TTV部分基因的克隆及序列测定

为了弄清萍乡地区ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)感染情况 ,分析本地区ＴＴＶ株基因结构特点 ,我们对江西省萍乡地区 8例ＴＴ病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定。1　材料和方法1 1　材料　血清标本采用本地区流行病学调查和本院的临床阳性标本。Ｔ载体、ＸＬ1 Ｂｌｕｅ菌为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品。Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰｓ及Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自华美公司。ＰＣＲ试剂由中国军事医学科学院提供。1 2　引物合成　根据Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的ＴＴＶ基因序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件在ＴＴＶＯＲＦ保守区设计两对套式引物 ,引物序列如下 :外…     

人骨骼肌醛缩酶的间接碘化标记及对肝、胃疾病的检测

本文用间接碘化蛋白质法标记提纯的人骨骼肌醛缩酶［ＡＬＤ（Ａ）］，并用自建的放射免疫分析检测肝、胃病患者血清ＡＬＤ（Ａ）．结果表明，肝炎、肝硬化和十二指肠溃疡患者血清ＡＬＤ（Ａ）含量均在正常范围内，而胃癌和肝癌组血清ＡＬＤ（Ａ）水平显著高于正常组（ｐ分别为Ｐ＜０．０５，ｐ＜０．０１）．说明ＲＩＡ检测血清ＡＬＤ（Ａ）对于鉴别肝、胃良恶性疾患具有一定的诊断价值。ｐ＜０．０１ＡＬＤ（Ａ）的标记进行了改进，采用间接碘化法。该法分二步进行：第一步制备１２５Ｉ－ＢＨ试剂，第二步将该试剂通过酰胺键与ＡＬＤ（Ａ）的末端氨基相连，制得１２５Ｉ－ＡＬＤ（Ａ）。这种间接碘化蛋白质标记法，大大减低了蛋白质与氧化剂、还原剂和放射性碘之间的化学作用，减少了对抗原的损伤。从标记结果看，１２５Ｉ－ＢＨ对ＡＬＤ（Ａ）抗原的化学结构和免疫特性的影响不大，制得的１２５Ｉ－ＡＬＤ（Ａ）符合ＲＩＡ的要求。ＡＬＤ（Ａ）以果糖－１，６－二磷酸为主要底物，是鼠肝癌组织和人肝细胞癌中的主要ＡＬＤ同工酶，其它二种同工酶：ＡＬＤ（Ｂ）和ＡＬＤ（Ｃ）分别存在于正常肝组织和脑组织中，因此放免测定ＡＬＤ（Ａ）比测定总ＡＬＤ活力及其它二种同工酶更具临床意义。我们应用自建     

Western blot 检测蛋白表达方法的改进

Western blot为常用的检测蛋白质的方法．其操作步骤较多，在抗体反应这一步骤中．常规方珐首先用靶蛋白特异性的非标记抗体与靶蛋白的抗原决定簇相结合．然后用Ⅰ-蛋白A或与辣根过氧化物酶耦联的抗免疫球蛋白抗体检测已结合上去的抗体，此法虽好，但有如下缺点：（1)信号放大有限．在蛋白质量少的隋况下无法得到满意结果，     

注意缺陷多动障碍血清多巴胺—β—羟化酶活性的测定

注意缺陷多动障碍血清多巴胺—β—羟化酶活性的测定杜亚松，苏林雁，李雪荣，杨锡兰，唐爱国湖南医科大学精神卫生研究所湖南医科大学附二院中心实验室以注意力不集中、活动过度、情绪冲动为主要临床特征的注意缺陷多动障碍（ＡＤＨＤ）在学龄儿童中占６．０４％［１］，...     

重组风疹病毒外膜蛋白E1的表达及其在血清学中的初步应用

目的 在大肠埃希菌中表达重组风疹病毒外膜蛋白E1,用其作为包被抗原,建立一种用于诊断风疹病毒感染的ELISA检测方法 .方法 通过基因重组的方式构建表达质粒并在大肠埃希菌中表达风疹病毒外膜蛋白E1,蛋白纯化后作为包被抗原,用ELISA的方法 检测世界卫生组织(WHO)的风疹检测质控血清以及来自广西桂林的未知血清样本.结果 采用WHO用于风疹检测的质控血清对所表达的重组抗原的抗原性进行鉴定,通过试验,特异性、敏感性均为100%.用表达的抗原对来自我国广西的200份未知血清样本进行风疹病毒外膜蛋白抗体的检测,阳性率为93%,与文献报道的我国其他地区风疹病毒抗体阳性率基本一致.结论 通过实验我们表达了具有良好抗原性的风疹病毒外膜蛋白E1,为进一步研究风疹病毒感染的实验室诊断技术奠定了基础.     

新疆出血热病毒核蛋白基因的高效表达及其在诊断中的初步应用

目的　克隆并测定了克里米亚 刚果出血热病毒 (CCHFV)中国分离株 (新疆出血热病毒 ,XHFV)BA8816 6株核蛋白 (NP)基因的序列并实现其在细菌中的高效表达与临床诊断的应用。方法　病毒RNA经RT PCR扩增出完整的NP基因。将扩增产物进行序列分析并克隆至融合表达载体pET32a ,使重组质粒在大肠杆菌BL 2 1中高效表达。将融合蛋白经初步纯化后包被ELISA板用于抗体检测。结果　XHFVBA8816 6株NP基因序列以及推导的氨基酸序列与其它XHFV的NP基因和蛋白序列同源性较高 ,在进化树上形成独立的分支。BA8816 6株NP基因编码 4 82个氨基酸的核蛋白 ,推测的相对分子质量 (Mr)约为 5 4× 10 3。在细菌中表达的融合蛋白经印迹试验证明具有良好的抗原性。以所建立的ELISA方法检测疫区人和动物血清的结果与IFA一致 ,并与临床诊断有很好的符合率。结论　BA8816 6株与其它XHFVBA6 6 0 19、BA84 0 2的NP基因在进化上关系密切 ,综合M基因的序列分析结果 ,人源分离株BA8816 6可能是来自蜱的BA84 0 2变异株。表达于细菌中的核蛋白可作为安全的诊断性抗原用于临床检测及流行病学调查 ,所建立的方法准确、特异、简便、快速     

丙型肝炎患者血浆TXB2与6-K-PGF1α测定的临床意义

近年来,国内开展测定血浆TXB2及6-K-PGF1α浓度,主要用于血栓性疾病等研究[1,2].国内有关对丙型肝炎患者进行测定血浆TXB2及6-K-PGF1α浓度的报道尚属少见,为此,我们进行了探讨,现将结果报告如下.     

肝癌患者血清T3,T4,rT3 RIA的临床应用

我们用RIA法对55例肝癌进行了血清学T_3、T_4rT3测定,发现T_3、T_4、rT3代谢变化与肝癌病情息息相关,对肝癌患者治疗起到积极的指导作用。 对象和方法 一、对象: (一)肝癌组:55例肝癌(男47,女8)年龄29～65岁,均经病理、B超、CT、AFP等检查证实,按肿瘤内科手册分Ⅲ期;Ⅰ期,无明显肝癌症状体征者;Ⅱ期,超过Ⅰ期标准而无Ⅲ期证据者;Ⅲ期,有明显恶病质、黄疸、腹水或肝外转移之一者。 (二)对照组:30例(男20,女10)年龄27～58岁,均为我院健康查体者,无肝病、甲状腺病等。 二、方法: (一)T_3、T_4、rT3试剂盒山40l所提供,按说明书操作。 (二)仪器为西安262厂产FJ—2008 P全自动γ计数仪。 结果 肝癌组与正常对照组血清T_3、T_4、rT3结果如表1。Ⅱ、Ⅲ期肝癌T_3明显低于正常对照组(p<0.05),Ⅲ期肝癌rT3明显高于对照组(p<0.05),各期肝癌T_4略有变化,但无统计学意义(p>0.05)。     

TMA与TGA检测对甲状腺疾病的临床诊断价值

根据174例疑诊患者的TMA、TGA，T3，T4放射免疫测定结果及其临床表现进行诊断，结果表明桥本氏甲状腺炎和甲亢所占的比例(分别为38．51％及31．61％）显著高于甲减和亚急性甲状腺炎(分别为6．32％和4．02％)，P＜0．05。甲减患者TGA TMA的阳性率（81．82％)显著高于甲亢(50．91％)，桥本氏甲状腺炎(50．75％)及亚急性甲状腺炎(57．14％)，P＜0．05。单项抗体阳性者以TMA较TGA为多。本文结果提示在甲状腺疾病中TMA，TGA的阳性结果存在相互重叠现象，与T3、T4联检并结合临床表现进行综合分析有助于甲状腺疾病的鉴别诊断并正确指导治疗。     

戊型肝炎病毒归科的形态学证据

采用超簿切片制样及负染色免疫电镜方法，对经细胞培养自戊型肝炎病人分离的８７Ａ株病毒进行了形态及形态发生的研究。结果显示，感染细胞胞浆局灶性空泡液泡病变区明显而普遍；病毒呈晶格样排列，在胞浆内装配成熟，与粗面内质网、病毒性包涵体、微丝等密切相关；病毒毒粒无囊膜，大小约３０ｎｍ呈圆形，表面形态不规整，电致密度不均一，偶见“凹杯形”、“刺突”等表面超微结构；感染细胞核呈现扭曲变形，异染色质趋边等显著受累及病变。其形态及形态发生特征表明其应为嵌杯病毒科新属—嗜肝ＲＮＡ病毒属的成员，而部分核苷酸序列分析也支持其为戊型肝炎病毒。