常规MRI联合DWI在软组织未分化多形性肉瘤诊断中的价值

目的探讨常规MRI联合扩散加权成像(DWI)在软组织未分化多形性肉瘤诊断中的价值。方法回顾性分析16例经手术和病理确诊的软组织未分化多形性肉瘤患者的MRI影像及病理资料。结果 16例软组织未分化多形性肉瘤患者中发生于大腿11例,小腿2例,臀部2例,上臂1例,均为单发病灶。16例肿瘤形态多样,其中14例可见不规则分叶。16例肿瘤中13例T1WI呈稍低信号或等信号,3例呈混杂稍高信号;T2WI及脂肪抑制序列均呈混杂高信号,其中8例可见分隔征,8例可见假包膜,9例可见瘤周水肿;增强扫描肿瘤实质部分呈明显不均匀强化;DWI均呈高信号。结论常规MRI联合DWI对软组织未分化多形性肉瘤具有一定的诊断价值。     

miRNA145联合二甲双胍对人结直肠癌细胞株HCT116增殖的影响

目的:探讨miRNA145联合二甲双胍对人结直肠癌细胞株HCT116增殖的影响?方法:慢病毒法将miRNA145转染入人结直肠癌细胞株HCT116,实时定量PCR检测细胞miRNA145表达的变化?通过CCK-8细胞增殖实验检测miRNA145和/或二甲双胍对HCT116细胞增殖的影响?通过Western blot检测miRNA145和/或二甲双胍对细胞AMPK?mTOR蛋白表达水平的影响?结果:CCK-8实验表明miRNA145?二甲双胍均具有抑制HCT116细胞增殖的作用,二者联用使细胞增殖受到更大程度的抑制?Western blot结果表明,二甲双胍?miRNA145以及二者联用可进一步促进AMPK的活化进而影响mTOR蛋白表达水平?结论:miRNA145联合应用二甲双胍具有更强的抑制人结肠癌细胞株HCT116增殖的作用?     

人核因子κBp65核定位信号缺失突变对A549细胞恶性表型的影响

目的鉴定人核因子κB(NF-κB)p65核定位信号(NLS)缺失突变质粒即pc DNA3.1(+)-NF-κBp65ΔNLS(简称NF-κBp65ΔNLS)的表达功能,以及其对低表达NF-κBp65的A549细胞株即A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移和粘附能力的影响。方法培养人A549/NF-κBp65 shRNA细胞株,分为对照组、转染pc DNA3.1(+)组、转染NF-κBp65ΔNLS组。应用间接免疫荧光、实时荧光定量-PCR和Western blot技术检测NF-κBp65的细胞内定位及mRNA、蛋白表达水平的变化;应用MTT、Transwell和细胞粘附实验分析转染NF-κBp65ΔNLS质粒对A549/NF-κBp65 shRNA细胞增殖、迁移、粘附能力的影响。结果成功构建人NF-κBp65ΔNLS真核表达质粒。转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,NF-κBp65 mRNA表达水平明显上调(10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22,P0.01),NF-κBp65蛋白表达水平明显升高(1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04,P0.01),且NF-κBp65蛋白主要位于细胞浆内,在肿瘤坏死因子α刺激后NF-κBp65蛋白并未明显进入细胞核。与对照组及转染pc DNA3.1(+)组比较,转染NF-κBp65ΔNLS质粒的A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力均有不同程度增强。结论通过基因突变技术构建无NLS的NF-κBp65真核表达质粒,可明显增强A549/NF-κBp65shRNA细胞株内NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达水平,并使NF-κBp65蛋白定位于细胞浆内;同时,细胞浆内过表达NF-κBp65ΔNLS蛋白可明显增强A549/NF-κBp65 shRNA细胞的增殖、迁移和粘附能力,提示滞留于细胞浆内的NF-κBp65仍可通过影响NF-κB信号通路相关蛋白参与调节肺癌细胞的生物学行为。     

乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制

探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用。结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果最强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平最高。乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24 h的下调作用最强。miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用。结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

miR-34a通过靶向抗凋亡基因Survivin抑制皮肤鳞状细胞癌增殖的研究

[摘要]　目的　研究miR-34a在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及对肿瘤细胞增殖、抗凋亡的调控作用及机制。　方法　采用实时定量PCR检测46例SCC病人肿瘤组织及15例正常皮肤组织中miR-34a及Survivin的表达;将miR-34a mimic转染进皮肤鳞状细胞癌A431细胞系,探讨miR-34a对SCC细胞增殖、Survivin表达的影响;评估miR-34a及Survivin表达对SCC预后的生物诊断价值。 　结果　　（1）低分化SCC患者miR-34a显著低于高分化组,而Survivin则显著高于高分化组（P均<0.05）。与正常皮肤比较,SCC病人的miR-34a显著降低,而Survivin表达则显著提高,P值分别为0.0013及<0.0001,差异均有极显著性意义。（2）与未转染组相比,miR-34a mimic可以显著抑制A431细胞增殖（P<0.05）;同时显著降低Survivin蛋白表达（P<0.01）。（3）高miR-34a表达的SCC患者生存率显著高于低表达者,P=0.020567;高Survivin表达的SCC患者生存率则显著低于高表达者,P=0.008198。　结论　　miR-34a可通过对Survivin表达调控影响SCC细胞增殖,同时它也可作为一个很好的生物学诊断指标为评估SCC病人预后提供参考。     

PI3K/AKT信号通路在SK-N-SH细胞中对增殖和分化的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶 B（protein kinase B,AKT）信号通路在人神经母细胞瘤SK-N-SH（human neuroblastoma,SK-N-SH）细胞增殖和分化中的作用。方法：体外培养SK-N-SH细胞,取对数生长期细胞接种于96孔培养板,将培养板中的细胞分为A组抑制剂LY294002组、B组激动剂类胰岛素生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）组、C组二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）组（LY294002阴性对照组）、D组ddH2O组（IGF-1阴性对照组）和空白组E、F组（培养基组）,24 h后A组加入不同浓度的抑制剂LY294002,终浓度为20、40、50、60、100 ?滋mol/L,B组换用无血清DMEM继续培养12 h后加入不同浓度激动剂IGF-1,终浓度为25、50、100、150、200 ng/ml,阴性对照组分别加入与LY294002和IGF-1相同浓度的DMSO和ddH2O,空白组为100 ?滋l/孔 培养基,置于37 ℃,5%CO2的孵箱中培养,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）法检测PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002和激动剂IGF-1对SK-N-SH细胞增殖影响,倒置相差显微镜下观察细胞形态学分化改变,荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantitative polymerase chain reaction ,FQ-PCR）检测SK-N-SH细胞TrkA mRNA的表达与变化。结果：①MTT检测结果显示,LY294002明显抑制SK-N-SH细胞生长,LY294002组（0.39±0.17）细胞增值能力较阴性对照DMSO组（0.78±0.21）减弱,差异有统计学意义（P=0.018）。IGF-1促进SK-N-SH生长,IGF-1组（0.72±0.14）细胞增值能力较阴性对照组（ddH2O组,0.43±0.08）增值能力更强,差异有统计学意义（P=0.004）。②显微镜下观察LY294002组和IGF-1组细胞无明显分化形态学改变。③FQ-PCR结果显示,LY294002组（0.78±0.05）酪氨酸蛋白激酶A（tyrosine kinase receptor A,TrkA）信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）的表达与阴性对照组（1.56±0.02）、空白组（1.66±0.15）比较,组间差异有统计学意义（F=81.89,P=0.000）。IGF-1组、ddH2O阴性对照组和空白组3组间的TrkA mRNA的表达水平无统计学差异（F=0.27,P=0.770）。结论：PI3K/AKT信号通路可能参与了SK-N-SH增殖和分化过程,该通路关键基因有望成为临床治疗神经母细胞瘤的分子靶点。     

羟基磷灰石／壳聚糖复合微球的制备及其生物学作用的体外研究

目的：通过探究羟基磷灰石（HAp）壳聚糖（CS）复合微球支架对骨髓间充质干细胞体外生物学行为的影响,评估其作为骨组织工程支架的可行性。方法纳米 HAp 和CS 复合物通过微流体技术自组装成微球支架,显微镜下形态学观察。将 P2代骨髓间充质干细胞（BMSCs）与微球行体外共培养,计算前6 h 黏附率。培养1、3、6、9 d,计算增殖率并用 GraphPad Prism 6软件对数据进行处理;行扫描电镜及共聚焦扫描式显微镜检测,观察细胞黏附及分布。将细胞微球复合物填入自制模具中培养14～21 d,进行形态观察。结果显微镜镜下微球为完整的圆形,大小一致。BMSCs 与微球体外培养6 h,黏附率达90％以上。6 d 时,BMSCs 的增殖率达到最高。扫描电镜结果显示微球上有大量 BMSCs 黏附定植并分泌大量胞外基质将微球连接成整体;共聚焦扫描式显微镜结果可见明显的细胞骨架微丝蛋白。细胞微球体外模具培养18 d 后,形成了结构完整的组织块。结论HAp-CS 微球是一种良好的促BMSCs 种子细胞黏附定植的支架材料,是促进细胞生长的有效支撑载体,与共培养细胞形成的复合组织块有望应用于体内动物实验修复标准缺损。     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

选择性β肾上腺素受体激动剂对人滑膜细胞增殖能力的影响

目的：观察β-肾上腺素受体( AR)激动药对人成纤维样滑膜细胞( FLS)增殖的作用,探讨β-AR信号对人FLS功能的影响。方法组织块培养法培养人FLS;使用肿瘤坏死因子α( TNF-α)作为刺激剂,MTT法分别检测β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺和β2-AR选择性激动剂沙丁胺醇对人FLS增殖作用的影响,并计算增殖抑制率;使用沙丁胺醇+β2-AR选择性拮抗剂ICI 118551观察其对FLS增殖功能的影响;Western blot法检测人FLSβ-AR、G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)和β抑制蛋白2(β-arrestin2)胞膜蛋白的表达水平。结果 TNF-α可以显著促进人FLS的增殖;β2-AR激动剂沙丁胺醇能明显抑制FLS的增殖,其拮抗剂ICI 118551能显著拮抗沙丁胺醇的作用;β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺对FLS的增殖无显著影响;TNF-α和沙丁胺醇均能显著降低β2-AR胞膜表达,上调 GRK2、β-arrestin2的胞膜表达。结论β2-AR信号的激活可以抑制FLS增殖;TNF-α和沙丁胺醇可以使GRK2、β-arrestin2的胞膜表达增加,β2-AR胸膜表达下降。     

戴氏虫草多糖诱导肿瘤细胞分化的研究

目的：观察戴氏虫草多糖（ CDP）对人红白血病K562细胞和人早幼粒白血病HL-60细胞分化的影响。方法：用1、10、100及1000 mg/L浓度的CDP分别处理K562细胞和HL-60细胞2 d,台盘蓝染色计数两种细胞的死活细胞数,同时检测CDP处理后K562细胞的血红蛋白的含量,观察200个HL-60细胞的分化情况。结果：在CDP作用下,K562细胞存活率增高,K562细胞内血红蛋白含量增加;HL60细胞形态向中幼,晚幼阶段方向分化,且其阳性细胞数与CDP的浓度有明显的量—效关系。结论：CDP可诱导K562细胞与HL60细胞分别向红细胞系和粒细胞系方向分化。