Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

应用3H-TdR掺入法对SMMC-7721细胞株药敏试验条件的探讨与应用

目的探讨3H-TdR掺入法在进行SMMC-7721系细胞肿瘤药敏试验实验时的最佳实验条件.方法确定出3H-TdR掺入法药敏实验时的最适细胞浓度、最适实验药物浓度、3H-TdR掺入最适时间;在最适条件下采用3H-TdR掺入法测定肝癌SMMC-7721细胞株对临床常用的9种抗癌药物的敏感性.结果应用3H-TdR掺入法检测肝癌SMMC-7721细胞株药敏试验的最适实验细胞浓度为1×104个/孔,最适试验药物浓度为1×PPC,3H-TdR最适掺入时间为收集细胞前8 h;肝癌SMMC-7721细胞株对DDP、ADM、5-FU、CPT高度敏感,对MTX、VP-16、MMC、NVB低度敏感,对PYM不敏感.结论 3H-TdR掺入法可用于肿瘤药物敏感性测定并确定出它的最适实验条件.     

金针菇子实体多糖提取物对人肝癌SMMC—7721细胞的抑增殖作用

金针菇子实体经热水提取，乙醇沉淀，胰蛋白酶水解，Ｓｅｖａｇ法去除蛋白质，乙醇分级沉淀等处理得金针菇子实体多糖。研究了该多糖对人肝部ＳＭＭＣ－７７２１细胞生长曲线，有丝分裂指数及线粒体活性的影响。结果表明该多糖对体外培养的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞具一定抑制作用。     

Survivin反义核酸对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

Survivin是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一个成员，具有强大的抗细胞凋亡功能，在几乎所有肿瘤组织中特异性表达，而在正常成年终末分化组织中低表达甚至不表达。本研究针对Survivin mRNA序列设计了反义寡核甘酸，RT—PCR检测表明，该序列反义寡核苷酸可明显降低细胞中survivin基因的mRNA含量；Western印迹显示Survivin蛋白水平也被降低。MTT比色实验法检测结果说明人Survivin反义寡核苷酸抑制SMMC-7721细胞增殖，抑制率为43％，远高于无义寡核苷酸组和空白对照组。反义寡核苷酸还显著增强SMMC-7721细胞对于抗肿瘤药高三尖杉酯碱的敏感性，TUNEL法检测结果显示，在较低高三尖杉酯碱浓度下，反义寡核苷酸转染细胞的凋亡率明显高于其它对照组。本研究结果提示，survivin表达的靶向抑制有望应用于肿瘤的辅助治疗之中。     

β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅱ、Ⅴ表达的亚细胞结构定位研究

为了研究β-1,4-半乳糖基转移酶 和 (β-1,4-Gal T- and )蛋白表达的亚细胞结构定位 ,本实验构建了β-1,4-Gal T- 和 融合绿色荧光蛋白 (GFP)表达质粒 ,分别将构建的质粒转染到 PC12细胞和肝癌 772 1细胞中 ,在荧光显微镜下观察β-1,4-Gal T- 和 在其中表达的亚细胞结构定位。发现 ,β-1,4-Gal T- 和 主要表达在这两种细胞的细胞核旁的 Golgi复合体 ,说明它们主要分布在 Golgi复合体上。提示它们可能是在 Golgi复合体参与蛋白质的糖链修饰     

雷公藤内酯醇抗人肝癌SMMC-7721细胞活性研究

目的: 评价雷公藤内酯醇抗人肝癌SMMC-7721细胞的作用.方法: 采用体外细胞培养和SD大鼠体内肿瘤接种两种衡量方法,体外细胞培养检测指标包括细胞形态观察,台盼蓝染色,DAPI染色,DNA ladder;SD大鼠体内接种肿瘤指标检测用游标卡尺测量肿瘤体积大小.结果: 与对照组相比,体外培养肿瘤细胞在用药后活细胞大幅减少,体内接种肿瘤细胞在用药后,肿瘤块体积较小且增长缓慢,而对照组肿瘤体积却大幅增长.结论: 雷公藤内酯醇对体外和体内培养的人肝癌SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用和促凋亡作用.     

生物节律相关基因 Cry1与肝癌的相关性探讨

目的研究生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展的相关性.方法逆转录PCR、Northern blot和免疫组织化学方法检测Cry1在各种肿瘤细胞系、人正常组织及人肝癌与配对的癌旁组织中的表达.构建Cry1重组的真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721.生长曲线和软琼脂克隆形成试验检测Cry1过表达的SMMC-7721细胞的体外增殖速度.逆转录PCR检测与Cry1相互作用的生物节律基因在Cry1过表达的SMMC-7721中的表达.结果Cry1在人各种正常组织中均有不同程度的表达.Cry1在人肝癌癌旁组织中的表达水平高于癌组织中的表达.过表达Cry1对SMMC-7721细胞的体外增殖没有明显影响.结论生物节律相关基因Cry1与肝癌发生发展可能有一定的相关性.     

hTERT反义寡核苷酸对肝癌SMMC-7721细胞株细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的研究hTERT基因反义寡核苷酸（ASPSODN）对SMMC-7721细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法不同浓度的ASPSODN转染到SMMC-7721细胞株24h和48h后分别采用MTT法、TRAP-ELISA法检测SMMC-7721细胞的增殖活性及端粒酶活性。结果各浓度组的ASPSODN均能降低端粒酶活性,作用24h时,不同浓度均明显受抑,其中0.8μmol/L ASPSODN较0.2μmol/L和0.4μmol/L组抑制作用更明显（P〈0.05）,但再增大浓度抑制作用并不随着增加。作用48h后,抑制作用减弱,低浓度组（0.2、0.4μmol/L）端粒酶活性恢复到正常水平,而高浓度组（0.8、1.0、1.2μmol/L）抑制作用依然明显,端粒酶活性低于60%。MTT法检测显示,不同浓度ASPSODN组对SMMC-7721细胞的生长均有抑制作用,随着浓度的增加,抑制作用明显,但随着时间的延长,抑制作用增加不明显。结论 ASPSODN靶向hTERT能特异性抑制SMMC-7721细胞增殖,明显下调端粒酶活性,hTERT可能成为肝癌治疗的一个靶点。     

镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究

目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.     

环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721的体外毒性作用研究

目的 研究毒蕈环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721的体外毒性作用.方法 运用MTT法研究α-amanitin不同浓度和不同作用时间对体外传代培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制增殖作用,再进行环肽α-amanitin对细胞毒性作用的数学模型拟合. 结果研究发现,α-amanitin的使用剂量与细胞存活率存在负相关.7.12×10~(-4) mmol/L 和7.12×10~(-10) mmol/L α-amanitin对SMMC-7721作用24 h后,细胞存活率分别为71.25%和87.47%,作用效果分别与10 mmol/L和2.5 mmol/L 环磷酰胺相似.SMMC-7721细胞存活率平方根的反正弦值与α-amanitin浓度的对数变换值的相关和回归分析结果显示二者显著性相关,曲线拟合结果显示三次曲线模型拟合最好,回归方程为Y=31.257 7-12.902X-1.5117X~2-0.0616X~3.对SMMC-7721细胞存活率平方根的反正弦值与α-amanitin作用时间进行相关和回归分析,二者显著性相关,三次曲线模型拟合最好,对应回归方程为Y=89.668 5-8.616 6X+1.791X~2-0.1271X~3.结论 环肽a-amanitin对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖有显著抑制作用,且单位摩尔数的α-amanitin抑制作用远强于单位摩尔数的环磷酰胺.