微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

目的：建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术，对人iNOS-mRNA进行定量检测。方法：设计两条特异探针，其中一条为捕获探针，5'端连接氨基，能与微孔板表面的NOS基团共价结合，“竖直”地包被在微孔中，另一个为检测探针，3'端带有生物素标记。用脂多糖（LPS）刺激人外周血单个核细胞24 h后，提取巨噬细胞总RNA，进行RT-PCR扩增，PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内，并加入检测探针进行夹心杂交，最后加入亲和素-辣根过氧化物酶（AV-HRP）及底物，在450 nm波长检测杂交信号。结果：该方法检测iNOS-mRNA的灵敏度明显高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳；特异性高，RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现；精密度良好。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化，适合于iNOS-mRNA的定量检测。     

抗内毒素Fab'的制备

目的 研究抗内毒素卵黄免疫球蛋白(IgY)的活性片断Fab',探讨防治内毒素血症的新途径.方法 用内毒素(LPS)作为抗原免疫25周龄德国罗曼鸡,改良水溶法提取抗内毒素IgY,胃蛋白酶切后提取Fab'片断,光密度法测抗内毒素Fab'的浓度和含量、ELISA检测抗内毒素Fab'效价、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量及纯度. 结果 抗内毒素Fab'含量为4.2 mg/mL蛋黄液,效价为1∶51 200,纯度为92%,相对分子质量为44 000. 结论 抗内毒素Fab'产量大、效价高、特异性强.     

新生儿高间接胆红素血症患儿凝血象的研究及临床意义

目的　探讨凝血因子、血小板和新生儿高间接胆红素血症的关系 ;方法　用散射比浊法测定新生儿高间接胆红素血症患儿 6 0例和正常足月新生儿 2 0例的凝血酶原时间 (PT)、激活的部分凝血活酶时间 (APTT) ,同时检查血小板计数和肝功能 ;结果　新生儿高间接胆红素血症患儿的PT、APTT比正常足月新生儿组明显升高 ,有显著性差异 ,P值均 <0 .0 5 ,而血小板计数和肝功能两组间比较 ,无显著性差异 ,P值 >0 .0 5 ;结论　新生儿高间接胆红素血症患儿临床上常出现脐部渗血、穿刺部位出血不止等表现与新生儿血小板数量无关 ,而与PT、APTT延长有关 ,可能由于母乳喂养的推广和生后没有进行常规维生素K预防。因此 ,我们建议在治疗新生儿高胆红素血症的同时 ,要注意预防维生素K的缺乏。     

美罗培南等18种β-内酰胺类抗生素对产酶株的抗菌作用

目的评价美罗培南等18种β-内酰胺类抗生素对产酶株的抗菌作用及β-内酰胺酶稳定性.方法以琼脂二倍稀释法进行体外抗菌实验,采用紫外分光光度法比较β-内酰胺酶对抗生素的相对水解率.结果 AMOX/SBT 2:1联合对质粒介导的标准产酶株作用优于各单药;对产TEM型β-内酰胺酶菌株的抗菌活性强于产SHV型酶菌株;且强于AMP/SBT 2:1,与PIP/TAZ 8:1相近.第三代头孢菌素对产ESBLs菌株作用明显减弱甚至不敏感,AMOX/SBT等合剂则对产ESBLs菌株有较强抗菌活性,但对产染色体介导的D31、K1等菌株MIC值降低不明显.MRP、IMP对酶高度稳定.结论将碳烯青霉素美罗培南或AMOX/SBT等β-内酰胺类抗生素-酶抑制剂合剂用于产ESBLs菌株感染的治疗,可能具有良好的抗菌效果.     

福辛普利、卡托普利及缬沙坦对人血单核细胞表达组织因子的影响

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)中的福辛普利(fosinopril)、卡托普利(captopril)及I型血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)中缬沙坦(valsartan)对人血单核细胞受细菌脂多糖(LPS)刺激表达组织因子(TF)的影响。方法:从健康平产妇脐静脉取得脐血,分离单个核细胞,分组培养,以LPS(0.1 mg/L)刺激作为对照组,其它组分别再加入ACEI类药物fosinopril (20 mg/L)、captopril(20 mg/L)及valsartan(20 mg/L),孵育。冻融法收集细胞裂解液,用一期凝固法分析LPS诱导单核细胞表达的组织因子促凝活性。用RT-PCR技术,观察各组表达TFmRNA,并以GAPDH作为内参照进行半定量分析。结果和结论:Fosinopril,captopril及valsartan可下调人血单核细胞由LPS诱导的TFmRNA的表达,并显著降低促凝活性。     

组织激肽释放酶家族、激肽释放酶—激肽原—激肽系统及其重要应用

目前已明确，人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成，都定位于19q13．3—13．4，在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶—激肽原—激肽系统的研究近况，并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。     

PCR 检测产 A、B、E、F 和 G 型肉毒神经毒素梭菌的神经毒素基因

肉毒神经毒素分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ七个血清型，其中Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型引起人类肉毒中毒。为此，选取肉毒神经毒素的保守序列设计了一对简并引物，对１８株肉毒梭菌和８株相关梭菌进行了检测，表明该引物可特异扩增Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ和Ｇ型肉毒梭菌及产Ｅ型肉毒神经毒素的丁酸梭菌，产物为２６４ｂｐ，敏感性达１０ｐｇ细菌ＤＮＡ。采有酚－氯仿抽提法、固相载体捕获法和热裂解法处理产毒菌株，结果表明热裂解法安全、简便、快速，所制模板扩增效果明显。因此，此ＰＣＲ方法可用于快速敏感地检测引起人类肉毒中毒的梭菌。     

老年大鼠的海马神经元对微量注射Ach的敏感性

本工作观察了老年大鼠海马神经元对微量注射Ach(10μg/0.5μl)的敏感性。 实验在6只老年大鼠(大于30月龄)和5只年青大鼠(4～5月龄)上进行。结果表明:年青大鼠和老年大鼠的海马神经元对Ach的主要反应模式有所不同,前者多出现神经元放电明显增加的兴奋反应。后者多出现抑制反应,神经元的放电明显减少。此外,老年大鼠的海马神经元对Ach反应的持续时间(包括兴奋和抑制反应)也明显长于年青大鼠。本文对海马神经元敏感性和适应能力的改变可能是影响老年记忆的重要因素进行了讨论。     

经颅磁刺激安全性的实验研究

目的 :探讨重复经颅磁刺激的安全性。方法 :选用 3 6只健康Wistar大鼠 ,随机分为对照组 ,低频刺激组和高频刺激组 ,对低频组和高频组分别给予不同频率和强度的经颅磁刺激 ,然后对各组大鼠的行为、组织病理形态学、血清髓鞘碱性蛋白 (MBP)及神经元特异性烯醇化酶 (NSE)含量进行观察。结果 :低频刺激组 (5Hz)和高频刺激组 (2 0Hz)在刺激过程中均未出现异常活动 ,无肢体强直、阵挛等 ,脑组织形态学包括大体观察、普通光镜及电镜改变不明显 ,其血清MBP和NSE含量与正常对照组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。结论 :在一定强度和频率内经颅磁刺激是一种比较安全的方法     

蝮蛇抗栓酶致急性肾功能衰竭两例

<正> 近年来蝮蛇抗栓酶(简称抗栓酶)广泛应用于闭塞性血管病的治疗,具有降低血中纤维蛋白原、血液粘度、血小板聚集功能及粘附率、溶栓、扩管、改善微循环作用。常见头晕、过敏、乏力、一过性肌力减退,血小板减少等不良反应,有引起复视、斜视的报告,但致急性肾功能衰竭尚未见报道。我院应用抗栓酶近千例中发现两例,现报告如下: