Comparison of assays for determination of peptide content for lyophilized thymalfasin*

Abstract: Precise determination of the peptide content in drug substance samples depends highly upon the particular peptide compound and methodology used. Four independent methods were evaluated and compared to determine which would produce the best experimental precision for analysis of thymalfasin (thymosin α‐1). Four different methods were evaluated including elemental analysis (CHN), quantitative amino acid analysis (AAA), high‐performance liquid chromatography (HPLC), and Kjeldahl. This study demonstrates that the AAA method is highly variable in one laboratory while quite precise in another laboratory. Similarly, HPLC results depended on the laboratory conducting the study with more precise values obtained under cGMP. On the contrary, the CHN method yielded highly precise [i.e. <2% coefficient of variation (CV)] values. As precise knowledge of protein content is fundamental for the compounding of final pharmaceutical product of a specific potency, the CHN analysis is recommended for peptide content determination of the drug substance thymalfasin.     

恒定分压CO2对羟基磷灰石溶解度的影响

[目的]应用固体滴定技术监测羟基磷灰石(Hydroxyaptite,HA)的溶解平衡过程,观察组织液生理浓度CO2对羟基磷灰石溶解度的影响.[方法]在恒温水浴系统中以HA为固体滴定物.测试液为KCl溶液(0.1 mol/L),并引入恒定分压的CO2(占空气体积比为3.5%±0.1%).半导体二极管激光为发射光源,散射光源探测器用于监测HA的溶解平衡过程并判断超越溶解平衡点所出现的沉淀(合共17次滴定终点).固体滴定总量用于代表溶解度等温线上的数据点.[结果]引入恒定分压CO2后测定的HA在KCl溶液中的溶解度高于其在KCl溶液中所得50倍以上.[结论]固体滴定技术利于监测HA的溶解平衡过程.溶液体系中CO2增加HA的溶解度.推测该现象与CO2-3形成的复合物密切相关.     

蛙皮素对PC-3细胞骨架及细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响。方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影响;②应用Fluo-3/AM荧光标记技术和LSCM检测不同浓度BBS(10-9、10-7、10-5mol/L)处理的PC-3细胞[Ca2+]i浓度。结果:①10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达及伪足形成;②BBS可提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度,并具有浓度依赖性。结论:实验证明一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度及CK表达,进而影响PC-3细胞骨架形态。本研究为探索BBS应用于肿瘤研究以及BBS作用后细胞内信息传递途径提供了基础。     

超声引导下犬肝注射醋酸高渗氯化钠混合液对射频消融毁损体积的影响

目的探讨超声引导下活体犬肝注射不同剂量的醋酸高渗氯化钠液(acetic acid hypertonic saline solution,AHS)后行射频消融(RFA),观察犬肝一次性毁损体积的变化。方法使用LDRF-120S多极RFA系统联合AHS对活体犬肝行RFA。健康成年杂种犬30只,随机分为5组(n=6)。A组:注射2ml AHS后立即行RFA;B组:注射2ml AHS后延时5min行RFA;C组:注射4ml AHS后立即行RFA;D组:注射4ml AHS后延时5min行RFA;E组:注射6ml AHS后立即行RFA。结果5组间平均起始阻抗差异无统计学意义(P>0.05);5组间平均消融时间差异有统计学意义(F=83.831,P<0.001),LSD-t检验分析各组间两两比较差异有统计学意义(P<0.001),在观察范围内E组平均消融时间最长;5组间平均毁损直径差异有统计学意义(F=53.488,P<0.001),在观察范围内E组平均毁损直径最大,LSD-t检验分析除D与E组间差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间两两比较差异有统计学意义(P<0.001);网状纤维染色显示凝固坏死区及其邻近的正常肝组织均可见血管内血栓形成;E组在AHS注射过程中出现不同程度的外溢;A、B、C及D组14d内无动物死亡,E组死亡4只。结论活体犬肝局部注射AHS4ml后延时5min行RFA即可达到较理想的毁损体积。     

复合干细胞生物陶瓷在裸鼠异位成骨中的评价

目的 研究h-BMP-2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)在复合煅烧骨、β-TCP或直接植入裸鼠股部后的成骨能力。方法 通过影像学、组织学和形态计量学等方法,观察未经诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs在复合煅烧骨,或多孔β-TCP后植入裸鼠皮下,或直接制成细胞悬液注入,在4、8、12周诱导成骨和材料降解情况。结果 在裸鼠皮下,单纯生物陶瓷不能诱导成骨,而复合了未诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs的生物陶瓷均能成骨,成骨量为h-BMP-2基因转染组>OS液诱导组>未经诱导组(P<0.05),B-TCP可随骨长入而降解;注入裸鼠肌肉的OS液诱导的和h-BMP-2转染的BMSCs均能诱导成骨,而未经诱导MSCs则不能成骨。结论 复合人BMP基因转染BMSCs的β-TCP是一种理想的骨修复材料。     

大鼠大脑中动脉闭塞后丘脑钙调磷酸酶含量与活性的研究

目的 揭示大脑中动脉闭塞(MCAO)后丘脑钙调磷酸酶(CaN)的时空变化规律，探讨CaN的作用机制。方法 制备大鼠大脑中动脉永久性闭塞模型，分别测定缺血后不同时间点病灶侧丘脑CaN的活性和含量。结果 缺血后24h始丘脑CaN的含量下降且不恢复；CaN的活性在缺血后2h和4h减弱，6h始恢复至正常水平。可见，CaN的活性与含量分离。结论 大脑中动脉闭塞后丘脑CaN活性独特的时间变化规律显示其参与介导继发性丘脑损伤，可能具有毒性作用。     

MR频谱检测乳酸的脉冲序列优化研究

目的通过改变一系列脉冲序列参数，以利于乳酸的最佳检测与定量分析。方法制作含乳酸玻璃模型。改变一系列的MR脉冲序列参数，应用点解析频谱序列(point resolved spectroscopy，PRESS)和激励回波序列(stimulated echo acquisition，STEAM)获得乳酸模型的相应频谱。另外，对12例脑病变患者和2例健康志愿者进行磁共振频谱检查，测量出每个波峰的峰高，并绘出序列变化曲线图。结果STEAM各波峰的峰向与PRESS序列一致，但STEAM各峰高均低于同等条件的PRESS峰。随着TE时间的延长，用乳酸模型测出的乳酸峰的峰高一序列曲线图呈波浪状变化，正向双峰在TE=26、270ms时共振波幅达到最大绝对值，负向双峰在TE=135～160ms之间达到最大绝对值。脑病变患者和健康志愿者的扫描结果表明，乳酸峰在优化的序列高于非优化的序列。结论优化的脉冲序列更有利于乳酸的检测与定量分析。     

市售三厂家18种复方氨基酸注射液的质量评价

目的对市售3厂家(A、B和E)共9批18种复方氨基酸注射液进行质量比较。方法参考国内外同类产品质量标准,从澄明度、透光率、性状、pH值、不溶性微粒、抗氧剂量、细菌内毒素和含量等方面进行比较。结果外观均为无色澄明液体,430nm波长处透光率均大于99%,pH在5.42～6.61间;A、B、E3厂不溶性微粒≥10、≥25μm的粒子数分别为1.41、0.32,0.83、0.21和1.55、0.56个/ml;抗氧剂的量分别为<33、近330和>500mg/L;细菌内毒素检查与含量测定符合中国药典及国家标准要求。结论不同厂家的产品质量确实存在一定的差异。     

草酸钙结石形成对肾组织bikunin和IαI表达的影响

目的研究肾草酸钙结石形成对肾组织bikunin基因和间α胰蛋白酶抑制物(IαI)蛋白表达的影响,探讨bikunin在尿结石形成中的意义。方法诱导实验性大鼠肾草酸钙结石模型,收集结石大鼠、正常大鼠、临床肾结石和非结石患者每组各8例的肾组织标本。采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和计算机图像分析技术分别检测所有大鼠和人肾组织中bikuninmRNA和IαI蛋白的表达水平。结果正常大鼠和非结石患者肾组织均存在bikuninmRNA和IαI蛋白的表达。肾草酸钙结石形成后,结石大鼠肾组织IαI蛋白的灰度值和bikuninmRNA的相对表达水平分别为198.43±15.17、0.70±0.14;肾结石患者肾组织IαI蛋白的灰度值和bikuninmRNA的相对表达水平分别为263.25±17.41、1.27±0.13,分别和对照组相比,均显著增加(P<0.05)。结论Bikunin作为构成IαI的轻链结构,在肾草酸钙结石形成后,bikuninmRNA的表达迅速增强,提示机体通过肾脏合成更多的bikunin来抑制肾草酸钙结石的形成。