不同糖代谢状态人群血清CTRP3和25(OH)D水平及其与胰岛素抵抗的关系

目的：测定不同糖代谢状态人群血清中C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3（CTRP3）和25羟维生素D[25（OH）D]的水平,探讨其影响因素并分析其与胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：选择初诊2型糖尿病（T2DM）患者44例（T2DM组）、糖耐量减低（IGT）患者42例（IGT组）和体检健康者54人（正常对照组）,测定各组受试者血清中CTRP3、空腹静脉血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、空腹胰岛素（FIns）和25（OH）D水平,计算体质量指数（BMI）、稳态模型IR指数（HOMA-IR）、稳态模型胰岛素分泌指数（HOMA-β）,两因素之间相关性分析采用Pearson相关分析法,采用多元逐步回归分析法分析HOMA-IR和HOMA-β的影响因素。结果：与正常对照组比较,IGT组患者血清中HDL-C、25（OH）D水平和HOMA-β值明显降低（P<0.05）,T2DM组患者血清中FPG、HbA1c、TG、TC、FIns水平和BMI、HOMA-IR值明显升高（P<0.05）,而血清中CTRP3、HDL-C、25（OH）D水平和HOMA-β值明显降低（P<0.05）;与IGT组比较,T2DM组患者血清中FPG、HbA1c、TG、FIns水平和HOMA-IR值明显升高（P<0.05）,血清中HDL-C水平和HOMA-β值明显降低（P<0.05）。不同糖代谢状态人群血清中CTRP3水平与HbA1c、FIns水平和HOMA-IR呈负相关关系（r=-0.391,P<0.05;r=-0.198,P<0.05;r=-0.481,P<0.05）;25（OH）D水平与TG、FPG和HOMA-IR呈负相关关系（r=-0.209,P<0.05;r=-0.406,P<0.05;r=-0.306,P<0.05）,与HOMA-β呈正相关关系（r=0.329,P<0.05）。HbA1c和CTRP3为HOMA-IR的独立影响因素,25（OH）D、FPG和HbA1c为HOMA-β的独立影响因素。结论：血清CTRP3和25（OH）D水平与IR呈负相关关系,在糖尿病发生发展过程中起抑制作用。     

卵巢癌风险预测模型在上皮性卵巢癌早期诊断中的应用价值

目的：探讨卵巢癌风险预测模型（ROMA）对上皮性卵巢癌患病风险的评估价值及与患者临床病理分期的关联性,为上皮性卵巢癌的临床诊疗及预后分析提供依据。方法：回顾性分析经术后石蜡切片病理确诊的135例卵巢肿瘤患者的临床资料,将其分为卵巢良性肿瘤组（n=66）、上皮性卵巢癌组（n=58）和非上皮性卵巢癌组（n=11）。根据各组患者术前检测的血清人附睾蛋白4（HE4）和糖类抗原125（CA125）水平计算其ROMA值,根据各组患者HE4、CA125和ROMA临界值计算HE4、CA125和ROMA阳性率,分析卵巢癌患者血清HE4、CA125和ROMA阳性率与患者临床分期之间的关系,评价其对卵巢肿瘤患者的诊断效能。结果：上皮性卵巢癌组患者血清HE4、CA125水平和ROMA值均明显高于卵巢良性肿瘤组及非上皮性卵巢癌组（P<0.05）。上皮性卵巢癌组患者HE4、CA125和ROMA阳性率均高于卵巢良性肿瘤组（P<0.01）,并随着临床分期的升高而升高。与HE4和CA125阳性率比较,卵巢良性肿瘤患者ROMA阳性率最低,在各期上皮性卵巢癌中ROMA阳性率均高于CA125阳性率。ROMA在绝经后卵巢肿瘤患者组的敏感度及阴性预测值均高于绝经前卵巢肿瘤患者组（P<0.05）,而特异度及阳性预测值在绝经前及绝经后卵巢肿瘤患者组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。3项指标中,ROMA的各项诊断效能指标最高,CA125的各项诊断效能指标最低。结论：ROMA对上皮性卵巢癌风险的诊断价值高于CA125或HE4,对绝经后患者具有更好的诊断价值,可提高卵巢癌的早期诊断效能。     

电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响

目的：靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白（ATRX）,检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法： 3条ATRX-shRNA和阴性对照（Control-shRNA）的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA₁-HeLa、shA₂-HeLa、shA₃-HeLa和shCon-HeLa,采用Western blotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA₁-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果： shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA₁-HeLa、shA₂-HeLa和shA₃-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8 Gy剂量照射后1、6和24 h,shCon-HeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24 h时表达量最高,且8 Gy照射后1、6和24 h表达量均较高。4 Gy照射后0~6 h,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组γH2AX焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,而后逐渐降低,但在6 h焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）;Rad51焦点数与γH2AX焦点数变化相一致,与shCon-HeLa组比较,shA₁-HeLa组Rad51焦点数在1 h明显升高（P<0.05）,在6 h时shA₁-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P<0.01）。4 Gy照射后0~16 h,shA₁-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论：成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。     

生物信息学在三阴性乳腺癌mi RNA生物标志物筛选中的应用

目的：通过医学癌症数据库（TCGA）和基因表达数据库（GEO）分析三阴性乳腺癌（TNBC）中差异表达微小RNA（miRNAs）并预测其靶基因,探讨其生物学功能和分子机制,寻找TNBC预后相关靶点。方法：下载TCGA数据库中343项关于乳腺癌组织与癌旁组织相关的miRNAs表达数据,筛选乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNAs;GEO数据库验证miRNAs在TNBC细胞系的26种细胞株中的表达以及TNBC患者经过化疗前后血清中miRNAs的变化;通过基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集、蛋白质互作网络分析候选miRNAs的靶基因功能。结果： TCGA数据库,在乳腺癌组织中的miR-21-5p表达水平明显高于相邻癌旁组织（logFC=5.557,P<0.01）;GEO数据库筛选,miR-21-5p在TNBC细胞系中表达水平明显升高,在26种TNBC细胞株中超过20种细胞株相对表达水平>70 000,TNBC患者经联合化疗后miR-21-5p的表达水平明显降低（logFC=-5.07,P<0.01）;GO分析,miR-21-5p主要在DNA复制、转录以及血管重构等方面发挥调控作用;KEGG富集分析,miR-21-5p主要通过促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）和转化生长因子β（TGF-β）等通路影响TNBC的发生发展。结论： miR-21-5p在TNBC组织中表达上调,在TNBC进展中发挥正调控作用,可能成为鉴定TNBC相关预后程度的关键生物学标志物。DUSP8等可能作为miR-21-5p的靶基因参与调控TNBC的发生发展。     

肉桂醛促进子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的机制

【目的】探讨肉桂醛对子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响及其作用机制。【方法】选取肉桂醛作用子宫内膜癌RL95-2细胞,噻唑蓝（MTT）比色法检测子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖活性和肉桂醛的IC50,Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测RL95-2细胞的凋亡百分率,Western blot检测肉桂醛对RL95-2细胞Cleavedcaspase-3、Caspase-3、NF-κB、IL-6和IGF-R蛋白表达的影响。【结果】肉桂醛可降低子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖率,与药物浓度和作用时间有关;与溶剂对照组比较,肉桂醛组（0.29、0.59和1.20mg/mL）作用48h后RL95-2细胞的凋亡百分率明显增高（P<0.01）,出现典型的凋亡小体,Cleavedcaspase-3蛋白的表达明显增加（P<0.01）,Caspase-3蛋白的表达无明显变化（P>0.05）,而NF-κBp65、IL-6和IGF-R蛋白的表达均明显降低（P<0.05）。【结论】肉桂醛可降低RL95-2细胞NF-κB·p65、IL-6和IGF-R蛋白的表达,促进RL95-2细胞的凋亡,从而起到抗子宫内膜癌作用。     

MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p（miR-30a-5p）对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照（Control组）。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素（N-cadherin）、α-连环蛋白（α-Catenin）和泛素水解酶22（USP22）表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Western blot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82（862.26~843.11）倍（P＜0.01）。30a-5p组侵袭细胞数量8.17（8.32~8.03）明显低于Control组（P＜0.01）。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因（P＜0.01）。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组（P＜0.01）。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,N-cadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。     

泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

复方黄芪养心合剂对大鼠缺血心肌缝隙连接蛋白CX43磷酸化的影响

目的观察复方黄芪养心合剂(CAMNH)对冠状动脉左前降支结扎所致心肌缺血模型大鼠缝隙连接蛋白CX43的影响。方法 50只SD大鼠采用随机数字表法分为CAMNH大剂量组28g(14mL·kg~(-1)·d~(-1))、CAMNH小剂量组7g(3.5mL·kg~(-1)·d~(-1))、琥珀酸美托洛尔(MSSRT)组9.5ug(7mL·kg~(-1)·d~(-1))、模型组、假手术组五组,每组10只,给予相应药物灌胃后采用冠状动脉左前降支结扎术造模,结扎1h后腹主动脉取血,HE染色观察心肌细胞形态改变;采用ELISA法检测心肌肌钙蛋白I(cTn-I)和肌钙蛋白T(cTn-T)水平;采用Western blot(WB)法检测磷酸化的缝隙连接蛋白CX43表达。结果 cTn-I、cTn-T:与假手术组相比,模型组、MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH大剂量组均升高[cTn-I:(144.94±28.83)ng/L、(85.48±24.06)ng/L、(115.07±21.34)ng/L、(81.63±16.89)ng/L比(58.50±9.53)ng/L;cTn-T:(144.33±20.29)ng/L、(97.89±11.78)ng/L、(121.33±15.02)ng/L、(100.20±5.66)ng/L比(77.40±12.52)ng/L,P0.05或P0.01];MSSRT组与模型组比较升高幅度明显减少(P0.01);CAMNH大剂量组与假手术组比明显增高,与CAMNH小剂量组、模型组比增高程度减少(P0.05或P0.01)。WB结果:与假手术组相比,模型组、MSSRT组、CAMNH小剂量组、CAMNH大剂量组CX43表达减少[(0.07±0.01)、(0.13±0.01)、(0.10±0.02)、(0.13±0.02)比(0.18±0.02),P0.01];MSSRT组与模型组比较明显增多[(0.13±0.01)比(0.07±0.01),P0.01];CAMNH小剂量组与模型组比较略升高[(0.10±0.02)比(0.07±0.01),P0.01],与假手术组、MSSRT组相比明显减少[(0.10±0.02)比(0.18±0.02)、(0.13±0.01),P0.05];CAMNH大剂量组与假手术组比明显减少[(0.13±0.02)比(0.18±0.02),P0.01],与CAMNH小剂量组、模型组比增高程度减少[(0.13±0.02)比(0.10±0.02)、(0.07±0.01),P0.05]。结论复方黄芪养心合剂能降低冠状动脉左前降支结扎所引起的心肌缺血损伤,作用与琥珀酸美托洛尔缓释片相当。     

氯吡格雷联合阿托伐他汀对急性脑梗死患者血清高敏C反应蛋白及血脂的影响

目的探讨氯吡格雷联合阿托伐他汀对急性脑梗死患者血清高敏C反应蛋白及血脂的影响。方法选取2017年1月～2018年1月于我院住院治疗的80例急性脑梗死患者作为研究对象,所有患者采用不同治疗方法随机分为观察组和对照组,每组各40例,两组患者均予抗凝、控制脑水肿、胰岛素控制血糖、降压及保护脑组织细胞等常规治疗,阿司匹林抗血小板治疗。观察组同时予以氯吡格雷75 mg/次,每天3次,阿托伐他汀10 mg/次,每天3次,两组均连续治疗14 d。比较两组患者治疗前后血清高敏C反应蛋白及血脂水平。结果治疗后,观察组患者治疗后的hs-CRP水平为(6.45±1.22)mg/L,对照组患者治疗后的hs-CRP水平为(9.61±1.32)mg/L,两组患者治疗后hs-CRP水平比较,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,观察组患者治疗后的TC水平为(3.42±0.73)mmol/L,TG为(1.42±0.13)mmol/L,LDL-C为(2.13±0.11)mmol/L,HDL-C为(1.40±0.21)mmol/L,对照组患者治疗后TC水平为(4.12±0.25)mmol/L,TG为(1.63±0.31)mmol/L,LDL-C为(2.57±0.25)mmol/L,HDL-C为(1.13±0.31)mmol/L,两组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论氯吡格雷联合阿托伐他汀可降低急性脑梗死患者血清高敏C反应蛋白,调节血脂水平,从而抑制炎症反应,提高临床疗效。     

MiR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及生物信息学分析

目的:探讨miR-199a-3p在胰腺癌中的表达水平及作为胰腺癌的诊断指标的意义,并进行生物信息学分析。方法:从GEO数据库收集胰腺癌和正常胰腺组织中miR-199a-3p的数据。汇总数据绘制受试者工作特征曲线,进行Meta分析,采用生物信息学方法预测miR-199a-3p的靶基因,并对靶基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果:收集到6个GEO数据,4个数据的ROC曲线表现出显著的诊断意义,Meta分析结果显示miR-199a-3p在胰腺癌中表达水平高于正常胰腺组织,差异有统计学意义（P<0.001）。预测到221个miR-199a-3p潜在的靶基因,其功能主要富集在基因表达的调控,细胞代谢的调控,蛋白质域特异性结合等生物学过程（P<0.001）,KEGG分析结果显示主要集中在PI3K-Akt通路、黏着斑、肌动蛋白细胞骨架调控、癌症通路、Hippo通路、鞘脂通路、ErbB通路、MAPK通路等通路（P<0.05）。结论:相比正常胰腺组织,miR-199a-3p在胰腺癌为高表达,可作为胰腺癌的一个潜在诊断指标,并可能在胰腺癌的发生发展中起到重要作用,为胰腺癌的研究和治疗提供了新的方向。