新生儿缺氧缺血性脑病与SAA、CRP、IL-6水平的相关性研究

目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE）白细胞介素-6(IL-6）、血清淀粉样蛋白A(SAA)、C-反应蛋白(CRP)水平变化及意义。方法用ELISA法检测40例HIE患儿急性期和恢复期血清IL-6、SAA、CRP水平，并与20例无窒息及感染的新生儿比较。结果HIE轻、中、重三组IL-6、SAA、CRP水平均明显高于对照组，其中重度HIE存活者多数高于其它各组而死亡组均明显低于各治疗组，恢复期三指标均显著下降。SAA恢复较IL-6、CRP缓慢并与HIE预后有关。结论同时检测血清IL-6、SAA、CRP水平及变化，对新生儿HIE的早期诊断及对病程、预后的评价具有重要的临床意义。     

鲍曼不动杆菌对喹诺酮类耐药机制

目的 探讨鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法 采用K-B法检测35株鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物的药敏情况。十二烷基磺酸钠一聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测鲍曼不动杆菌的外膜蛋白(OMP)，直接荧光法检测鲍曼不动杆菌对环丙沙星的吸收和积累，PCR法扩增gyrA基因并对其进行测序。结果 35株鲍曼不动杆菌中有20株对氟喹诺酮类药物耐药，耐药菌株与敏感菌株相比，外膜蛋白在约29Ku条带处消失，在26Ku条带处明显增强。耐药菌株药物积累量不及敏感菌株，经叠氮钠处理后，积累量上升并接近敏感菌株，对PCR扩增产物gyrA测序未发现有突变。结论 鲍曼不动杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药与外膜蛋白的低通透性和主动外运有关。     

酒精性股骨细胞凋亡及其p53等基因的表达

目的　探讨细胞凋亡抑癌基因 (p5 3)和细胞凋亡抑制基因 (Bcl 2 )基因在酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞凋亡中的作用。方法　家兔 6 0只 ,随机分为 2组。灌胃法建模 ,实验组给予含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给予等量生理盐水 ,1～ 6个月分批处死。原位末端标记法 (TUNEL法 )检测骨细胞凋亡 ,免疫组化检测 p5 3和Bcl 2基因表达。结果　第 2 ,3,6个月 ,实验组出现大量骨细胞凋亡 ,以软骨下区最为明显 ,骨细胞凋亡数明显高于对照组 (P <0 0 1) ;两组间骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数、p5 3基因阳性细胞数均有显著性差异 (P <0 0 1) ,实验组骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数与细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 75 ,P <0 0 1) ,实验组骨细胞 p5 3基因阳性细胞数与细胞凋亡指数呈明显正相关性 (r=0 6 8,P <0 0 1)。结论　酒精性ANFH中骨细胞存在明显凋亡现象 ,且受 p5 3基因上调与Bcl 2基因下调影响 ,p5 3与Bcl 2共同调节骨细胞凋亡。     

人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达

目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型L1片段(HPVl8LI)活性蛋白。为进一步研制人乳头瘤病毒18型(HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒(pBR322-HPV18)为模板，利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段。将HPV18L1DNA与质粒(pUC19)重组构建重组质粒(pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性；并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒(pQE32)做表达载体构建重组质粒(pQE32-HPV18L1)，并用酶切电泳验证。将重组质粒pQE32-HPV18L1转入工程菌(M15)。用酶切电泳验证重组工程菌(pQE32-HPV18L1／M15)正确性。利用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质(Western blot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果PCR扩增DNA片段约为1．7Kb。与预期结果相同。克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同。而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒pQE32-HPVl8L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为1mmol／LIPTG诱导4h后，获得HPV18L1最佳蛋白表达量：SDS-PAGE显示，约63KD处可见目的蛋白带，与预期结果一致。Westem blot鉴定，在约63KD处可见目的条带，与预期结果一致。结论 成功构建表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18L1目的蛋白。     

镉应答癌基因蛋白对细胞原癌基因表达的影响

目的探讨镉应答癌基因蛋白(TEF-1δ编码蛋白)对多种不同细胞肿瘤相关基因表达的影响，以阐明镉的分子致癌机制。方法应用TEF-1δ基因真核细胞稳定表达系统和Western blot检测技术，用各种单克隆抗体检测细胞肿瘤相关基因蛋白的表达情况。结果相对于载体转染中国地鼠卵巢细胞(CHO)对照细胞，在4株具有高效稳定表达TEF-1δ编码蛋白质的CHO细胞系中均有细胞原癌基因C-fos高表达，其编码蛋白(55kDa)含量均明显高于对照组。同样，4株高效稳定表达TEF-1δ编码蛋白质的CHO系均具有相对较高的细胞周期调控基因Cyclln D1(编码蛋白36kDa)的表达。其余肿瘤相关基因蛋白如pan-ras，c-myc，c-jun，MDM2，ODC，p16，p53的表达在TEF-1δ转基因细胞与对照细胞之间未见明显差别。结论镉应答原癌基因TEF-1δ的超额表达可调高细胞原癌基因c-fos和细胞周期调控基因Cyclin Dl的表达，这可能是镉应答原癌基因TEF-1δ的分子致癌机制。     

甲亢患者血脂和总蛋白的变化及临床意义探讨

目的探讨甲亢患者血中血脂和总蛋白的变化与甲状腺激素的关系及临床意义。方法用免疫化学发光法检测56例患者和52例健康对照者血清游离T3(FT3)、游离T4(FT4),用生化分析仪检测甘油三酯(TG)、胆固醇(Tch)和总蛋白(TP)的含量。结果甲亢患者血脂、总蛋白的含量明显低于对照组(P<0.05),与FT3、FT4呈负相关。结论甲亢患者血脂和总蛋白明显降低,其变化可作为判断甲亢病情和疗效的指标之一。     

pcDNA3．1（＋）／NspA真核表达载体的构建及鉴定

目的构建pcDNA3.1( )淋病奈瑟菌外膜蛋白—奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface Protein A,NspA)基因真核表达载体,为研制淋病奈瑟菌核酸疫苗奠定基础。方法根据淋病奈瑟菌NspA基因序列,设计合成一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌基因组DNA中扩增出NspA基因片段,将扩增的产物连接于测序载体pUCm-T上,并构建重组体pcDNA3.1( )/NspA,进行酶切、PCR及测序鉴定。结果NspA基因体外扩增产物大小约为525 bp。所构建的pcDNA3.1( )/NspA重组体经双酶切及PCR鉴定,与预期片断的大小相符;测序结果与GenBank中收录的NspA全长序列一致,表明pcDNA3.1( )/NspA真核表达载体构建正确。结论成功地构建了淋病奈瑟菌真核重组表达载体pcD-NA3.1( )/NspA,为NspA蛋白的功能研究和淋病奈瑟菌核酸疫苗的研制提供了物质基础。     

硒中毒对小鼠器官蛋白质含量及SOD活性影响的实验研究

[目的]探讨亚硒酸钠对不同器官、组织蛋白质代谢及SOD活性的影响。[方法]受试动物分为阴性对照组、亚硒酸钠低剂量组(0.1mg/kg·d-1)、亚硒酸钠中剂量组(0.6mg/kg·d-1)、亚硒酸钠高剂量组(3mg/kg·d-1)及阳性对照组(环磷酰胺5.0mg/kg·d-1)。连续灌胃5d后,相隔30d处死小鼠,分别用考马斯亮兰法和NBT还原法检测肝、肾、心脏的蛋白质含量和SOD比活,并与阴性对照组进行比较,对各组数据进行统计学处理。[结果]肝脏的低、中、高剂量组的SOD比活分别为:(10.68±0.82)、(7.34±1.03)、(8.23±1.39)u·mg蛋白-1·h-1;肾脏的中、高剂量组SOD比活下降,而低剂量组却明显上升,与阴性对照组比较,差异均具有显著性(P<0.01);心脏各剂量组SOD比活与阴性对照组比较,均无差异性(P>0.05)。蛋白质含量除肝脏低、中、高剂量组分别为(4.60±0.31)、(5.17±0.72)、(3.48±0.09)mg/ml呈显著性增高外,心、肾各剂量组的蛋白质含量均有下降趋势。[结论]在不同的器官,SOD比活和蛋白质含量有所差异,说明硒的毒性作用具有一定的组织细胞选择性。以肝脏最敏感。     

NRAMP1基因INT4和3’UTR位点多态性与肺结核易感性的研究

目的 探讨人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1（NRAMP1）基因INT4和3＇UTR位点多态性与中国北方汉族成人肺结核发病的关系.方法 采用1：1配对的病例对照研究设计,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法检测NRAMP1基因中INT4和3＇UTR两个多态性位点,对与肺结核相关的危险因素进行问卷调查,进行单因素和多因素条件logistic回归分析,同时对基因型与肺结核病变的性质和程度进行研究.结果 对124对研究对象进行了INT4和3＇UTR两个多态性位点的基因分型,3＇UTR TGTG＋/del基因型病例组频率显著高于对照组,粗OR值（95%CI）为2.923（1.557～5.487）.病例组和对照组INT4各基因型频率比较差异均无统计学意义.对17个环境危险因素进行了单因素分析,在多因素分析中调整卡痕、体重指数、人均居住面积、家族史4个因素后,3＇UTR TGTG＋/del基因型仍与肺结核显著相关,调整OR值（95%CI）为2.955（1.369～6.381）.在INT4不同基因型中,病例组和对照组肺结核病变性质差异具有统计学意义（x2=9.634,P＜0.05）.结论 NRAMP1基因3＇UTR位点多态性可能是中国北方汉族成人肺结核的易感因素,而INT4多态性可能与肺结核的病变性质有关系.     

Difference in pathogenesis between herpes simplex virus type 1 encephalitis and tick-borne encephalitis demonstrated by means of cerebrospinal fluid markers of glial and neuronal destruction

We determined the extent of neuronal and glial cell destruction in 13 patients with herpes simplex type 1 (HSV-1) encephalitis, 15 patients with tick-borne encephalitis (TBE), and 20 noninfectious controls by analyzing the cerebrospinal fluid (CSF) concentrations of neurofilament protein (a marker of neurons, mainly axons), neuron-specific enolase (a marker of neurons, mainly somas), glial fibrillary acidic protein, and S-100 protein (markers of astrocytes). In addition, in patients with HSV-1 encephalitis CSF samples were collected serially before 7, 8-14, and 18-49 days and 3-10 months after the onset of neurological symptoms. In the acute stage of HSV-1 encephalitis we found markedly higher CSF levels of the cell damage markers than in patients with TBE. The concentration of cell damage markers in HSV-1 encephalitis decreased within 45 days after acute infection, except for neurofilament protein. The CSF concentrations of neurofilament protein increased during the second week, remained extremely high throughout the next month, and decrease thereafter. The changes in these markers of neuronal and glial destruction demonstrate the neuronal and astroglial cell damage during the first month after HSV-1 encephalitis. In contrast, most patients with TBE had signs only of slight astrogliosis, except for two patients with paresis.