欧芹素乙对人脐静脉内皮细胞的保护作用及对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究欧芹素乙对内皮细胞的保护作用;溶血磷脂酰胆碱(LPC)对人脐静脉内皮细胞株HUVEC细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响以及欧芹素乙的影响.方法:应用四唑盐(MTT)法检测溶血磷脂酰胆碱对HUVEC细胞的毒性作用及欧芹素乙的保护作用;应用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量;采用RT-PCR法及Reahime PCR方法检测溶血磷脂酰胆碱对VEGF mRNA的表达及欧芹素乙的影响.结果:MTT检测结果显示,溶血磷脂酰胆碱对HUVEC细胞具有较强的生长抑制作用,而欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱所致的细胞增殖抑制具有较好的保护作用.ELISA结果显示,HUVEC细胞暴露于溶血磷脂酰胆碱后,VEGF蛋白含量明显升高;加入欧芹素乙后剂量依赖性地降低VEGF蛋白的表达.RT-PCR结果显示,溶血磷脂酰胆碱可以增加3种VEGF异构体的转录水平,其中VEGF165的表达显著增加,欧芹素乙可剂量依赖性地抑制溶血磷脂酰胆碱引起的VEGF mRNA的高表达.结论:欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱引起的细胞损伤有明显的保护作用;欧芹素乙可抑制溶血磷脂酰胆碱所诱导的HUVEC细胞中VEGF蛋白及VEGF mRNA的高表达,对内皮细胞起到保护作用.     

RP-HPLC测定川明参药材中香豆素含量

目的建立测定川明参药材中2种香豆素成分欧前胡素及5-异戊烯基-8-甲氧基补骨脂素含量的RP-HPLC测定方法。方法色谱柱：Kromasil-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-水（65∶35）,流速为1ml/min,柱温为30℃,检测波长为246nm.结果欧前胡素在0.16～0.97μg（r=0.9998）,5-异戊烯基-8-甲氧基补骨脂素在0.13～0.76μg（r=0.9996）范围内与色谱峰面积线性关系良好,欧前胡素和5-异戊烯基-8-甲氧基补骨脂素的平均回收率分别为98.79%、98.11%,RSD分别为1.65%、1.73%.结论该测定方法准确、简便、重复性好。研究结果为建立完善川明参药材质量标准奠定了基础。     

HPLC法同时测定元胡止痛滴丸中6种成分

目的建立同时测定元胡止痛滴丸中6种成分的HPLC分析方法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.04%乙酸铵溶液(冰醋酸调p H值至4.0),梯度洗脱:0~10 min,20%乙腈;10~25 min,20%~25%乙腈;25~70 min,25%~75%乙腈;体积流量1 m L/min;柱温35℃;检测波长280 nm;进样量10μL,测定元胡止痛滴丸中延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素的量。结果延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素和异欧前胡素分离度良好,阴性无干扰,分别在14.94~149.40、1.97~19.72、15.94~159.36、9.72~97.20、2.82~28.17、0.61~6.06μg/m L线性关系良好,r均大于0.999 0,平均加样回收率为95%~105%(RSD1.82%~2.99%)。4批样品中延胡索乙素、黄藤素、去氢延胡索甲素、延胡索甲素、欧前胡素、异欧前胡素的量分别在0.368~0.483、0.058~0.082、0.532~0.766、0.315~0.459、0.145~0.212、0.030~0.053 mg/g。结论方法简便、准确,重复性好,适用于元胡止痛滴丸中6种成分的定量测定,可为元胡止痛滴丸的质量控制提供依据。     

白亮独活的HPLC指纹图谱

目的: 建立白亮独活的HPLC指纹图谱分析方法并测定药材中佛手柑内酯及欧前胡素含量,为该药材的质量评价提供参考。方法: 收集10批白亮独活样品,采用HPLC建立指纹图谱方法,流动相水-甲醇梯度洗脱,检测波长为302 nm。利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004A版软件进行指纹图谱分析。结果: 10批白亮独活的HPLC指纹图谱相似度均>0.89,标定了11个共有峰。样品中佛手柑内酯、欧前胡素平均质量分数分别为0.117%和0.709%。结论: 该方法简单、重复性好,可用于白亮独活的品种鉴别和质量评价。     

清眩软胶囊的质量控制研究

目的 建立清眩软胶囊的定性鉴别和定量测定方法。方法 采用TLC法对本方中的川芎、荆芥穗和薄荷进行定性鉴别;采用HPLC法对方中主要成分欧前胡素进行测定。Agilent C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;以乙腈-水（42.5：57.5）为流动相;检测波长300 nm,柱温为35℃,体积流量为1.5 mL/min。结果 薄层色谱斑点清晰,阴性样品无干扰。欧前胡素在1.09～54.55 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.0%,RSD值为0.77%（n=6）。结论 所建立的定性和定量方法结果可靠、准确,重现性好,无干扰,可用于清眩软胶囊的质量控制。     

RP-HLPC法同时测定藿香正气水中6种有效成分的含量

目的建立反相高效液相色谱法同时测定藿香正气水中4种药材的6种有效成分的含量。方法采用反相高效液相色谱法,C18色谱柱(Gemini NX,250 mm×4.6 mm,5μm),以0.05%甲酸(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长270 nm。结果建立了同时检测藿香正气水中橙皮苷、甘草酸铵、欧前胡素、和厚朴酚、异欧前胡素、厚朴酚6个成分的含量测定方法,阴性样品均无干扰,且样品分离好,无干扰,方法学验证合格。结论本方法快捷可行,检测限、灵敏度、线性关系、专属性等均符合含量分析要求,适合藿香正气水多指标组分的同时定量控制。     

Anticonvulsant effects of four linear furanocoumarins, bergapten, imperatorin, oxypeucedanin, and xanthotoxin, in the mouse maximal electroshock-induced seizure model: a comparative study

The aim of this study was to determine and compare the anticonvulsant activities of four natural furanocoumarins [bergapten (5-methoxypsoralen), imperatorin (8-isopentenyloxypsoralen), oxypeucedanin (5-epoxy-isopentenyloxypsoralen) and xanthotoxin (8-methoxypsoralen)] in the maximal electroshock-induced seizure test in mice. The anticonvulsant effects of bergapten, imperatorin, oxypeucedanin, and xanthotoxin were evaluated at 15, 30, 60 and 120 min after their systemic (intraperitoneal) administration. Tonic hind limb extension (seizure activity) was evoked in adult albino Swiss mice by a current (sine-wave, 25 mA, 500 V, 50 Hz, 0.2 s stimulus duration) delivered via auricular electrodes. The time courses of protection by bergapten, imperatorin, oxypeucedanin and xanthotoxin against maximal electroshock-induced seizures revealed that 300 mg/kg imperatorin and xanthotoxin (C-8 substituted derivatives of psoralen) exerted strong anticonvulsant activity, whereas 300 mg/kg bergapten and oxypeucedanin (C-5 substituted derivatives of psoralen) did not produce any anticonvulsant activity in this model. In conclusion, imperatorin and xanthotoxin protected the animals against maximal electroshock-induced seizures, whereas bergapten and oxypeucedanin, despite their chemical and structural similarities to xanthotoxin and imperatorin, exerted no anticonvulsant activity in this seizure test.     

白芷、没药单煎与合煎对欧前胡素含量及其镇痛作用的影响

目的:比较白芷、没药单煎与合煎对欧前胡素含量及其镇痛作用的影响。方法:采用常规水煎工艺得到白芷单煎液、没药单煎液、白芷-没药合煎液。采用LC-MS测定不同提取液中欧前胡素的含量,乙腈-水(55∶45),流速0.3 min·mL~(-1),进样量5μL,柱温35℃;电喷雾离子源(ESI),正离子扫描模式,单离子监测(SIM)。小鼠分为空白组、阳性组(氨酚双氢可待因片组)和3种水煎液的低、中、高剂量组,阳性药给药剂量为0.24 g·kg~(-1)·d~(-1),白芷单煎液将3,6,12 g·kg~(-1)·d~(-1),没药单煎液将1.5,3,6 g·kg~(-1)·d~(-1),白芷-没药合煎液将4.5,9,18 g·kg~(-1)·d~(-1)设定为低、中、高给药剂量,分别灌胃给药7 d后进行热板试验和扭体试验,记录舔足时间和扭体次数。结果:欧前胡素线性范围0.02~0.20 mg·L~(-1)(R~2=0.991 1),欧前胡素在白芷单煎液中转移率仅0.62%,在白芷-没药合煎液中转移率提高至2.00%。除了个别时间点外,热板试验中单煎液、合煎液各剂量组与空白组比较均有显著性差异(P0.05,P0.01)。扭体试验中白芷单煎低、中剂量组,没药单煎高剂量组和白芷-没药合煎各剂量组与空白组比较均有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论:白芷与没药合煎能促进白芷中欧前胡素的溶出。单煎液、合煎液各剂量组均能延长小鼠热板舔足时间,合煎液各剂量组均能延长扭体潜伏时间,合煎液高剂量组对小鼠的疼痛抑制率最高。     

欧前胡素通过Nrf2/HO-1抗氧化途径对哮喘模型小鼠气道炎症的影响

目的探究欧前胡素对哮喘模型小鼠气道炎症的影响及其作用机制。方法将50只雄性BALB/c小鼠随机分成5组,即对照组、模型组及欧前胡素低、中、高剂量(15、30、60 mg/kg)组。采用HE、Masson、PAS染色观察小鼠肺组织病理学改变;ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中免疫球蛋白E(Ig E)及白细胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13、γ-干扰素(IFN-γ)水平;双氢罗丹明(DHR)-123法检测小鼠BALF中活性氧(ROS)的含量;检测小鼠肺组织中蛋白羰基含量及丙二醛(MDA)水平;抗氧化酶试剂盒检测小鼠BALF中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)水平及总抗氧化能力(TAOC);免疫组织化学法和Western blotting法检测小鼠肺组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果与模型组比较,欧前胡素能够减少哮喘小鼠肺组织炎症细胞的渗出、杯状细胞的增生和胶原沉积;减少BALF中ROS、总Ig E和卵清蛋白(OVA)特异性Ig E的表达;降低IL-4、IL-5、IL-13、蛋白羰基、MDA的量并增加IFN-γ、SOD、GSH水平及TAOC;提高肺组织中Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结论欧前胡素对OVA诱导的哮喘模型小鼠具有治疗作用,其作用机制可能与Nrf2/HO-1通路活化有关。