绿藻硫酸多糖SHW及其低分子量片段的结构及抗凝活性研究*

目的 对绿藻多糖SHW及其低分子量片段的结构及抗凝活性进行研究。方法 通过热水提取、强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱,从绿藻硬毛藻中提取分离得到硫酸多糖SHW;通过可控酸解方法制备SHW低分子量片段;采用高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、红外光谱及甲基化方法对多糖结构进行表征;通过活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、凝血酶原时间研究多糖SHW及其低分子量片段体外抗凝血活性。结果 多糖SHW及其低分子量片段主要由阿拉伯糖组成,含有少量半乳糖和氨基葡萄糖;糖链中阿拉伯糖主要以→4)-Arap-(1→和→3,4)Arap-(1→的形式存在,半乳糖以→4)-Galp-(1→存在形式,硫酸根主要位于→4)-Arap-(1→的C-3位。SHW及其低分子量片段A1～A6的分子量分别为492 kDa、200 kDa、170kDa、100kDa、26kDa、14kDa 和10 kDa。SHW 具有较高的抗凝血活性,且其抗凝活性随着其分子量的减少而降低。结论 海藻多糖SHW是一种具有抗凝活性的新颖硫酸多糖,其抗凝活性与分子量密切相关。     

Effects of malachite green on the mRNA expression of detoxification‐related genes in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) and other major Chinese freshwater fishes

The use of malachite green (MG) in fish farming is prohibited in China due to its potentially toxicological and carcinogenic nature, but it is still illegally used in some places. The aim of this study was to investigate the time and concentration‐dependent responses of xenobiotic metabolizing and detoxification‐related genes in diverse fishes exposed to MG both in vivo and in vitro. Experimental fish were administered to two exposure groups of malachite green (MG) (0.10 and 0.50 mg L^?1) for 8 h. The hepatocytes isolated from Nile tilapia were incubated with MG (0.5, 1.0, and 2.0 mg L^?1) for 8 and 24 h, respectively. In vivo, exposure to 0.10 and 0.50 mg L^?1 MG for 8 h caused significant changes of the detoxification‐related genes on the mRNA expression levels. Low‐concentration (0.10 mg L^?1) level of MG induced significant increase on the mRNA expression level of GSTR gene in Nile tilapia and other fishes. The mRNA expression of grass carp UCP2 was significantly induced when exposed to 0.5 mg L^?1 MG. However, the mRNA expression levels of GSTA, CYP1A, and GPX were inhibited significantly by 0.5 mg L^?1 MG in Nile tilapia, grass carp, and Taiwan snakehead. In vitro, the significant increase of mRNA expression of these genes was detected after exposure to 0.5 mg L^?1 MG (UCP2), and 1.0 mg L^?1 MG (CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2). The induction of hepatic CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2 in response to MG suggested a potential role of fish CYP1A1, GSTA, GSTR, and UCP2 in MG metabolism. © 2011 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol, 2013.     

绿藻硫酸多糖UCS2的结构及抗凝血活性研究

目的 对绿藻硫酸多糖UCS2的结构及抗凝血活性进行研究。方法 通过冷水提取、强阴离子交换色谱和凝胶渗透色谱,从绿藻花石莼中提取分离得到硫酸多糖UCS2;采用高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、红外光谱和气质联用色谱对多糖UCS2的结构进行表征;通过活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）对多糖UCS2体外抗凝血活性进行研究。结果 绿藻多糖UCS2相对分子质量为3.955×104,硫酸根和糖醛酸质量分数分别为19.74%和18.66%;UCS2主要由鼠李糖组成,含有少量葡糖醛酸和木糖。糖链中含有→3,4)-α-L-Rhap-(1→,→4)-α-L-Rhap-(1→,→4)-β-D-Xylp-(1→和→4)-β-D-Glc Ap-(1→,硫酸基位于→4)-α-L-Rhap-(1→的C-3位。多糖UCS2对APTT有显著延长作用,具有较高的抗凝活性。结论 绿藻多糖UCS2是1种具有抗凝活性的葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖型硫酸多糖。     

细胞穿透肽YARA介导增强型绿色荧光蛋白转导入人结直肠癌细胞的实验研究

目的 构建原核表达载体pET15b-YARA EGFP,表达并纯化出融合蛋白YARA-EGFP,观察其穿透人结直肠癌细胞的情况.方法 用分子克隆技术构建出表达型载体pET15b-YARA-EGFP,在E.coli BL21(DE3)中表达融合蛋白YARA-EGFP,将鉴定和纯化后的融合蛋白加入体外培养的人结直肠癌细胞.结果 得到纯化的融合蛋白YARA-EGFP,能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞,并表现出剂量和时间依赖性,MTT法检测在其高浓度时仍对细胞无毒性.结论 YARA-EGFP融合蛋白能高效地转导入体外培养的人结直肠癌细胞.     

中心性浆液性脉络膜视网膜病变荧光素和吲哚氰绿血管造影及眼球后血流动力学分析

目的 探讨中心性浆液性脉络膜视网膜病变(CSC)患者眼球后血管血流动力学变化特征、脉络膜循环异常特点及其与视网膜色素上皮病变的关系.方法 病例对照研究.应用彩色超声多普勒检测57例(57只患眼,57只对侧眼)CSC单侧受累患者及25例(50只眼)正常对照者的眼动脉、睫状后动脉、睫状后短动脉,记录其血管收缩期峰值血流速度(PSV)和舒张末期血流速度(EDV)及阻力指数(RI),并对CSC患者的患眼、对侧眼及正常对照眼的血流参数两两间分别进行比较研究.采用海德堡激光扫描眼底造影系统,对57例患者行同步吲哚氰绿脉络膜血管造影(ICGA)、荧光素眼底血管造影(FFA),并对其图像进行对比分析.采用SPSS 12.0统计学软件.对CSC患者的患眼与对侧眼的眼动脉、颞侧睫状后动脉、颢侧睫状后短动脉的PSV、EDV、RI血流参数进行比较,采用自身配对t检验;对正常对照眼与CSC患者的对侧眼和患眼血流参数进行比较,采用成组设计t枪验.以P＜0.05作为差异有统计学意义.结果 CSC患者的患眼和正常对照者的颞侧睫状后动脉(PSV:t=3.044,P=0.005;EDV:t=3.731,P=0.001)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=2.822,P=0.008;EDV:t=3.194,P=0.003),患者对侧眼和正常对照者的颞侧睫状后动脉(PSV:t=3.219,P=0.003;EDV:t=3.807,P=0.001)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=3.931,P=0.000,EDV:t=3.145,P=0.003)血流参数均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).患者的患眼与对侧眼的颞侧睫状后动脉(PSV:t=0.608,P=0.548;EDV:t=0.122,P=0.904)、颞侧睫状后短动脉(PSV:t=0.730,P=0.470;EDV:t=0.109,P=0.914)的血流参数比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).ICGA、FFA检查结果显示,57例患者的患眼所有视网膜色素上皮渗漏点均出现在相对应的脉络膜弱荧光区内,其中52例在早期弱荧光区内继发脉络膜血管扩张,晚期呈现高荧光渗漏灶.患眼和对侧眼所有视网膜色素上皮窗样荧光处,相对应的脉络膜部位,在ICGA造影晚期均呈现高荧光渗漏灶.而20只患眼及其16只对侧眼的脉络膜在ICGA晚期呈现高荧光渗漏灶处,经FFA检查未见视网膜色素上皮窗样荧光.结论 CSC是与全身因素有关的舣眼疾病,其眼球后和脉络膜微循环异常的基本特征为血管的低灌注和缺血,视网膜色素上皮病变继发于脉络膜微循环异常.(中华眼科杂志,2009,45:243-247)     

吲哚菁绿分子荧光影像技术在乳腺癌单孔法腔镜前哨淋巴结活检术中的应用

目的:探讨吲哚菁绿(ICG)分子荧光影像技术在单孔法腔镜前哨淋巴结活检术中的应用价值.方法:选取2019年3月至2019年12月收治的行腔镜前哨淋巴结活检术的20例早期乳腺癌患者,均以ICG联合纳米碳混悬注射液作为示踪剂.手术切除的前哨淋巴结送术中冰冻病理检查及常规石蜡病理检查.比较前哨淋巴结检出率、前哨淋巴结转移数量...     

增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达栽体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况.方法 据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克隆EGFP编码序列;将其亚克隆入表达载体pTWIN1,得到以EGFP为标记的原核表达载体pTWIN-EGFP.转化大肠杆菌ER2566菌株,IPTG诱导EGFP基因表达.结果 经过IPTG诱导后,细菌培养物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光.结论 成功构建了原核表达载体pTWIN-EGFP,为应用EGFP作为报告基因和筛选标记奠定了实验基础.     

药用植物GAP生产的病害绿色防控发展策略

药用植物的GAP生产要求其栽培过程中病害的绿色防控.作者总结了病害农业防治和生物防治的研究成果,结合药用植物的特殊性提出药用植物病害绿色防控的概念,指出药用植物病害绿色防控要结合农业防治、现代植病研究方法、生物防治和科学用药协同进行,并作了展望,以期为药用植物GAP生产中病害绿色防控研究提供参考.     

微量淋巴细胞毒技术与核酸扩增荧光技术检测HLA-B27的对比

目的：通过比较核酸扩增荧光技术（PCR-染料法）和微量淋巴细胞毒技术在检测HLA-B27中的符合率,分析两种方法的优势与不足,探讨核酸扩增荧光技术（PCR-染料法）在HLA-B27检测中的临床应用价值。方法随机选取197例来我科就诊的疑似强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）患者的样本,分别使用微量淋巴细胞毒法和PCR-染料法检测。并对两种方法检测结果不符的样本进行测序复核。结果197例样本中,微量淋巴细胞毒法检出HLA-B27阳性150例,阴性47例;PCR-染料法检出阳性135例,阴性62例;两种方法检测结果有统计学差异（P＜0.01）。15例差异样本,两种方法与测序法相比较的符合率,微量淋巴细胞毒法为13.3%,PCR-染料法为86.7%。结论核酸扩增荧光技术（PCR-染料法）和微量淋巴细胞毒法比较,前者具有更高的临床准确性。在样本处理上PCR-染料法也更具优势,操作简单方便,有很强的临床应用价值。     

人涎腺癌原位转移裸鼠模型的建立

光学成像技术与基因标记技术结合的非侵入性在体分子荧光成像可以实时监测肿瘤的发生发展过程。本研究利用绿色荧光蛋白（GFP）转染人涎腺癌细胞ACC-M，建立了GFP标记肿瘤原位转移模型，并对模型进行了整体荧光成像的初步研究。实验结果表明光学成像可以从时间和空间上反映肿瘤转移的过程，因而这种模型同在体光学成像的结合为研究肿瘤治疗药物的筛选提供了一种很好的平台。