Three residues at the interface of factor XI (FXI) monomers augment covalent dimerization of FXI

Summary.  Background:  Human plasma factor XI is a homodimer, with each monomer comprising a catalytic domain and four homologous 'apple' domains. The monomers bind to each other through non-covalent bonds and through a disulfide bond between Cys321 residues in apple 4 domains. Objective:  To identify residues essential for dimerization in the FXI monomer interface. Methods:  Specificity-determining residues in apple 4 domains were sought by sequence alignment of FXI and prekallikrein apple domains in different species. Specific residues identified in apple 4 domains were mutagenized and expressed in baby hamster kidney (BHK) cells for evaluation of their effect on FXI dimerization, analyzed by non-reduced sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis and size-exclusion chromatography. Results:  Among the 19 residues of the FXI monomer interface, Leu284, Ile290 and Tyr329 were defined as specificity-determining residues. Substitutions of these residues or pairs of residues did not affect FXI synthesis and secretion from transfected BHK cells, but did impair dimerization, despite the presence of cysteine at position 321. The double mutant 284A/290A yielded predominantly a monomer, whereas all other single or double mutants yielded monomers as well as disulfide-bonded dimers. Conclusions:  The data suggest that Leu284, Ile290 and Tyr329 in the interface of FXI monomers are essential for forming non-covalently bonded dimers that facilitate formation of a disulfide-bonded stable FXI dimer.     

中药吴茱萸中生物碱类成分的HPLC指纹图谱

目的研究中药吴茱萸中生物碱类成分的HPLC特征指纹图谱。方法应用HPLC法分析吴茱萸药材生物碱类成分色谱图。色谱柱:Agilent Extend C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水系(水-四氢呋喃-乙酸,体积比48∶1∶0.1);洗脱方式:线性梯度洗脱;柱温:35℃;流速:1 mL.min-1;检测波长:240 nm;进样量:20μL。理论板数按吴茱萸次碱计算不低于3 000。结果10批不同来源的吴茱萸药材所含生物碱类成分均得到很好的分离,获得14个共有特征峰。结论HPLC指纹图谱法能较好地识别吴茱萸药材,为吴茱萸的质量控制提供了方法学依据。     

养心颗粒对急性心肌梗死犬血管内皮细胞及心肌损伤的保护作用

目的观察养心颗粒(YXG)对急性心肌梗死犬血管内皮细胞及心肌损伤的保护作用。方法采用结扎冠脉前降支的方法,复制急性心肌梗死模型。分别测定冠脉结扎前以及药后不同时间点血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、P-选择素及肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)的变化。采用N-BT染色法测定心肌梗死面积。结果YXG治疗组与模型组比较,血浆CK-MB、MDA、ET、P-选择素降低(P<0.05~0.01),而血浆SOD和NO升高(P<0.05~0.01),梗死面积明显缩小(P<0.01)。结论YXG对急性心肌梗死犬心肌及血管内皮细胞的损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化、改善血管内皮细胞的分泌功能及抑制血小板活化有关。     

苦木生物碱的化学研究

目的研究苦木生物碱的化学成分。方法用硅胶和Sephadex LH-20进行色谱柱分离,通过理化性质、光谱数据鉴定结构。结果鉴定了16个生物碱,分别是:5-甲氧基-铁屎米酮(Ⅰ)、11-羟基-铁屎米酮(Ⅱ)、铁屎米酮(Ⅲ)、4,5-二甲氧基-铁屎米酮(Ⅳ)、4-甲氧基-5-羟基-铁屎米酮(Ⅴ)、3-甲基-铁屎米-2,6-二酮(Ⅵ)、1-甲酰-4-甲氧基-β-咔巴啉(Ⅶ)、1-甲氧基-β-咔巴啉(Ⅷ)、1-乙基-4,8-二甲氧基-β-咔巴啉(Ⅸ)、1-甲氧甲酰-4-羟基-β-咔巴啉(Ⅹ)、1-甲基-4-甲氧基-β-咔巴啉(Ⅺ)、1-乙氧甲酰-β-咔巴啉(ⅩⅡ)、1-甲酰-β-咔巴啉(ⅩⅢ)、1-甲氧甲酰-β-咔巴啉(ⅩⅣ)、1-乙基-4-甲氧基-β-咔巴啉(ⅩⅤ)和1,2,3,4-tetrahydro-1,3,4-trioxo-β-carboline(ⅩⅥ)。结论化合物Ⅺ是首次从自然界植物中分离得到,化合物Ⅱ、Ⅷ、ⅩⅤ是首次从该属植物中分离得到。     

海洋放线菌N331生物碱活性组分的研究

目的 对海洋放线菌N331发酵液中的抗菌活性成分进行研究.方法 采用大孔树脂吸附、硅胶柱层析分离纯化抗菌活性成分,并对其理化性质和生物活性进行初步研究.结果 从海洋放线菌N331的发酵液中分离到一种结晶状活性组分,鉴定为生物碱类物质,由几种极性相近的化合物组成;其对金黄色葡萄球菌敏感茼及其耐药菌的最小押菌浓度均为4μg·mL-1,对口腔上皮癌KB细胞和肺癌A549细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为2.0,3.0μg·mL-1,与顺铂的抗肿瘤效价相当.结论 海洋放线菌N331能产生抗茸及细胞毒性较强的生物碱类活性物质.     

氯乙烯暴露对作业工人染色体的损伤

目的 探讨在我国目前职业卫生标准条件下,接触氯乙烯(VCM)能否对作业工人染色体造成损伤. 方法 选择上海某化工厂205名VCM作业工人为接触组,并以41名不接触VCM的健康志愿者为对照组;胞质分裂阻滞微核试验分析两组工人外周血淋巴细胞微核率.因素分析采用广义线性模型中的Poisson回归分析. 结果 VCM接触组工人和对照组人群外周血淋巴细胞微核率分别为(3.58±2.33)‰和(1.22±1.19)‰.Poisson回归分析VCM暴露与微核率之间的关系,最后进入方程的变量为VCM暴露、性别和年龄.在控制潜在的混杂因素如性别、年龄、吸烟和饮酒后VCM暴露的校正FR值及95%CI为3.104 3(2.352 3,4.194 6).以男性作为参比,女性FR值为1.182 3,95%CI为(1.024 9,1.362 5).年龄作为连续变量FR值为1.016 4,95%CI为(1.006 4,1.026 4). 结论 在当前我国职业卫生标准情况下,VCM暴露仍能够对作业工人遗传物质造成损害.     

洋金花总生物碱抗氧化作用的实验研究

本文探讨了洋金花总生物碱对家犬肠缺血再灌注模型的影响。结果表明，洋金花总生物碱能提高内源性ＳＯＤ活力；抑制体内脂质过氧化物的生成，使血液和肠组织ＭＤＡ含量显著降低，亦使肠组织损伤减轻。提示洋金花总生物碱具有明显的抗氧化作用。     

高速逆流色谱技术制备石杉碱甲单体

目的从千层塔植物提取物中分离制备石杉碱甲单体。方法利用高速逆流色谱技术,通过寻找合适的两相溶剂体系及工艺参数,研究及讨论石杉碱甲分离制备的新方法。结果以n-Hexane/n-BuOH/H2O(4∶1∶5,V/V/V)为两相溶剂体系,在优化的工艺参数条件下,利用高速逆流色谱技术,获得了单体纯度为98.6%(HPLC)的石杉碱甲单体。结论利用高速逆流色谱技术成功地从千层塔植物提取物中分离制备了纯度高于98%的石杉碱甲单体。     

莲子心4种提取方法的比较研究

目的:优选莲子心的提取工艺。方法:以总生物碱含量、干浸膏得率为指标,对水提取(WE)法、水提取醇沉(WAE)法、半仿生提取(SBE)法、半仿生提取醇沉(SBAE)法提取莲子心中成分进行比较研究,考察不同的提取方法对考察指标的影响,并计算综合评价指标Y值。结果:综合评价指标Y值大小顺序依次为SBE法>WE法>SBAE法>WAE法。结论:莲子心的提取以SBE法为佳。     

海洋真菌96F197抗癌活性成分研究

目的对海洋真菌代谢产物中抗癌活性成分进行分离和结构鉴定,并对得到的化合物进行体外抗癌活性评价。方法用硅胶、SephedaxHL-20、ODS柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,通过化合物的理化性质及各种光谱技术鉴定化合物的结构。采用MTT法测定化合物体外抗癌活性。结果从真菌菌丝体的丙酮提取物中分离得到两个生物碱类化合物和两个甾醇类化合物,分别鉴定为viridicatol(1)、sclerotiamide(2)、22E-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇(3)、22E-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(4)。化合物3和4在50μg·mL-1的质量浓度下可以明显地抑制HepG2、人乳腺癌MCF-7细胞和NCI-H460肿瘤细胞的生长。结论化合物3和4有明显的体外抗癌作用。