人参多糖注射液对环磷酰胺增效减毒作用实验研究

目的：研究人参多糖注射液对肿瘤的抑制作用及其对免疫功能的影响,并探讨其对环磷酰胺（CTX）化疗的增效减毒作用。方法：以S180瘤株ICR小鼠作为病理模型,随机分为模型组、未造模组、CTX组、联合用药组。连续给药10天后,测定其抑瘤率、白细胞数、胸腺指数和脾指数。同时复制CTX 致免疫低下小鼠模型,考察人参多糖注射液对血清溶血素和单核细胞吞噬功能的影响。结果：人参多糖注射液和CTX 合用时,能显著提高抑瘤率;同时减轻CTX 的毒副作用;对CTX 致免疫低下功能有一定的改善功能。结论：人参多糖注射液对CTX 具有明显的增效减毒作用。     

复方大青颗粒急性毒性试验研究

目的观察复方大青颗粒一次给药后小鼠急性毒性反应情况,确定最大给药量。方法 ICR小鼠48只,进行复方大青颗粒急性毒性实验,首次给药1次,连续14天观察复方大青颗粒对小鼠体质量、进食量及饮水量的影响。结果给药后14天,复方大青颗粒对小鼠体质量、进食量和饮水量无明显影响。结论复方大青颗粒给药后连续观察14天,各项指标均未见异常,日最大给药量为56g/kg,相当于临床剂量的311倍。     

银莱汤对食积复合流感病毒感染小鼠肠黏膜sIgA、TNF-α、IL-10的作用

目的探讨银莱汤对食积复合流感病毒感染小鼠肠黏膜免疫屏障的作用机制,论证肺与胃肠同治理论的有效性,为食积呼吸道感染疾病的防治提供实验依据。方法小鼠随机分为正常组、感染组、食积组、食积感染组、食积治疗组、食积感染治疗组。实验周期8天。正常组、感染组喂饲普通饲料,其余各组于实验第1天至第4天喂饲高蛋白高热量饲料,并以牛奶溶液灌胃。感染组、食积感染组于实验第4天滴鼻感染流感病毒。食积治疗组、食积感染治疗组于实验第4天至第8天给予银莱汤治疗。取材观察实验各组肠黏膜分泌型免疫球蛋白A（sIgA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）水平。结果食积组与食积感染组小鼠的肠黏膜sIgA、TNF-α、IL-10水平较正常组显著下降（P<0.01）;食积治疗组sIgA、TNF-α、IL-10水平显著高于食积组（P<0.01）,其中TNF-α水平显著低于正常组（P<0.01）,sIgA、IL-10水平与正常组比较无显著性差异（P>0.05）;食积感染治疗组sIgA、TNF-α、IL-10水平显著高于食积感染组及正常组（P<0.01）。结论银莱汤能够增加肠黏膜分泌sIgA,适度调节细胞因子TNF-α、IL-10水平,对肠黏膜机械屏障和免疫屏障具有保护作用。     

益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白CREB的影响

目的观察益肾化浊方对SAMP8小鼠学习记忆能力及海马神经元突触关键蛋白环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的影响。方法取30只12月龄快速老化小鼠（SAMP8）,随机分为SAMP8组、盐酸多奈哌齐组及益肾化浊方组,另取10只正常老化小鼠（SAMR1）作为对照组。其中SAMR1组及SAMP8组不干预,益肾化浊方组给予益肾化浊方生药9.62mg/kg,盐酸多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.01mg/g,通过Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习记忆能力;通过电镜观察各组小鼠海马神经元突触微观形态学变化;采用Westernblot法检测各组小鼠海马组织CREB蛋白的表达。结果在定位航行实验中,SAMP8组小鼠的潜伏时间与游泳总路程比SAMR1组明显延长（P<0.05）,与SAMP8组小鼠比较,益肾化浊方组小鼠潜伏时间与游泳总路程明显缩短（P<0.05）;空间探索实验中,与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠穿越目标象限次数与t/t总明显减少（P<0.05）,益肾化浊方组穿越目标象限次数和t/t总较SAMP8组显著增加（P<0.05）,而盐酸多奈哌齐组穿越目标象限次数较SAMP8组显著增加（P<0.05）。电镜下SAMR1组小鼠海马神经元突触间隙清晰,突触前线粒体嵴和膜完整,突触小泡数量正常,大小均一。而SAMP8组突触间隙完全融合、模糊不清,突触前重度水肿,未见线粒体,突触小泡数量大量减少,大小不均一,益肾化浊方组突触间隙少部分融合,突触前水肿程度减轻,对于突触损伤的缓解程度优于盐酸多奈哌齐组。与SAMR1组比较,SAMP8组小鼠海马组织CREB表达明显减少（P<0.05）,益肾化浊方组与盐酸多奈哌齐组可上调CREB的表达（P<0.05）。结论益肾化浊方可明显改善SAMP8小鼠学习记忆能力,可能与上调海马组织内CREB蛋白的表达,保护海马神经元突触微观形态,进而改善神经元突触功能有关。     

CD133+细胞的干性鉴定及131I-CD133抗体对其体内外抑制作用

目的：研究CD133+细胞的干性鉴定和131I-CD133抗体在体内外对人肝癌CD133-HepG2干细胞的抑制作用。方法：氯胺T法制备并鉴定131I-CD133抗体;免疫磁珠（magnetic-activatedcellsorting,MACS）分选CD133-HepG2细胞;流式细胞仪（flowcytometry,FCM）检测分选前后CD133表达率;体外克隆形成实验、成球实验和体内成瘤实验验证其干细胞特性;将分选出的CD133细胞分组为CD133抗体、131I、131I-CD133抗体和131ICD133抗体4个组,MTT法检测不同处理后不同组中CD133细胞生长抑制率;成功构建人肝癌CD133-HepG2移植瘤模型;随机分4组,1次/2d给予尾静脉用药,共14次。4周后,处死小鼠,比较肿瘤的体积、质量、计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织病理学改变。结果：131I-CD133抗体标记率为89.34%,放化纯度为98.21%。流式显示分选前后CD133表达率分别为（1.78±0.54）%和（98.46±0.97）%。成球实验、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验显现CD133细胞相对于CD133-细胞更具有干细胞特性。131I-CD133抗体治疗组体外对细胞抑制率及体内抑瘤率明显高于其余各实验组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：131I-CD133抗体在体内外均能有效抑制人肝癌CD133-HepG2细胞的生长。     

四逆汤组成药物不同配伍对Lewis肺癌小鼠血清血管内皮生长因子表达的影响

目的研究温阳法代表方四逆汤及其组成药物不同配伍,对Lewis肺癌小鼠血清血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,及其抗肿瘤复发转移作用。方法采用正交设计确定四逆汤中附子、干姜、炙甘草的不同配伍,共分为17组,C57BL/6小鼠102只,按正交表分为17组,每组6只,Lewis肺癌小鼠模型制备的次日起,各组小鼠每天进行灌胃给药60mg/kg。第15天脱颈椎处死各组小鼠。瘤组织称重,计算抑瘤率。观察瘤组织病理变化,计数肺表面转移瘤结节数。用双抗体夹心ELISA法检测血清VEGF变化。结果四逆汤对小鼠Lewis肺癌的瘤重有不同程度的影响。第4、6、7、10组小鼠瘤重、瘤重指数明显低于对照组（第1组,P<0.05）和完整方组（第17组,P<0.05）,尤以第10组最明显（P<0.01）。就抑瘤率来说,第4、6、7、10组的抑瘤率也是各药物组中最高的。第5、7、11、16组在转移瘤结节数量上与第1组比较有统计学意义（P<0.05）,其中第7、11、16组的转移瘤结节数量少于第1组;在血清VEGF的表达上,第2、3、6、7、10、11、12、13、14、16、17组与第1组比较有显著差异（P<0.01）。结论四逆汤中附子、干姜、炙甘草均具有抑制Lewis肺癌小鼠细胞增殖的作用,其配伍以3∶1∶6的比例对Lewis肺癌小鼠细胞增殖抑制最明显。     

ACE/ACE2在AGT-REN双转基因高血压小鼠肾组织的表达变化及意义

目的:观察血管紧张素原(AGT)-肾素(REN)双转基因高血压小鼠肾脏组织病理改变及血管紧张素转化酶(ACE)/血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化,探讨ACE和ACE2在高血压肾损伤中的作用。方法:实验分为4组,随机选择10月龄野生型、AGT转基因、REN转基因以及AGT-REN双转基因雄性C57小鼠各6只。每组动物颈动脉插管检测平均动脉压(MAP),1h后处死小鼠;左侧肾脏置于10%中性甲醛固定,常规HE染色方法观察肾脏组织病理改变,免疫组化法观察肾脏ACE及ACE2的表达变化;右侧肾脏取出后放入蛋白裂解液中,提取蛋白,进行Westernblotting实验,观察肾组织中ACE和ACE2蛋白表达。结果:与野生型小鼠相比,AGT转基因小鼠MAP无明显变化(P>0.05),REN转基因小鼠MAP降低约15mmHg(P0.05),AGT-REN双转基因鼠肾组织ACE表达明显增高(P<0.05),而ACE2表达明显降低(P<0.05)。Westernblotting结果显示:与野生型小鼠相比,AGT转基因鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显变化;REN转基因鼠肾组织ACE表达无明显变化,ACE2表达稍降低(P<0.05);双转基因鼠肾组织ACE蛋白表达明显增强,ACE2蛋白表达水平显著降低,ACE/ACE2表达显著失衡。结论:AGT-REN双转基因可致小鼠恶性高血压,导致肾脏严重损伤;ACE/ACE2的表达失衡与血压改变密切相关,降低ACE或提高ACE2的表达可能对防治高血压具有重要意义。     

骨肉瘤裸鼠移植瘤模型中的仿血管生成

目的观察肿瘤仿血管生成在骨肉瘤裸鼠移植瘤中的结构特点。方法建立荷人骨肉瘤裸鼠模型,切取肿瘤标本制作组织切片,应用CD147免疫荧光标记染色骨肉瘤细胞,观察骨肉瘤中肿瘤仿血管生成的结构特点。结果骨肉瘤细胞CD147染色呈阳性,在肿瘤中心区域可清楚观察到肿瘤仿血管结构。结论在骨肉瘤裸鼠移植瘤中存在典型的肿瘤仿血管通道,参与肿瘤的血液供应。     

HTR反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞生长及对其致瘤能力的影响

目的:研究针对端粒酶RNA（HumantelomeraseRNA,HTR）的反义寡核苷酸（Antisenseoligodeoxynucleotide,AS-ODN）抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响。方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性。MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。电镜观察细胞超微结构的改变。将经AS-ODN处理的HNE-1细胞接种于裸鼠皮下,观察其致瘤情况。结果:HTR反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。AS-ODN降低了HNE-1细胞的致瘤能力,裸鼠成瘤时间延长,肿瘤生长速度变慢。结论:HTR反义寡核苷酸可通过抑制鼻咽癌HNE-1细胞端粒酶活性而抑制细胞的生长,并抑制其对裸鼠的致瘤能力。     

承气生血方对小鼠Lewis肺癌生长及转移的抑制作用

目的:观察承气生血方对小鼠Lewis肺癌肿瘤细胞生长及转移的抑制作用。方法:采用动物移植性肿瘤实验法,在C57BL小鼠腋皮下接种Lewis肺癌肿瘤细胞,口服给药后解剖动物,剥离肿瘤,计算肿瘤生长抑制率;取肺、肝、脾组织福尔马林固定,石蜡切片,HE染色后,显微镜观察肺转移结节,计算肿瘤转移抑制率,并观察肝脾形态学变化。结果:承气生血方1．2g·kg-1／d组与模型组比较肿瘤生长抑制率36．12％,p<0．01;1．2g·kg-1／d组及0．6g·kg-1／d组肿瘤转移抑制率分别为60％和62．5％,p<0．01。形态学观察,荷瘤小鼠肺转移瘤细胞核大,深染,形态不规则; 肝细胞肿胀,胞浆疏松,但未见肝组织有瘤细胞转移;脾细胞增大,排列不规则,可见大量多核巨细胞。结论:承气生血方具有抑制小鼠Lewis肺癌肿瘤细胞生长及转移作用。