地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长…

目的：建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达。方法：用体外转录法制备地高辛精（Ｄｉｇ）标记生长抑素ｃＲＮＡ探针，在４％多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交。结果：杂交阳性部位呈紫蓝色，位于胞浆，背景浅谈，反差强烈。含生长抑素ｍＲＮＡ细胞与以前所报道的生长抑素免疫反应细胞的形态、分布均一致。结论：Ｄｉｇ标记ｃＲＮＡ探针原位杂交法敏感、简便、迅速、可靠，可用于     

一枝蒿与混淆品千叶蓍草的鉴别

通过对一枝蒿、千叶蓍草的生药性状鉴别、粉末显微鉴别及紫外光谱鉴别，找出了两者的区别特征，对正确识别、使用这两种药具有一定的实用价值。     

脂质过氧化诱导动脉粥样硬化形成与纤连蛋白及P105基因的关系

目的初步研究阿霉素导致血管壁脂质过氧化状态下纤连蛋白( fibronectin,FN)及 P105基因表达的变化及其意义 ,并对动脉粥样硬化患者的临床康复介入提供理论依据. 方法将雄性 SD大鼠 40只随机分成 4组,每组 10只正常对照组,阿霉素低剂量组( 10 mg/kg),阿霉素中剂量组( 20 mg/kg),阿霉素高剂量组( 40 mg/kg),对后 3组分别一次性腹腔注射不同剂量的阿霉素,制备脂质过氧化模型.采用硫代巴比妥酸( Thiobarbituric acid ,TBA)荧光分光光度法测定大鼠血清脂质过氧化产物丙二醛含量.运用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)测定大鼠主动脉中的纤连蛋白 ( Fibronectin, FN)、 P105共活化因子 mRNA的表达. 结果对照组、阿霉素低、中、高剂量组大鼠血清丙二醛的含量分别为( 12.6± 3.8),( 17.4± 2.9),( 20.9± 3.4),( 24.5± 4.1) μ mol/L , 其中中、高剂量组大鼠血清中丙二醛含量高于对照组( t=2.27,P< 0.05; t=2.89, P< 0.01); RT-PCR结果表明 FN, P105 mRNA在不同剂量模型组呈不同程度的高表达. 结论在阿霉素导致血管壁损伤后,有 FN, P105基因的高表达,脂质过氧可能通过多种途径诱导动脉粥样硬化的形成.     

小鼠肝癌细胞H22对淋巴内皮细胞flt-4、c-fos、PCNA表达的影响

目的：初步探讨有自发淋巴转移特性的肝癌细胞对淋巴内皮细胞增殖的影响。方法：弗氏不完全佐剂诱导Balb／c小鼠腹腔良性淋巴管瘤，分离瘤体消化法体外培养淋巴内皮细胞；H22细胞接种Balb／c小鼠腹腔，收集腹水制成H22条件培养液，观察其对淋巴内皮细胞生长和表达flt-4、c-fos、PCNA的影响。结果：小鼠淋巴管瘤来源的淋巴内皮细胞可成单层贴壁培养，在内皮细胞完全培养液和H22条件培养液作用下可增殖达到或接近铺满状态，并阳性表达flt-4、c-fos、PCNA，普通培养液不能支持细胞生长，flt-4等染色为阴性：结论：淋巴内皮细胞增殖可能是癌细胞淋巴路转移的必要条件。     

P物质对肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子的表达调控及其意义

目的 探讨感觉神经肽P物质(SP)对离体培养的肉芽组织成纤维细胞表皮生长因子(EGF)表达的调控作用及特点。方法 采用甲醛注射的方法造成Wistar大鼠局部无菌性炎性反应，提取肉芽组织进行成纤维细胞原代培养；采用逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测SP对肉芽组织成纤维细胞EGF基因表达的调控作用，观察时间及剂量—效应关系；采用Western-blotting方法检测EGF蛋白表达情况，观察时间及剂量—效应关系。结果 10^-7mol/L SP可诱导成纤维细胞EGF mRNA的表达，在作用后6h与对照组比，差异有显著性(P＜0．01)；SP在10^-8-10^-6mol/L范围内可以显著促进成纤维细胞EGF mRNA表达，在10^-7mol/L达到峰值，10^-5mol/L时与对照组差异无显著性(P＞0．05)。10^-7mol/L SP作用12h后可检测到EGF蛋白明显表达增强(P＜0．01)，24h达高峰，48h后逐渐有所回落。SP在在10^-8--10^-5mol/L范围可诱导EGF蛋白的表达，均在10^-7mol/L剂量点达到峰值(P＜0．01)。结论 SP可诱导肉芽组织成纤维细胞EGF基因和蛋白的表达，且呈现出一定的时间和剂量特点，在SP调控创伤愈合的作用中具有重要意义。     

增生性瘢痕退行性变过程中的细胞凋亡和相关基因表达

增生性瘢痕发生的重要机制之一是成纤维细胞不能进入正常的程序性死亡,导致其异常增殖使细胞外基质过度沉积。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)的活化形式过度表达可诱导细胞凋亡。本实验对增生性瘢痕退行性变的不同时期采用原位缺口末端标记(TUNEL)法作细胞凋亡检测,探讨细胞凋亡及caspase-3在该过程中的作用机制。     

rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

目的：探讨人促血小板生成素(human thromlbopoietin，hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法：利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段，将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区，转化大肠杆菌M15，得到pQE30-TPO的工程菌，诱导目的蛋白表达、纯化。将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射，观察注射后不同时间血小板量的改变。结果：经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养，该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带。将纯化后的表达蛋白注射小鼠，结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用。结论：在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO，该产物具有促血小板生成的活性。     

Novel multi-probe RNase protection assay set for detection of endotoxin associated receptors gene expression

Objective: To construct the multi-probe ribonuclease protection assay (RPA) template set to be used for detecting expression patterns of MD-2, TLR4, CD14 mRNAs in human peripheral blood mononuclear cells. Methods : The designed cDNA fragments of the three genes were generated by polymerase chain reaction (PCR)using specific primers and directionally cloned into EcoR I and Hind III sites of expression plasmid pSP72 containing the T7/ promoter, the linearized plasmids was used as template to synthesize anti-sense RNA probes. Then we extracted total RNA from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and detected the dynamic expression patterns of the three genes with RPA method. Results: The proper sequence and orientation of the template set were confirmed by sequencing and the template set was successfully used to assay TLR4, MD-2 and CD14 mRNAs in human PBMC. The results showed that the three detected genes decreased transiently 1-3 hours after 100 ng/ml LPS stimulation. Conclusions: These new RPA multi-probe set provided valuable tool for the simultaneous quantitative determination of expression of TLR4, CD14 and MD-2 mRNAs in both constitutive and inducible types.     

hMSH2、hMLHl在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨错配修复基因hMSH2、hMLH1蛋白的表达与胃癌临床病理学特性之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测40例胃癌及50例胃炎组织中hMSH2、hMLH1蛋白的表达情况,并研究其与胃癌临床病理之间的关系。结果:40例胃癌标本中,hMSH2减低表达率为35%,hMLH1蛋白降低表达率为72.5%;淋巴结转移阳性的胃癌中,hMSH2、hMLH1蛋白表达明显减低。结论:hMSH2、hMLH1蛋白可能与早期胃癌和胃癌淋巴结转移有关。