HPLC法测定糖清胶囊中甘草酸和甘草苷的含量

目的:建立测定糖清胶囊中甘草酸和甘草苷含量的高效液相色谱法。方法:采用Kromasil Cl8色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)。甘草酸流动相为甲醇-0.2mo·ll-1醋酸铵溶液-冰醋酸(65:35:1);检测波长250nm;甘草苷乙腈-0.5%冰醋酸(18:82)为流动相;检测波长276nm;两者流速为1.0 ml·min-1,两者柱温为30℃;结果:甘草酸单铵盐在0.52~2.6μg/mg范围内呈现良好的线性关系;甘草苷在0.30~1.5μg/mg范围之内具有良好的线性关系。甘草酸和甘草苷回收率分别为98.1%、97.0%,R SD分别为1.32%、1.67%。结论:该法操作简便、准确,线性相关系数良好,且稳定性和重复性好,适用于糖清胶囊制剂甘草主成分的含量测定。     

基于Box-Behnken设计-响应面法与质量综合评价优化葛根芩连汤煎煮工艺

目的 优化和科学评价葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)的煎煮工艺,为其经典方剂中药复方制剂的研究与开发奠定基础以及提供参考。方法 以指纹图谱概貌结合多指标定量为综合评价,采用Box-Behnken设计-响应面法对加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数进行优化。指纹图谱研究采用Waters Acquity UPLCBEHC₁₈色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(梯度洗脱),体积流量为0.3mL/min,柱温为35℃,进样量为1μL;采用电喷雾离子源,以正、负离子模式检测,在质荷比(m/z)50~1200进行扫描,建立29批GQD指纹图谱并对共有峰进行指认。对图谱信息进行主成分分析,建立UPLC多波长检测方法测定木兰花碱、葛根素、药根碱、巴马汀、黄芩苷、大豆苷元、黄芩素、甘草苷8个成分含量,计算各样品综合得分,优化煎煮工艺。结果 建立了29个试验号GQD样品的UPLC-Q-TOF-MS正、负离子模式下指纹图谱。正、负离子模式下分别有共有峰23、19个,并对其进行指认,指认出葛根素、大豆苷元、黄芩素、黄芩苷、巴马汀、药根碱、木兰花碱、甘草苷、甘草次酸、大豆苷、异甘草苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、甘草酸、glyasperinsD、甘草醇、绿原酸、韧黄芩素II。对共有峰中8个指标成分进行含量测定,以计算综合得分,综合得分结果显示,26号工艺为最佳工艺。最终确定GQD最佳煎煮工艺为加10倍量水,浸泡0.5h,煎煮3次,每次0.5h。结论 所得出的GQD最佳煎煮工艺主要成分溶出率高,稳定可行,可为经典方剂GQD复方制剂的进一步研究和开发提供一定的依据。     

基于UPLC-Q Exactive四级杆-轨道阱液质联用法快速建立清热灵颗粒中潜在中药质量标志物(Q-Marker)成分库

目的基于中药质量标志物(Q-Marker)理念,使用UPLC-Q Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨液质联用技术,对清热灵颗粒主要化学成分进行快速识别和鉴定,建立清热灵颗粒的潜在Q-Marker库,为探讨建立中成药清热灵颗粒的系统质量控制方法奠定基础。方法以50%甲醇作为提取液制备供试液,采用ACQUITYUPLC BEHC_(18)色谱柱(100mm×2.1mm,1.7μm)进行分离,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,质谱采用负离子监测模式、全扫描及自动触发二级质谱扫描的功能,对清热灵颗粒中成分进行识别及鉴定。并采用Autodock vina 1.1.2软件,以H5N1禽流感病毒为神经氨酸酶受体,利用AutoDock Tools 1.5.6程序确定靶蛋白的活性口袋,对所选标志物进行分子对接研究。结果通过高分辨UPLC-Q Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨液质联用技术共鉴定了39个化学成分,包括黄酮类化合物25个,苯乙醇苷类6个,有机酸4个,三萜类化合物2个,木脂素类2个。32个化学成分为首次在该制剂中鉴别出,其中15个为专属性成分,建议其中的黄芩苷、汉黄芩苷、连翘酯苷A、甘草苷、连翘酯苷E、连翘酯苷B、异甘草苷、黄芩素、连翘苷、汉黄芩素、甘草素11个成分可作为清热灵颗粒的Q-Marker。结论通过高分辨UPLC-Q Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨液质联用技术,可以快速分析和确定中成药清热灵颗粒的化学成分,建立清热灵颗粒的潜在Q-Marker库。     

正交试验优选防感颗粒的提取工艺

目的确立防感颗粒的最佳提取工艺。方法应用正交试验和HPLC,以防感颗粒中R,S-告依春、白花前胡甲素、苦杏仁苷及甘草苷4种活性成分含量为指标,采用多指标综合评分法,确定防感颗粒的提取工艺。结果防感颗粒最佳提取工艺为:药材加8倍量水,煎煮3次,每次1.5 h,乙醇浓度为60%。结论优选出的工艺稳定可靠,可用于防感颗粒的提取。     

甘草总黄酮微海绵的制备及体外释放度评价

目的:优选甘草总黄酮微海绵的制备工艺并考察其体外释放度。方法:利用类乳剂溶媒扩散法制备甘草总黄酮微海绵,以微海绵得率、包封率及分散系数为指标,通过星点设计-效应面法考察聚乙烯醇用量、药物与乙基纤维素的比例、搅拌速度对甘草总黄酮微海绵制备工艺的影响。利用紫外分光光度法测定甘草总黄酮微海绵的包封率,检测波长335 nm;建立HPLC同时测定甘草总黄酮中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A和光甘草定的含量,检测波长300 nm,流动相乙腈-甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱;利用透析法比较甘草总黄酮及甘草总黄酮微海绵中6个成分的体外释放度。结果:甘草总黄酮微海绵的最佳制备工艺为聚乙烯醇用量2.69%,药物-乙基纤维素(6∶1),搅拌速度1 100 r·min~(-1),搅拌时间4 h。8 h内甘草总黄酮中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A和光甘草定的累积释放度分别为87.47%,86.83%,76.98%,78.48%,86.58%和56.58%,24 h内甘草总黄酮微海绵中这6个成分的累积释放度分别为91.45%,89.74%,77.57%,82.64%,87.74%和67.74%。结论:利用类乳剂溶媒扩散法制备的甘草总黄酮微海绵粒径大小均匀、工艺稳定且操作简便。甘草总黄酮微海绵具有明显的缓释作用。     

五味沙棘散对卵清蛋白诱导的过敏性支气管哮喘大鼠的保护作用及机制

目的 探究五味沙棘散对卵清蛋白（ovalbumin,OVA）诱导的过敏性哮喘大鼠的保护作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松（0.5 mg/kg）组和五味沙棘散（0.5、2.0 g/kg）组,建立OVA诱导的大鼠早期支气管哮喘模型,苏木素-伊红（HE）和Masson染色观察支气管病理情况及纤维化程度;免疫组化检测支气管间隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）的表达和分布;ELISA检测血清中免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）和白细胞介素-13（interleukin-13,IL-13）水平;亚甲基蓝法和WSP-1荧光探针法测定血清中硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）水平。建立CdCl₂诱导的支气管上皮BEAS-2B细胞损伤模型,MTT法检测细胞活性;Hoechest 33342染色法观察细胞核形态变化;MitoSOX染色检测细胞线粒体活性氧（mitochondrial reactive oxygen species,mtROS）水平;Western blotting检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、核因子红细胞系2相关因子（nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2）和Kelch样ECH关联蛋白1（Kelch like ECH associated protein 1,Keap1）蛋白表达。结果 五味沙棘散能够减少支气管黏膜上皮细胞脱落和黏液分泌（P＜0.001）,降低胶原纤维的沉积和Cx43的表达及分布（P＜0.05、0.01、0.001）,降低血清中IgE、IL-13水平（P＜0.05）,升高血清中H₂S水平（P＜0.05、0.01）。五味沙棘散含药血清呈剂量相关性地抑制CdCl₂诱导的BEAS-2B细胞凋亡及mtROS水平（P＜0.01、0.001）,上调Caspase-3和Nrf2蛋白表达（P＜0.05、0.01）,下调Keap1蛋白表达（P＜0.01）。结论 五味沙棘散对OVA诱导的哮喘大鼠和CdCl₂诱导的支气管上皮细胞凋亡均具有保护作用,其机制可能与调控Nrf2/Keap1信号通路有关。     

沙参麦冬汤中3种有效成分血药浓度的UPLC-MS/MS测定及药动学研究

［］ 目的：建立大鼠血浆中甘草苷、花椒毒酚和甲基麦冬黄烷酮A的UPLC-MS/MS测定方法,并探讨大鼠灌胃沙参麦冬汤后其在大鼠体内的药动学过程。方法：以流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速0.3ml/min;采用ESI源,正负离子同时检测模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测各成分血药浓度,并用DAS 3.0 软件计算药动学参数。结果：甘草苷、花椒毒酚和麦冬黄烷酮A分别在4.92-315.00ng.mL_-1、1.44-92.00 ng.mL_-1 和0.35-22.00 ng.mL_-1线性关系良好,平均回收率均大于76.5%,日内、日间RSD 均小于15%。大鼠灌胃沙参麦冬汤提取物后,甘草苷、花椒毒酚和甲基麦冬黄烷酮A的AUC_0-t 分别为(718.23±185.55),(22.52±7.53),和(13.55±6.03)ng.h.mL_-1 ; t_1/2分别为3.61±2.01,6.93±7.78 和3.51±1.92h。结论: 本法方便、快捷,可用于甘草苷、花椒毒素和甲基麦冬黄烷酮A的体内定量分析。     

RP-HPLC双波长法同时测定酸枣仁汤中5种成分的含量

目的建立RP-HPLC双波长同时测定酸枣仁汤中5种成分含量的方法。方法色谱柱:Kro-masil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-体积分数为1%的冰乙酸水溶液(梯度洗脱),检测波长:λ1=275 nm和λ2=340 nm,流速:1.0 mL.min-1,柱温:30℃。结果芒果苷、斯皮诺素、甘草苷、阿魏酸和洋川芎内酯I质量浓度分别在12.54～200.64、11.14～178.24、19.12～305.92、6.04～96.64、8.60～137.60 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率为95.1%～103.4%。结论该方法可作为酸枣仁汤的含量测定方法,为其质量控制提供参考依据。     

四季抗病毒合剂的超快速液相色谱法指纹图谱研究及4个成分的含量测定

目的:建立四季抗病毒合剂的超快速液相色谱(UFLC)法指纹图谱,并测定连翘酯苷A、连翘苷、甘草苷、甘草酸的含量。方法:采用UFLC法,色谱条件:Kromasil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.6%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.8 ml·min^-1;检测波长为260 nm;柱温为30℃。结果:通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A),确定了四季抗病毒合剂的UFLC指纹图谱共有模式,标定了42个峰;并测定了12批制剂中连翘酯苷A、甘草苷、连翘苷、甘草酸的含量(mg·ml^-1)分别为1.85,0.06,0.07和0.25 mg·ml^-1,RSD分别为1.10%,1.21%,0.98%和0.84%。结论:该方法简便、准确、重复性好,为四季抗病毒合剂的质量评价与质量控制提供了科学依据。     

HPLC法测定小儿七星茶口服液有效成分的含量

目的为制定小儿七星茶口服液的定量标准提供参考。方法采用高效液相色谱法测定有效成分钩藤碱和甘草苷的含量。结果钩藤碱在0.0258-0.258μg范围内有良好的线性关系,线性回归方程：y=1486205x-3621,r^2=0.9999;精密度、重复性、稳定性、回收率的RSD分别为0.12%、2.5%、1.5%、2.4%,样品平均含量达1.405 mg.L^-1。甘草苷在1.346-4.093μg范围内有良好的线性关系,线性回归方程：y=3E＋7x-37274,r^2=0.999;精密度、重复性、稳定性、回收率的RSD分别为2.63%、4.02%、2.71%、0.55%,样品平均含量达129.28 mg.L^-1。结论采用高效液相色谱法测定钩藤碱和甘草苷的含量可以作为小儿七星茶口服液的定量标准。