Design,synthesis, biological evaluation,and 3D‐QSAR analysis of podophyllotoxin–dioxazole combination as tubulin targeting anticancer agents

The advancement of cancer‐fighting drugs has never been a simple linear process. Those drug design professionals begin to find inspiration from the nature after failing to find the ideal products by creative drug design and high‐throughput screening. To obtain new molecules for inhibiting tubulin, podophyllotoxin was adopted as the leading compound and 1,3,4‐oxadiazole was brought in to the C‐4 site of podophyllotoxin in this research. A series of seventeen podophyllotoxin‐derived esters have been achieved and then evaluated their antitumor activities against four different cancer cell lines: A549, MCF‐7, HepG2, and HeLa. Among all the compounds, compound 7c showed the best antiproliferating properties with IC₅₀ = 2.54 ± 0.82 μm against MCF‐7 cancer cell line. It was obvious that the content of ROS grew significantly in MCF‐7 in a way depending on the dosage. The time‐ and dose‐dependent cell cycle assays revealed that compound 7c could apparently block cell cycle in the phase of G2/M along with the upregulation of cyclin A2 and CDK2 protein. According to further studies, confocal microscopy experiment has certified that compound 7c could restrain cancer from growing by blocking the polymerization of microtubule. Meanwhile, compound 7c could be ideally integrated with the colchicine site of tubulin. In future, it would be feasible to selectively design tubulin inhibitors with the help of 3D‐QSAR. This means that it is hopeful to develop compound 7c as a potential agent against cancer due to its biological characteristics.     

鬼臼毒素衍生物CIP-36抗肿瘤多药耐药的机制

研究鬼臼毒素衍生物CIP-36对耐药人口腔鳞状上皮癌细胞KBV200的抗肿瘤活性及其作用机制。采用MTT法观察CIP-36对多种肿瘤细胞和正常细胞的体外抑制作用以及对KB和KBV200细胞生长曲线的作用,Hoechst荧光染色进行细胞凋亡检测,RT-PCR检测CIP-36对KB及KBV200细胞p53、p21、caspase-3、bax、mdr-1和bcl-2的mRNA表达的影响,免疫组织化学检测观察CIP-36对KBV200细胞P-gp表达的影响。结果表明,CIP-36对多种肿瘤细胞均有较好的抑制作用,且对耐药株细胞均有明显抑制作用。荧光染色结果显示,CIP-36可诱导KBV200细胞凋亡。同时CIP-36可剂量依赖性地增加KBV200及KB细胞的p53、p21、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低mdr-1和bcl-2的mRNA表达,与对照组比较差异均有统计学意义。免疫组织化学检测结果显示,CIP-36显著降低KBV200的P-gp表达。提示CIP-36可能通过影响多个与肿瘤耐药相关基因和蛋白的表达来克服肿瘤细胞株的多药耐药性。     

桃儿七组织培养体系的建立及鬼臼毒素的检测

目的 建立桃儿七组织培养体系及其鬼臼毒素的提取检测方法。方法 以桃儿七成熟分离胚为材料,研究了不同浓度激素、活性炭(AC)对无菌苗诱导的影响;以桃儿七无菌苗切除后约 2.0 cm 的根茎为材料,考察不同浓度激素对根继代及生长发育的影响,并定期对继代根、叶(叶柄)及培养基进行鬼臼毒素的提取及 HPLC 法检测。结果 分离胚在 MS+2.0% 蔗糖+0.4% 琼脂+1.0 mg/mL GA3+1.0 g/LAC 的培养基培养 20 d 后,无菌苗诱导率为 92.0%,无菌苗生长发育良好;切除后约 2 cm 的根茎接种在 MS+2.0% 蔗糖+0.4% 琼脂+1.0 g/L AC+1.0 mg/mL IBA 继代 40 d 后,根长 11.59 cm,植株生长发育良好;对继代根、叶(叶柄)及培养基进行鬼臼毒素的提取及 HPLC 法检测显示,鬼臼毒素量大小依次为根＞培养基＞叶(叶柄),50 d 后分别为 33.17、12.97、4.55 μg/mL。     

微柱离心-HPLC法测定鬼臼毒素醇质体的包封率研究

目的 建立鬼臼毒素醇质体包封率的测定方法。方法 采用葡聚糖凝胶微柱离心法分离醇质体与游离药物;用HPLC法测定醇质体中鬼臼毒素,计算包封率。结果 在本法选择的色谱条件下,鬼臼毒素得到良好的分离,辅料不干扰测定,鬼臼毒素在2.5～101.1 μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好。微柱离心法能有效的将鬼臼毒素醇质体与游离药物分离,用该方法测得鬼臼毒素醇质体的包封率为51.03%,RSD为1.24%(n=3)。结论 建立了微柱离心-HPLC法,该方法便捷,准确,重现性好,可用于测定鬼臼毒素醇质体的包封率。     

高效液相色谱法测定窝儿七中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素

目的 建立HPLC测定窝儿七中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素的方法。方法 采用HPLC,Diamonsil(钻石)C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,甲醇-0.4％的冰醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长：290 nm,流速：1.0 mL·min,柱温30 ℃。结果 槲皮素、鬼臼毒素、山柰素的线性范围分别为0.023~0.287 μg（r=0.999 9）、0.208~2.6 μg（r= 0.999 9）、0.036 1~0.451 μg（r=0.999 9）,平均回收率分别为99.64%（RSD=0.83%）、100.04%（RSD=0.61%）、99.88%（RSD=1.19%）。结论 本实验所建立的方法灵敏、准确、重复性好,可用于窝儿七中槲皮素、鬼臼毒素、山柰素的测定。     

脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备及膜剂中鬼臼毒素含量的测定

目的 筛选出脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂制备的最佳配方,制备脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂并测定膜剂中鬼臼毒素的含量。方法 选择制备壳聚糖膜剂所需的壳聚糖、醋酸、明胶作为三个因素,脂质体鬼臼毒素作为空白因素,每个因素三水平进行正交实验设计,根据正交实验设计的结果制备不同配方的膜剂,将膜剂的粘附性、溶解性作为评价指标进行综合评价,确定膜剂制备的最佳配方。采用紫外分光光度法对所制备膜剂中鬼臼毒素的含量进行测定,检测波长为292 nm。结果 对各配方膜剂的综合评价进行统计分析,以2%壳聚糖、1%醋酸、2%明胶、2.8%脂质体鬼臼毒素为配方制备的脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂的综合评价最高;紫外分光光度法检测结果显示鬼臼毒素在5~25 μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 89),平均回收率为99.7%(n=5),相对标准误差(RSD)=1.11,膜剂中鬼臼毒素平均含量为10.46%,RSD=1.61%。结论 根据正交实验结果制备的膜剂,在粘附性、溶解性方面均符合要求,紫外分光光度法测定脂质体鬼臼毒素壳聚糖膜剂中鬼臼毒素含量快捷、准确,膜剂中鬼臼毒素的含量基本符合要求,鬼臼毒素在膜剂中的分布较为均一。     

鬼臼毒素涂膜剂的制备及质量控制

目的 :研究鬼臼毒素涂膜剂的制备及其质量控制方法。方法 :采用正交函数法筛选鬼臼毒素涂膜剂的处方 ,二阶导数紫外分光光度法对其进行含量测定。结果 :所选处方的鬼臼毒素在80～180μg/ml范围内 ,浓度与二阶导数光谱301 5nm～315nm波长处的峰面积呈线形关系 ,C=1052 41Au—8 74 ,r=0 9999。结论 :鬼臼毒素涂膜剂的制备工艺简单 ,质量控制方法可行     

C环不饱和因素对鬼臼脂素类似物化学性质的影响(英文)

鬼臼酮、4β-羟基-2,3-不饱和鬼臼脂素和4-去氧-4β-叠氮基-2,3-不饱和鬼臼脂素在不同介质中分别转变为脱氢鬼臼脂素、4-去氧脱氢鬼臼脂酸和4-去氧-4-氨基脱氢鬼臼脂素。这些化学特性提示在处理类似结构鬼臼脂素衍生物时应注意选择适当的介质。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物     

UFLC-MS/MS测定大鼠皮下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度

目的 建立和验证一个测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素浓度的超高速液相色谱-质谱联用(UFLC-MS/MS)方法.方法 微透析样品中加入依托泊苷为内标,经乙酸乙酯液,液提取后进行UFLC-MS/MS测定.采用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱(2.1 mmx50mm,3.5μm),柱温为室温,以乙腈-10mmol/L乙酸铵(40:60,V/V)为流动相,流速0.3ml/min;质谱采用正离子模式和多反应离子监测方式进行检测.结果 用于定量分析的离子对分别为m/z432.7→397.3(鬼臼毒素)和589.5→229.5(依托泊苷,内标),鬼臼毒素标准曲线线性范嗣为2.0～1000ng/ml.最低定量下限及最低检测限分别为2.0nedml和0.7 ng/ml.日内和日问精密度及准确度均小于15%.结论 该方法灵敏度高、专属性强,可用于测定大鼠皮肤下及血液微透析样品中鬼臼毒素含量.