PCNA、Survivin蛋白在人绒癌细胞株BeWo合体化过程中表达变化的研究

目的:通过检测人绒癌细胞株Be Wo合体化过程中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、生存素(Survivin)蛋白表达的变化,探讨滋养细胞合体化后增殖性的变化,为恶性滋养细胞肿瘤,尤其是耐药恶性滋养细胞肿瘤的临床治疗提供新的思路和方法。方法:利用毛喉素(forskolin)诱导Be Wo细胞株融合;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测促融素(Syncytin)在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用蛋白质印迹(Western blotting)检测PCNA、Survivin蛋白在forskolin作用不同时间的Be Wo细胞株中的表达;应用噻唑蓝比色分析实验(MTT)法检测forskolin作用不同时间的绒癌细胞株Be Wo的增殖能力。结果:1forskolin作用后的Be Wo细胞株Syncytin基因的表达增强,且随着forskolin作用时间的延长,Syncytin的表达更强,于48 h达到高峰。2forskolin作用后的Be Wo细胞株PCNA、Survivin蛋白的表达降低。3forskolin作用后的Be Wo细胞株的增殖能力下降,且不同作用时间的差异有统计学意义;forskolin作用的时间越长,Be Wo细胞株增殖能力下降越明显。结论:人绒癌细胞株Be Wo合体化后PCNA、Survivin蛋白的表达降低,说明人绒癌细胞株Be Wo合体化后增殖性降低,推测诱导滋养细胞合体化可能对临床治疗恶性滋养细胞肿瘤具有一定作用。     

Musashi-2在宫颈癌中高表达并促进宫颈癌细胞恶性生物学行为

目的探索Musashi-2 (MSI2)在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞的作用,为宫颈癌的MSI2靶向治疗提供新的思路和理论基础。方法采用免疫组化法检测53例宫颈癌及20例非恶性子宫病变宫颈组织(对照组)中MSI2相对表达水平,分析宫颈癌中MSI2蛋白表达与临床病理参数(肿瘤分级、分期、患者年龄、淋巴结转移)的关系。采用小RNA干扰(siRNA)技术敲除He La细胞中MSI2建立实验组和对照组,分别采用聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测宫颈癌细胞中MSI2在mRNA和蛋白质水平的相对表达量。采用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell试验检测细胞侵袭能力。结果宫颈癌组织中MSI2蛋白阳性表达率67.92%明显高于对照组的25.00%,差异有统计学意义(P0.05)。MSI2高表达与宫颈癌分期、分级和淋巴结转移正相关(P0.05),与患者年龄无关。MSI敲除后He La细胞增殖、侵袭和迁移能力均有所降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MSI2蛋白在宫颈癌中通过促进癌细胞增殖、侵袭和迁移导致宫颈癌恶性程度增加,研究为宫颈癌的MSI2靶向治疗提供了新的思路和理论基础。     

和厚朴酚对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响及调控作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响和调控作用。方法采用结晶紫染色法和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达检测HNK对人结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞仪和Caspase-3蛋白表达观察HNK对人结肠癌LoVo细胞凋亡的影响;利用荧光素酶报告质粒检测HNK对Wnt信号通路中β-catenin/Tcf4转录活性的影响;蛋白的表达采用Western blot检测。结果 HNK剂量依赖性地抑制细胞增殖(P0.05),并诱导细胞凋亡。荧光素酶报告质粒检测结果显示,HNK在10.0μmol/L时就能明显降低LoVo细胞中β-catenin/Tcf4转录活性(P0.05)。结论 HNK能抑制人结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡,该作用可能与HNK抑制Wnt信号通路的转导有关。