular RNA zinc finger RNA binding protein,circZFR)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及细胞系中表达及其对HT29和LOVO细胞增殖和迁移能力的影响.方法 应用GEO2R软件分析circZFR在Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中结直肠癌相关数据集GSE 126094及GSE 147597中的表达;实时荧光定量PCR检测circZFR在收集的50例结直肠癌组织样本以及其在结直肠癌细胞系中的表达;在HT29和LOVO细胞中转染circZFR特异性短发夹RNA(short hairping RNA,shRNA),同步转染对照(negative control shRNA,shNC),RT-qPCR验证转染效率;克隆形成实验(colony formation assay)及Transwell实验(transwell assay)检测不同circZFR表达水平对HT29和LOVO细胞增殖及迁移能力的影响.结果 在GSE 126094中,circZFR在结肠癌组织中的表达明显高于其在正常结直肠组织中的表达;在GSE147597中,circZFR在合并肝转移的结直肠癌组织中表达高于无肝转移的结直肠癌组织;circZFR在收集的结直肠癌组织中的表达大部分(44/50,88.00％)高于相应的癌旁组织;相比于正常肠上皮细胞系NCM460,circZFR在结直肠癌细胞系中的表达升高;在HT29和LOVO细胞中转染circZFR siRNA后,circZFR的表达水平明显下调;下调circZFR的表达可明显抑制HT29和LOVO细胞的增殖和迁移能力.结论 circZFR在结直肠癌组织及细胞系中表达增高,在HT29和LOVO细胞中下调circZFR的表达可明显抑制细胞的增殖及迁移能力.     

青蒿琥酯通过调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞增殖促进凋亡

目的 探讨青蒿琥酯对人肝癌细胞系HepG2的增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞系HepG2,分别用浓度为12.5、25、50、100mg/L青蒿琥酯作用不同时间后,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况;随后选择最佳浓度的青蒿琥酯作用HepG2细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的水平.结果 不同浓度的青蒿琥酯处理细胞24h后,青蒿琥酯均能显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,且该作用呈现剂量依赖性.流式细胞仪检测发现青蒿琥酯能显著促进肝癌细胞HepG2的凋亡,同时Western blot也进一步证实,青蒿琥酯处理后HepG2细胞中的抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促凋亡蛋白Bax表达显著上调;同时发现青蒿琥酯能够降低p-PI3K和p-Akt的水平,但未磷酸化的PI3K和未磷酸化的Akt含量变化无显著性差异.结论 青蒿琥酯可以抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进细胞凋亡,该作用与调控PI3K和Akt的磷酸化水平密切相关.     

高通量测序分析人诱导性多能干细胞分化为神经干细胞后microRNAs的表达变化

目的 筛选出人诱导性多能干细胞(hiPSCs)分化为神经干细胞(NSCs)后差异表达的microRNAs,为采用microRNAs调节hiPSCs诱导分化为NSCs的实验研究提供依据.方法 采用添加TGF-β信号通路抑制剂的单层贴壁培养法,将hiPSCs向NSCs进行为期7 d的诱导分化,收集并提取未分化的hiPSCs及诱导第7天的hiPSCs源性NSCs的总RNA,进行microRNAs高通量测序,生物信息学分析法筛选出hiPSCs分化为hNSCs后差异表达的mi-croRNAs,qPCR验证microRNAs的差异表达结果.结果 经过为期7 d的神经方向诱导,hiPSCs能高比例的转化为巢蛋白Nestin阳性、底板细胞Foxa2阳性及PAX6阳性的神经干细胞,经microRNAs高通量测序差异表达分析发现:hiPSCs分化为NSCs后具有统计学差异表达的microRNAs有429个(P<0.05),具有显著差异表达的microRNAs有343个,其中表达上调的microRNAs有186个,下调的157个.与调节hiPSCs向NSCs分化的关键信号通路TGF-β进行相关性分析发现miR-1247-3P、miR-34b-5p及miR-210-5p等20余个差异表达的microRNAs.结论 抑制TGF-β信号通路可以促进hiPSCs向Nestin阳性的NSCs的诱导分化,分化后的NSCs的microRNAs表达谱较hiPSCs有明显差异,提示有望通过调节与TGF-β信号通路相关的microRNAs的表达促进hiPSCs向NSCs的诱导分化.     

miR-196a通过靶向NR6A1降低宫颈癌Hela细胞生存和运动能力

目的探究微小型RNA-196a(miR-196a)对宫颈癌Hela细胞生存和运动能力的影响和作用机制。方法RT-PCR检测正常宫颈上皮HcerEpic细胞和宫颈癌Hela细胞、CaSki细胞中miR-196a和核受体NR6A1的mRNA水平;阴性对照miR-NC和miR-196a inhibitor转染Hela细胞,分别记为NC组和miR-196a inhibitor组,免疫印迹检测NR6A1蛋白的表达,生物信息学和荧光素酶报告实验分析和验证miR-196a和NR6A1的靶向调控关系;阴性对照质粒pcDNA和过表达质粒pcDNA-NR6A1转染Hela细胞,分别记为pcDNA组和pcDNA-NR6A1组,免疫印迹检测NR6A1蛋白表达;将miR-196a inhibitor和pcDNA-NR6A1单独或联合转染Hela细胞,分别记为miR-196a inhibitor组、pcDNA-NR6A1组和inhibitor+NR6A1组,CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹检测Ki-67、Caspase-3、VEGF和MMP-9的表达。结果与HcerEpic细胞比较,Hela细胞和CaSki细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达水平均较高(P<0.01),Hela细胞中miR-196a和NR6A1 mRNA表达变化最为显著(P<0.05);miR-196a inhibitor组Hela细胞中NR6A1蛋白表达显著降低(P<0.01),pcDNA-NR6A1组NR6A1的蛋白表达显著升高(P<0.01);miR-196a inhibitor能显著降低Hela细胞增殖倍数和Ki-67表达水平(P<0.05),同时还能提高Hela细胞凋亡率和Caspase-3表达(P<0.01);此外,miR-196a inhibitor还能减少侵袭细胞数,降低Hela细胞划痕闭合率并抑制VEGF和MMP-9的表达(P<0.01);NR6A1能显著减弱miR-196a inhibitor对Hela细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及对Ki-67、Casapse-3、VEGF和MMP-9表达的调控作用(P<0.01)。结论miR-196a inhibitor能通过靶向抑制NR6A1表达降低宫颈癌Hela细胞的生存和运动能力。     

肿瘤中C/EBPα基因的研究进展

C/EBPα是转录因子C/EBP家族的重要成员,具有促进细胞分化、抑制组织细胞增殖的功能。最近的研究表明,在一些类型的肿瘤中C/EBPα作为抑癌基因而导致细胞分化紊乱和细胞周期停滞。该文对C/EBPα基因在肿瘤组织中的作用及研究进展作一综述。