基于药物代谢酶CYP3A4的乌头碱配伍人参皂苷、甘草苷的减毒机制研究

目的 考察乌头碱配伍人参皂苷Rb₁、甘草苷后对HepG2药物代谢酶（Cytochrome P450,CYP450）中3A4亚型的报告基因荧光活性、mRNA转录及蛋白翻译水平的影响。方法 将pGLuc-CYP3A4报告基因质粒与pcDNA3.1-hPXR表达质粒共转染HepG2细胞,检测乌头类生物碱、人参皂苷和甘草的单体成分对CYP3A4的激活效应;并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Western blotting技术检测人参皂苷Rb₁、甘草苷与乌头碱对CYP3A4 mRNA及蛋白水平的影响。结果 报告基因模型检测结果显示,与对照组比较,乌头碱、新乌头碱、次乌头碱和乙酰乌头碱能下调CYP3A4报告基因荧光强度（P<0.05）,其中乌头碱下调能力最强,人参皂苷Rb₁、Rc、Re、Rg1以及甘草苷、异甘草苷、甘草素和甘草酸均能上调报告基因的荧光强度（P<0.05、0.01）,其中人参皂苷Rb₁和甘草苷上调能力最明显;同时乌头碱能下调CYP3A4 mRNA与蛋白表达水平（P<0.05、0.01）,人参皂苷Rb₁和甘草苷能逆转乌头碱下调CYP3A4的能力（P<0.05、0.01）。结论 人参皂苷Rb₁、甘草苷与乌头碱配伍后可上调CYP3A4的表达,减少乌头碱在体内蓄积时间,起到减毒的作用。     

甘草酸、甘草苷、异甘草素对醋氨酚人肝细胞损伤模型的保护作用比较

目的:建立并验证醋氨酚人肝细胞损伤模型,进一步研究甘草酸、甘草苷、异甘草素的保肝作用.方法:20 mmol·L -醋氨酚作用HL-7702正常人肝细胞3h,以四氮溴盐(MTT)为考察指标,通过阳性药物双环醇验证该细胞模型并获得量效参考值,进而研究不同质量浓度的甘草酸、甘草苷、异甘草素对人肝细胞损伤的保护作用.结果:醋氨酚人肝细胞损伤模型成功、方法可靠,甘草酸、甘草苷、异甘草素3种成分对人肝细胞醋氨酚损伤均具一定的保护作用.甘草酸的最低有效浓度为0.001 6μmol· L-1,保肝的最大效能为47.0％,达到最大效能的浓度为0.2μmol·L-1.甘草苷的最低有效浓度为0.4μmol·L -1,保肝的最大效能为22.9％,达到最大效能的浓度为2μmol·L -1.异甘草素的最低有效浓度为0.4μmol·L -1,保肝的最大效能为72.6％,达到最大效能的浓度为250 μmol·L -1.结论:提供一种新的体外肝细胞损伤模型;在甘草用于保肝相关作用时,单纯以甘草酸、甘草苷作为质量评价指标是不够的.     

UPLC法测定通塞脉微丸中绿原酸、阿魏酸、甘草苷、肉桂酸的含量

目的:建立同时测定通塞脉微丸中绿原酸、阿魏酸、甘草苷、肉桂酸4种成分的超高效液相色谱(UPLC)分析方法。方法:采用Waters AcquityUPLC系统,AcquityUPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,双波长检测(λ1=276 nm、λ2=327 nm),柱温35℃。结果:绿原酸、阿魏酸、甘草苷、肉桂酸在16 min内即达到基线分离,在测定的浓度范围内线性关系良好(r≥0.9997),各成分的平均回收率在95.1%～98.2%,RSD<4.0%。结论:UPLC分离效果及重复性好,且快速、简便,可作为通塞脉微丸的质量控制方法。     

HPLC法同时测定养血化瘀合剂中阿魏酸、甘草苷和甘草酸

目的 建立HPLC同时测定养血化瘀合剂(当归、川芎、甘草等)中阿魏酸、甘草苷和甘草酸的方法.方法 采用依利特Hypersil C18(200 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈为流动相A,0.1%磷酸水溶液为流动相B,进行线性梯度洗脱(0～30 min,85%B→50%B),体积流量为1 mL/min,检测波长为245 nm,柱温为25℃.结果 阿魏酸在14.84～148.36μg/mL(r=0.9998),甘草苷在3.852～38.52μg/mL(r=0.999 6)和甘草酸在7.55～75.50μg/mL(r=0.9997)的范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,阿魏酸、甘草苷和甘草酸的进样精密度分别为0.96%、1.02%和0.93%(n=5),测定重复性分别为1.28%、1.32%和1.26%(n=6),加样同收率分别为100.1%、100.1%和99.7%(n=9),溶液在12 h内稳定.结论 本法操作简单、快速、重复性好,结果 准确可靠,可用于养血化瘀合剂的质量控制.     

小儿七星茶颗粒指纹图谱

目的： 建立广州王老吉药业股份有限公司三公仔牌小儿七星茶颗粒HPLC 指纹图谱分析方法,科学评价并有效控制其颗粒剂的质量,保证其生产的稳定性。 方法： 采用反相高效液相色谱法,Symmetry^® C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,乙腈-0.2%乙酸溶液梯度洗脱,柱温30 ℃,流速1.0 mL·min^-1,检测波长254 nm。 结果： 以甘草苷为参照峰,建立了三公仔牌小儿七星茶颗粒HPLC指纹图谱,确立了20个共有峰,10批样品之间的共有峰相似度>0.9。 结论： 该方法准确,精密度、重复性较好,可作为控制广州王老吉药业股份有限公司三公仔牌小儿七星茶颗粒质量的依据。     

经典名方大秦艽汤HPLC指纹图谱及含量测定方法研究

目的 制备10批大秦艽汤标准煎液,建立其HPLC指纹图谱并计算指标成分含量、转移率等数据,为建立大秦艽汤的质量控制标准提供参考.方法 依据古方要求还原至现代煎煮方式制备大秦艽汤标准煎液.采用岛津Inertsil ODS-3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱...     

响应面法优选清喉利咽口含片的提取工艺

目的:优化院内制剂清喉利咽口含片的提取工艺。方法:在预试验基础上,以绿原酸、总黄酮(木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芦丁、甘草苷)质量浓度的综合评分为因变量,浸泡时间、加水量、提取时间为自变量,采用响应面法优选清喉利咽口含片的提取工艺。采用HPLC测定绿原酸和总黄酮(木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芦丁、甘草苷)的含量,流动相乙腈(A)-0.5%磷酸水(B)梯度洗脱(0~12 min,9%A;12~15 min,9%~15%A;15~40 min,15%~45%A;40~50 min,45%~15%A;50~80min,15%A),绿原酸和黄酮类成分的检测波长分别为327,256 nm。结果:最佳提取工艺条件为浸泡时间89 min,液料比15.3∶1,提取时间136 min,提取数2次。绿原酸、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芦丁、甘草苷平均质量浓度分别为1 843.537,184.845,93.939,48.898 mg·L~(-1)。结论:建立的数学模型预测性好、稳定可行,可作为清喉利咽口含片的中试生产工艺。     

高效液相色谱-三波长检测-梯度洗脱法同时测定橘红化痰丸中3种苷类成分

目的:建立高效液相色谱-三波长检测-梯度洗脱法同时测定橘红化痰丸中3种苷类成分含量的方法。方法:采用Diamonsil-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),柱温30℃,进样量10μL,检测波长分别210 nm(苦杏仁苷),276 nm(甘草苷)和283 nm(柚皮苷)。结果:苦杏仁苷在25.0~175.0mg·L~(-1)具有良好的线性关系(r=0.999 1),苦杏仁苷平均回收率为101.5%,RSD 1.9%;甘草苷在2.0~50.0 mg·L~(-1)具有良好的线性关系(r=0.999 5),甘草苷平均回收率为100.8%,RSD 1.5%;柚皮苷在6.3~126.0 mg·L~(-1)具有良好的线性关系(r=0.999 2),柚皮苷平均回收率为101.7%,RSD 1.6%。结论:该法操作简单,重复性好,测定结果准确,可用于更好地控制该制剂的质量。     

树枝状大分子聚酰胺-胺对甘草苷促吸收作用及安全性研究

树枝状大分子聚酰胺-胺(PAMAM dendrimers)是近年来研究较为广泛的树状大分子之一,其表面具有大量可修饰的官能团,内部具有大量空腔,且具有良好的生物相容性、渗透性及稳定性,这些特点使PAMAM dendrimers在药物和基因载体等领域应用广泛,并可能成为新型吸收促进剂。为具体研究PAMAM dendrimers的促吸收作用,该课题选取甘草苷为模型药物,其具有补脾益气、解毒保肝等功效,但有研究表明其经口服后不易被胃肠道吸收,且存在首过效应等,生物利用度较低,因此在临床上尚未被广泛应用。该课题以体内肠道吸收的2个主要决定性因素溶解性和渗透性为核心,通过对甘草苷理化性质的研究,并辅以目前广泛应用的肠渗透性模型Caco-2单层细胞膜,对比分析了含或不含不同表面活性官能团的PAMAM dendrimers的甘草苷溶液跨Caco-2细胞膜转运量,并利用MTT试验分析比较了不同官能团的PAMAM dendrimers对细胞的毒性大小。结果显示,0.1%的G4代PAG能安全、有效的促进甘草苷吸收,并适合进一步开发成新型药用辅料。     

固相萃取-高效液相色谱法测定泻痢消片中4种有效成分

目的建立采用SPE-HPLC法同时测定泻痢消片中芍药苷、甘草苷、柚皮苷和橙皮苷含量的方法。方法采用C18固相萃取柱对泻痢消片中的有效成分进行净化、富集,用HPLC法测定含量。色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-5 mL·L~(-1)磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长为230,276和284nm,柱温为28℃,进样量为20μL,流速为1.0mL·min~(-1)。结果芍药苷、甘草苷、柚皮苷和橙皮苷分别在0.617 0~30.85(r=1.000 0),0.159 8~7.944(r=0.999 8),0.972 8~48.64(r=1.000 0)和0.123 6~6.180μg·mL~(-1)(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为99.4%,98.3%,97.8%和97.7%。RSD值分别为0.97%,1.11%,1.28%和1.26%。结论该方法操作简单快捷,灵敏度高,结果准确,可用于泻痢消片中的4种有效成分的含量测定。