一测多评法同时测定正天丸中6种指标性成分

目的 建立一测多评（quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS）法同时测定正天丸中6种指标性成分的含量。方法 采用Agilent XDB C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长310 nm,柱温30℃,进样量10 μL。应用QAMS法,以芍药苷为参照物,测定6种指标性成分之间的相对校正因子,分别采用外标法和QAMS法测定正天丸中的6种指标性成分的含量,并对2种方法计算结果进行对比分析,以验证QAMS法的实用性与稳定性。结果 建立了用于测定正天丸中6种指标性成分的QAMS法,并对6批正天丸进行测定,其计算值与测定值的差异较小。结论 本研究建立的QAMS法可测定正天丸中6种指标性成分的含量,方法简单、有效,结果准确,可用于正天丸的质量控制,为完善质量标准提供参考。     

高效液相色谱法测定通窍鼻炎片中欧前胡素的含量

目的建立通窍鼻炎片中欧前胡素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,C18-A色谱柱(伊利特200 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-水(55∶45)为流动相;流速为1.0 mL.min-1,检测波长为300 nm。结果欧前胡素在0.019 8~0.178 2μg具有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.04%,RSD为0.92(n=5)。结论本方法快速、简便,结果准确可靠,可用于通窍鼻炎片中欧前胡素的含量测定。     

欧前胡素通过下调MCL-1的表达提高口腔鳞癌干细胞对顺铂的敏感性

目的: 探讨中药活性成分欧前胡素是否能增强顺铂对口腔鳞癌干细胞的杀伤活性并研究其机制。方法: 流式细胞术检测欧前胡素和顺铂对Cal27细胞系的肿瘤干细胞种群比例的影响。MTT法和Annexin V染色法检测欧前胡素对顺铂杀伤Cal27肿瘤干细胞能力的影响。利用western blot方法验证欧前胡素是否调节Cal27肿瘤干细胞中MCL-1的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及western blot方法研究欧前胡素影响顺铂疗效的信号通路。结果:顺铂单治疗组的Cal27细胞系的肿瘤干细胞种群比例显著高于对照组(P<0.05)而显著低于顺铂联合欧前胡素组(P<0.05)。顺铂联合欧前胡素组对Cal27肿瘤干细胞的细胞活力的抑制率和凋亡诱导率显著高于欧前胡素组(P<0.05)和顺铂组(P<0.05)。顺铂联合欧前胡素组处理的Cal27肿瘤干细胞的线粒体膜电位显著低于欧前胡素组(P<0.05)和顺铂组(P<0.05)。顺铂联合欧前胡素组处理的Cal27肿瘤干细胞的caspase-9和caspase-3的活化水平显著高于欧前胡素组(P<0.05)和顺铂组(P<0.05)。欧前胡素处理后Cal27肿瘤干细胞的MCL-1表达水平显著降低(P<0.05),而顺铂对MCL-1的表达无影响(P>0.05)。MCL-1表达载体能显著抑制欧前胡素对顺铂的协同作用,降低两者联合治疗对Cal27肿瘤干细胞的细胞活力的抑制和凋亡的诱导。结论: 欧前胡素通过下调MCL-1的表达提高口腔鳞癌干细胞对顺铂的敏感性     

欧前胡素通过提高自噬水平缓解大鼠雌激素缺乏性骨质疏松

目的探寻欧前胡素(Imp)对大鼠雌激素缺乏性骨质疏松的疗效及机制。方法将大鼠随机分为对照(control),OVX和OVX+Imp组。建模后10 d,给OVX+Imp组、对照组和OVX组大鼠分别尾静脉注射欧前胡素75 mg/kg或氯仿溶剂,2次/周,10周。μCT和HE切片分析股骨远端骨小梁形态及参数。应力测试股骨及L5椎骨力学强度。钙黄绿标记内源性矿物沉积。ELISA检测血清PINP和B-ALP。ALP染色检测BMMSCs成骨分化能力。Real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。HE染色检测皮下移植物异位成骨。结果 1)OVX组骨量、骨小梁参数、股骨和L5椎骨力学强度、矿物沉积速率、血清PINP和B-ALP均低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。2)OVX组内源性BMMSCs的ALP活性、成骨基因表达及异位成骨能力均低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。3)OVX组内源性BMMSCs自噬水平低于对照组和OVX+Imp组(P0.05)。4)BMMSCs+3-MA组自噬水平低于BMMSCs组,成骨能力相应降低(P0.05);BMMSCs+3-MA+Imp组自噬水平高于BMMSCs+3-MA组,成骨活性相应升高(P0.05)。结论欧前胡素通过提高自噬水平恢复内源性BMMSCs成骨能力,治疗雌激素缺乏性骨质疏松。     

钩吻的化学成分研究

目的研究马钱科胡蔓藤属植物钩吻Gelsemium elegans的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、HPLC等色谱方法进行分离纯化,通过理化性质及核磁共振谱学数据对分得的化合物进行结构鉴定。结果从钩吻的95%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为钩吻素子(1)、钩吻素甲(2)、钩吻绿碱(3)、钩吻素己(4)、花椒毒素(5)、香柑内酯(6)、异茴芹内酯(7)、欧前胡素(8)、蛇床子素(9)、对羟基苯甲酸(10)、香草酸(11)、β-谷甾醇(12)、β-胡萝卜苷(13)、钩吻内酰胺(14)、16-表伏康树卡平碱(15)。结论化合物5～9为首次从该种植物中分离得到。     

LC-MS/MS法同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度

目的建立可同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的液质联用-质谱串联法(LC-MS/MS)。方法以地西泮为内标,血浆样品经乙酸乙酯萃取后经超高效液相色谱(Acquity UPLC)BEH C18色谱柱(2.1×100 mm,1.7μm)分离,欧前胡素与异欧前胡素在质谱条件为正电喷雾电离(ESI~+)(m/z:271.5204.2),锥孔电压为20 V,碰撞能量为33 V,考察特异性、线性范围、定量下限、基质效应以及方法学回收率、精密度和稳定性。结果欧前胡素与异欧前胡素保留时间分别约1.5 min及2.4 min,欧前胡素浓度在0.1～20 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 2),定量下限0.1 ng/mL(信噪比S/N10)。异欧前胡素浓度在0.05～10 ng/mL范围内线性良好(r~2=0.998 9),定量下限0.05 ng/mL(S/N10),基质效应为94.89%～110.70%,方法学回收率为94.3%～104.3%。欧前胡素与异欧前胡素的重复性以CV表示,CV分别4.91%、5.26%,期间CV分别16.39%、14.87%。冻融条件下二者CV均不大于7.21%,室温下均不大于10.44%。结论建立了同时测定欧前胡素与异欧前胡素血药浓度的LC-MS/MS法,该法灵敏度高、特异性好、稳定性好。     

腰息痛胶囊定性定量方法研究

目的建立腰息痛胶囊定性定量方法。方法采用薄层鉴别方法进行定性鉴别并对腰息痛胶囊中乌头碱限量进行检查。运用高效液相色谱法测定欧前胡素的含量。结果确立了制剂中当归、白芷、三七、赤芍鉴别方法,确立了制剂中乌头碱限量检查方法。通过方法学系统考察,建立了欧前胡素的含量测定方法,其欧前胡素的线性范围为0.033 6～0.268 8μg,回归方程Y=39.09X＋3.720（r=0.999 97）,平均加样回收率97.8%,RSD=0.6%（n=6）。结论建立的鉴别、检查和含量测定方法简便、准确、重复性好,适用于腰息痛胶囊的质量控制。     

Antihypertensive and vascular remodelling effects of the imperatorin derivative OW1 in renovascular hypertension rats

OW1 is a novel imperatorin derivative that exhibits vasodilator activity. In the present study, the antihypertensive effect of and inhibition of vascular remodelling by OW1 were investigated in two‐kidney, one‐clip (2K1C) renovascular hypertensive rats. Rats were subjected to the 2K1C procedure and treated with OW1 (40 or 80 mg/kg per day) for 8 weeks. Blood pressure was measured in conscious rats. Microalbumin (mALB) and total protein (U‐TP) concentrations were determined in the urine, as were plasma concentrations of angiotensin (Ang) II, calcitonin gene‐related peptide (CGRP) and angiotensin‐converting enzyme 1 (ACE). The unclipped kidney was stained with haematoxylin and eosin and Masson trichrome, whereas aortic sections were stained with Masson trichrome. In addition, OW1‐induced vasodilatation was evaluated in vitro in rat mesenteric and renal arteries. Immunohistochemical analysis was used to quantify collagen I and III expression. OW1 relaxed rat mesenteric and renal arterial rings in vitro. Treatment of 2K1C hypertensive rats with OW1 (40 and 80 mg/kg per day) for 8 weeks significantly decreased blood pressure. In addition, OW1 reduced plasma AngII and ACE concentrations and increased plasma CGRP concentrations. At 80 mg/kg per day, OW1 decreased blood urea nitrogen, mALB and U‐TP levels. Histological analysis revealed that OW1 reduced renal arteriolar thickness and relieved the structural hypertrophic arteries. Moreover, OW1 had an inhibitory effect on vascular remodelling and renal lesions in hypertensive rats. In conclusion, the results suggest that OW1 could potentially be a novel candidate for hypertension intervention.     

SPE-HPLC法测定鼻炎灵片中黄芩苷与欧前胡素的含量

目的建立SPE-HPLC测定鼻炎灵片中的黄芩苷、欧前胡素的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱：Diamonsil C18（5μm,250 mm×4.6 mm）,流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）梯度洗脱,检测波长：280 nm;流速1.0ml·min-1,进样量10μl。结果黄芩苷在1.311~131.1μg·ml-1范围内线性关系良好（r=0.9993）,平均加样回收率为99.8%,RSD为0.1%（n=6）;欧前胡素在1.003~100.3μg·ml-1范围内具有良好的线性关系（r=0.9994）,平均加样回收率为99.0%,RSD为0.6%（n=6）。结论该方法简便快捷,准确、重复性好,灵敏度高,可用于建立鼻炎灵片的质量控制。     

正交设计优选白芷的渗漉法提取工艺

目的 优选白芷的渗漉法提取工艺.方法 以欧前胡素的含量为指标,应用正交试验设计筛选白芷的最佳提取工艺条件.结果 最佳提取工艺为A2B2C3D1,即用8倍量的70%乙醇浸泡24h,渗漉速度2m/mim.结论 优选得到的工艺稳定可行.