细胞因子处理联合B7—1基因转染制备有效的肝癌疫苗

在体外用ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α等细胞因子处理的Ｂ７－１表达阳性的Ｈｅｐａｌ－６，观察其对小鼠肝癌表面ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ和ＩＣＡＭ－１表达的调节作用和对体内外抗肿瘤免疫反应的影响。结果发现：单独Ｂ７－１基因转染的Ｈｅｐａｌ－６的致癌性消失，但仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应，而Ｂ７－１基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强的细胞毒杀伤活性和完全的抗Ｈｅｐａｌ－６保护性免疫反应。结论Ｂ７－     

Galectin-3与CDC25B在胃癌中的表达及意义

目的 探讨半乳糖凝集素3 mRNA(Galectin-3)和细胞分裂周期蛋白25B mRNA(cell division cycle 25B,CDC25B)在胃癌中的表达及其与临床病理参数及预后的关系.方法 应用组织微阵列技术和原位杂交法检测220例胃癌组织和31份正常胃黏膜组织中Galectin-3 mRNA和CDC25B mRNA 的表达情况.结果 220例胃癌中Galectin-3 mRNA和CDC25B mRNA的阳性表达率分别为58.6%、54.1%;Galectin-3 mRNA表达与肿瘤大小、TNM(tumor,lymph node,metastasis)分期、浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移及远处转移呈正相关;CDC25B mRNA表达也与肿瘤大小、TNM分期、脉管侵犯、淋巴结转移及远处转移呈正相关;Galectin-3 mRNA表达与CDC25B mRNA表达呈正相关;Galectim3 mRNA和CDC25B mRNA阳性表达病例的平均生存时间和5年生存率均明显低于阴性表达的病例.结论 Galectin-3 和CDC25B基因的表达促进了胃癌的发生和发展,是指导临床治疗及评估预后的有效指标.     

核转录因子NF-κＢ参与单磷酰脂A预处理的延迟保护作用

目的：探讨核转录因子NF-κB在单磷酰脂A预处理的延迟阶段的作用。 方法： 建立大鼠心肌缺血/再灌注（I/R）损伤模型。分别应用单磷酰脂A（MLA）、NF-κB的特异性抑制剂DDTC加MLA预处理心脏, 24 h对心脏进行较长时间缺血再灌注，检测心肌梗死范围、LDH释放及心肌细胞凋亡率。另外分组检测MLA预处理0 min、15 min、30 min、60 min、NF-κB抑制剂DDTC加MLA预处理后30 min时NF-κB活性。 结果: MLA预处理减小再灌注心肌梗死范围、降低血浆LDH活性、减少细胞凋亡(P<0.05 vs I/R)。同MLA预处理组相比， DDTC+MLA组心肌梗死范围增大、LDH活性增高, 细胞凋亡增加(P<0.05)。与预处理前相比，NF-κB活性在预处理后15 min明显升高、30 min达到高峰、60 min下降(P<0.01)。与MLA预处理后15 min、30 min、60 min相比， DDTC加MLA预处理后30 min时,NF-κB活性明显降低(P<0.01)，而与MLA预处理0 min无显著差别(P＞0.05)。 结论: (1) MLA预处理对24 h后缺血/再灌注心肌有保护作用。(2) 核转录因子NF-κB参与心肌预处理后的延迟保护作用，MLA预处理后NF-κB快速的核转移并激活可能是药物预处理延迟保护作用的重要机制之一。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B基因疫苗的构建及细胞免疫学研究

目的：构建、制备单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)糖蛋白BDNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答。方法：PCR扩增编码HSV-Ⅰ gB去除N端部分信号肽序列(39bp)的基因片段(2673bp)，定向插入pcDNA3载体中，构建pcDNA3-gB基因疫苗并对其进行PCR、酶切及测序鉴定。于BALB／c小鼠注射免疫3次，观察小鼠CD4^ 、CD8^ T细胞亚群的变化，CFSE／PI双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果：双酶切分析结果为目的基因(2．7kb)和线性质粒pcDNA3(5．4kb)；PCR扩增结果为特异产物(2．7kb)；测序结果与GenBank gB基因序列同源性达99．5％；CTL，活性增强；BALB／c小鼠脾CD4^ T细胞增加。结论：经鉴定证实了HSV-Ⅰ gB基因疫苗的构建；HSV-Ⅰ gB基因疫苗可以诱导较强的细胞免疫应答，应用于预防HSV-Ⅰ的感染具有良好的前景。     

管花苷B对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的：观察肉苁蓉提取物管花苷B对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的影响。方法：用MTT法检测细胞存活率，以激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化，DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生，并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性。结果：100 μmol·L^-1 H₂O₂处理细胞24 h显著降低细胞的存活率；诱导细胞发生凋亡，凋亡率达48.0％；细胞内活性氧水平及caspase-3的活性显著升高；而线粒体膜电位却明显降低，红/绿荧光强度的比值由正常的5.97降低为0.41左右。而预先给予1、10或100 mg·L^-1浓度的管花苷B处理细胞12 h，可显著提高细胞存活率；并可有效抑制DNA ladder的发生；流式细胞仪检测凋亡率分别降低到30.9%、18.3%和6.2%；激光共聚焦显微镜结果显示管花苷B可明显降低细胞内活性氧的水平；并可逐渐恢复线粒体的高能量状态；caspase-3的活性不断降低，并呈现了一定的剂量依赖性。结论：管花苷B能显著地抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡，其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平，维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。     

右美托咪定减轻脂多糖致大鼠急性肺损伤

目的探讨右美托咪定在减轻脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及相关机制。方法将SD大鼠随机分为:对照组、脂多糖组(LPS组,腹腔注射LPS 5 mg/kg)和右美托咪定+脂多糖组(LD组,腹腔注射右美托咪定25μg/kg+LPS 5 mg/kg)。6 h后,收集左肺支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测BALF中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;取右肺组织进行HE染色观察肺组织病理学变化,并进行肺损伤评分;计算肺组织湿重/干重(W/D)的比值;Western blot检测肺组织中HGMB1、TLR4和TLR2蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS组中肺损伤评分、W/D比值、BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高(P0.05),且肺组织中HMGB1,TLR2,TLR4的表达上调(P0.05);与LPS组相比,LD组中各指标变化显著减轻(P0.05)。结论右美托咪定能够减轻LPS致大鼠急性肺损伤,可能与HGMB1和TLRs蛋白表达的抑制有关。     

温脾汤药物血清对体外培养的大鼠系膜细胞核转录因子-κB活化的影响

目的 探讨温脾汤药物血清对大鼠原代培养系膜细胞核转录因子NF-κB及其抑制因子IκB表达的影响，提供其肾保护作用机理的实验依据。方法 应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术，研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的NF-κB活化的影响；应用Western blot方法研究温脾汤药物血清对LPS刺激引起的IκBα降解的影响。结果 LPS刺激10h后，NF-κB的活性达到最高峰，且最高荧光强度位于细胞核内；大剂量药物血清明显抑制NF-κB的活性增强；IκBα在LPS刺激后迅速降解，又在1～2h内迅速恢复近正常水平；大剂量药物血清能明显抑制IκBα的降解。结论 温脾汤通过抑制LPS诱导的IκBα降解，使NF-κB与IκBα结合成复合物而减少解离，阻止了系膜细胞NF-κB的活化过程。     

低分子肝素对缺血再灌注大鼠肾组织核因子-κB表达的影响

探讨低分子肝素对缺血再灌注大鼠肾组织核因子-κB（NF-κB）表达的影响。建立大鼠IRI模型，健康WistaI大鼠80只随机分为正常对照组、假手术组、模型未治疗组、LMWH治疗组，后两组又分别分为术后1、3、6、24h组。检测各组血清肌酐（Scr）水平及中性粒细胞（PMNs）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达；通过光镜和免疫组织化学方法观察各组大鼠肾组织形态学及趋化因子NF-κB表达变化。结果表明：（1）肾缺血再灌注未治疗组造模后1h，Scr水平虽然没有明显变化，但ICAM-1、NF-κB表达增多，肾小管坏死积分值亦较假手术组明显增加（P〈0．01）；（2）缺血再灌注6h以后，两组Scr浓度明显增高（P〈0．01），但LMWH治疗组SCr、ICAM-1、NF-κB表达水平及肾小管坏死积分值均明显低于模型未治疗组（P〈0．05）；（3）肾组织中NF-κB表达与肾小管损伤积分值呈现良好的相关性（r=0．71，P〈0、01）；而NF-κB与ICAM-1间则呈现显著正相关（r=0．62，P〈0．05）。由此说明：（1）ICAM-1、NF-κB在肾缺血再灌注早期的瞬时表达，可能参与了炎症早期的白细胞迁移与浸润，与肾损伤的发生密切相关；（2）LMWH可通过减少ICAM-1及NF-κB的表达，阻抑炎症反应过程，减轻肾组织损伤。     

低氧致鼠腺泡内肺动脉PDGF—B链蛋白表达的变化

目的：探讨血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）在低氧肺动脉高压血管构形重建发生中的作用。方法：应用免疫组化技术结合计算机图像分析，检测了低氧大鼠腺泡内肺动脉（ＩＡＰＡ）ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达水平。结果：常氧时，ＩＡＰＡ仅有ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白弱表达；低氧１天时，ＩＡＰＡ便有较强的ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达，定位于ＩＡＰＡ的内皮和中膜，低氧３天至１４天仅分布于中膜；低氧１、３、５、７、１４天各时间点ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达分别为常氧组的１．５３、１．５９、１．５６、１．６２和１．４２倍，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论：ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白可能参与了低氧肺动脉高压血管构形重建的发病过程     

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.