鼠伤寒杆菌核糖体制剂用作血吸虫抗原佐剂的探讨

目的：探讨鼠伤寒杆菌核糖体制剂对血吸虫抗原的佐剂作用。方法：小鼠分别用鼠伤寒杆菌核糖体制剂（ＳＴＲＰ）加日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡ）和日本血吸虫成虫抗原免疫后，其体液免疫水平用ＥＬＩＳＡ检测，保护性免疫力用减虫率表示。结果：用ＳＴＲＰ＋ＳＷＡ免疫的小鼠的抗体水平显著高于单用ＳＷＡ免疫的小鼠。尾蚴攻击感染后，ＳＴＲＰ＋ＳＷＡ免疫组小鼠和ＳＷＡ免疫组小组的减虫率，分别为４７％和１７％，前者高于后者。结论：ＳＴＲＰ可以增强小鼠对血吸虫抗原的体液免疫应答反应，并且可诱导小鼠产生较强的抗尾蚴攻击感染能力。     

从基因水平对新型佐剂在旋毛虫疫苗中免疫调节作用的探讨

目的　从细胞因子的基因转录水平探讨两种新型佐剂霍乱毒素 B亚单位(CT B)和皂素(Saponin)在旋毛虫疫苗中的免疫调节作用。　方法　36只NIH小鼠随机分为CT B佐剂免疫组、Saponin佐剂免疫组和对照组。将CT B和Saponin分别与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原混匀后,以口服或皮下注射途径免疫小鼠,隔周1次。第3次免疫后 1 周,经口感染旋毛虫感染期肌幼虫。感染后第8 d,采用RT PCR技术分析各组小鼠脾细胞在体外旋毛虫肌幼虫抗原刺激下,转录细胞因子 IFN γ、IL 2、IL 4及 IL 5 mRNA的水平。　结果　各组小鼠的脾细胞在体外抗原诱导下均未能转录 IL 2和 IFN γmRNA,但均有不同程度的 IL 4和 IL 5特异扩增,两免疫组的 IL 4 及 IL 5 mRNA转录水平明显高于对照组。结论　 Th2细胞及其分泌的细胞因子在机体抗旋毛虫的保护性免疫中发挥着重要作用;从佐剂角度提高旋毛虫疫苗的保护性是可行的。     

流感病毒NA-C3d融合基因在非复制型重组腺病毒中的表达及其免疫效果的研究

目的 构建表达融合基因NA-C3d的非复制型重组腺病毒并研究其免疫效果.方法 将NA-C3d融合基因克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV,与腺病毒DNA共转化E.coli BJ5183,经同源重组获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒并检测其免疫效果.结果 NA-C3d经PCR证实整合至腺病毒基因组中;重组病毒感染293细胞中经Wstern Bot检测到融合蛋白;重组病毒经滴鼻途径免疫小鼠,2次免疫后产生明显的免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1000和1:100000;经小剂量攻毒实验显示重组腺病毒保护率为100％.结论 成功构建表达NA-C3d的非复制型重组腺病毒,该病毒可诱导较好的免疫效果.     

铝佐剂和免疫程序对Sabin IPV免疫原性影响的研究

目的 研究铝佐剂和免疫程序对不同配比的Sabin IPV免疫原性的影响.方法 用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备四批Sabin IPV,分别为中剂量无佐剂组、中剂量铝佐剂组、低剂量无佐剂组、低剂量铝佐剂组,采用0、1、2月和0、2、4月两种免疫程序对大鼠进行3针基础免疫,每针基础免疫一个月后采血,并检测免疫后血清中3个型别的中和抗体水平.结果 经过3针基础免疫后,各组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中和抗体几何平均滴度均显著提高,阳转率均达到100％.对不同组别间两种免疫程序比较无显著差异,但相同条件下,0、2、4月免疫程序可诱导产生更高的抗体水平.对相同免疫程序下不同组别进行比对,添加铝佐剂组与无佐剂组相比可以诱导更高的抗体水平.结论 铝佐剂和免疫程序可提高Sabin IPV免疫原性.     

PcDNA3/mIL-18对pcDNA3/VP1疫苗免疫效果的影响

目的观察pcDNA3/mIL-18对pcDNA3/VP1DNA疫苗免疫效果的影响。方法从烫伤小鼠肺部组织细胞中提取总RNA进行RT-PCR扩增;将扩增产物与pGEM-T载体连接,构建mIL-18原核表达质粒pGEM-T/mIL-18,酶切纯化mIL-18片断,构建真核表达质粒pcDNA3/mIL-18,将其作为基因佐剂和pcDNA3/VP1共免疫BALB/c小鼠。结果3次免疫后,共免疫组中和抗体滴度高于pcDNA3/VP1组;而病毒滴度低于pcDNA3/VP1组。用10LD50CVB3攻击后,共免疫组小鼠生存率为35%,高于pcDNA3/VP1组。结论PcDNA3/mIL-18对pcDNA3/VP1DNA疫苗的免疫效果有一定的增强作用。     

雷公藤甲素对关节炎大鼠心功能的影响及其作用机制探讨

  目的  观察关节炎大鼠心功能的变化及雷公藤甲素的干预作用,探讨其可能的作用机制。  方法  将40只大鼠随机分为正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、来氟米特（LEF）组和雷公藤甲素（TP）组。除NC组外,其余各组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备关节炎模型,制模第12天开始给药干预,TP组、LEF组大鼠分别灌胃其混悬液（TP 0.1 mg/mL,LEF 0.5 mg/mL）1 mL/100 g （体质量）,NC组、MC组大鼠相应时间灌胃等量的生理盐水,给药30 d。末次用药24 h后,采用左心室插管术检测大鼠心功能;应用酶联免疫吸附实验法测定血清超氧化物歧化酶(SOD）、丙二醛(MDA）、活性氧(ROS）、总抗氧化能力(T-AOC）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。采用荧光定量PCR法检测心组织Keap样蛋白1（Keap1）、肌腱膜纤维肉瘤(maf）、核因子-E2相关因子2(Nrf2）mRNA表达;采用Western blot法检测心组织Keap1、maf、Nrf2蛋白表达。  结果  ① 与NC组比较,MC组大鼠的心功能指标中心率（HR）、心脏指数（HI）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）升高,左心室压力上升和下降最大变化率（±dp/dtmax）降低(P均<0.01)。SOD、MDA、ROS、T-AOC、TNF-α升高,IL-10降低 (P均<0.01)。心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高（P<0.01）。② 与MC组比较,TP组大鼠HR、LVSP、HI、LVEDP降低,±dp/dtmax升高(P<0.01)。TNF-α、T-AOC、MDA、SOD、ROS下降,IL-10升高(P <0.05或 P <0.01)。TP组大鼠心组织Keap1、maf、Nrf2 mRNA和蛋白表达降低（P<0.01）。  结论  TP可改善关节炎大鼠心功能,其机制可能与提高心肌细胞抗氧化能力、减轻氧化应激损伤、抑制异常免疫炎症反应有关。     

免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响

目的观察不同免疫途径和佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。以不同免疫途径(皮下,腹腔,滴鼻)用P6蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(MDC、IL-2、弗氏佐剂),每组15只,采用皮下注射途径免疫。共免疫3次,间隔2周,用ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体,用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA检测IL-4和IFN-γ水平。结果在大肠埃希菌中成功表达P6蛋白。3种免疫途径相比,皮下途径免疫诱导的IgG抗体滴度为1 279.97±3.87,腹腔免疫组为427.16±3.08,滴鼻免疫组为253.98±3.30,差异有统计学意义(F=5.43,P<0.05)。采用皮下免疫途径时,MDC组诱导的IgG抗体滴度、IL-4水平分别为7 421.02±3.30和79.64±2.75,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。IFN-γ水平和脾淋巴细胞增殖指数与IL-2组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用MDC佐剂并采用皮下途径注射可使NTHiP6蛋白疫苗获得较好的免疫效果。     

重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用

目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力.     

流感疫苗黏膜佐剂研究进展

当前流感疫苗主要为肌内注射灭活疫苗和滴鼻减毒活疫苗.对于预防呼吸道传播的流感,抗原特异性黏膜免疫应答非常重要.现有资料显示,两种疫苗都存在不可避免的局限性,为解决这个问题,需要对黏膜佐剂流感疫苗进行深入的研究.此文对进入临床试验的流感疫苗黏膜佐剂进行综述.