基于HMGR、SQS1、β-AS基因CNVs的甘草道地性机制研究

本文利用real-time PCR方法对不同产地甘草的3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶 (3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase, HMGR)、鲨稀合成酶1 (squalene synthetase 1, SQS1)、β-香树脂醇合成酶 (β-amyrin synthase, β-AS) 基因的拷贝数进行了研究, 发现不同产地的HMGR基因存在1～3个拷贝数变异, SQS1基因存在1～2个拷贝数变异, 未发现β-AS基因拷贝数变异。甘草HMGR、SQS1、β-AS基因拷贝数存在5种自然组合类型: A型 (2+1+1)、B型 (1+1+1)、C型 (3+2+1)、D型 (2+2+1) 和E型 (3+1+1), 其中内蒙古杭锦旗甘草存在A、B两种类型, A与B的比例为1∶1.3; 内蒙古赤峰甘草也存在A、B两种类型, 但A与B比例为3∶1; 宁夏盐池甘草存在A、B、C、D 4种类型, A/B/C/D比例为1∶5.1∶1∶2, A/B比例为1∶5.1; 甘肃民勤甘草存在A、B、E 3种类型, A/B/E比例为4.1∶2.1∶1, A/B比例为2∶1。本研究证明中药功能基因基因组拷贝数变异 (copy number variations, CNVs) 与产地具有相关性, 可能是道地药材形成的机制之一。     

道地产区当归药材数学判别模式的构建研究

目的：采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件、SPSS 17.0统计软件对道地产区与非道地产区当归HPLC-DAD数据进行分析,建立道地与非道地产区当归分类模型,确定其分类参数,为当归道地性的分类和判别提供方法。方法：判别分析利用当归HPLC-DAD共有模式建立的Fish＇s判别函数,回代判别率为96.7%,外部验证正确率为100%。结果：采用色谱分析结合判别分析能够准确、便捷的对当归道地性进行判别和验证。结论：为当归道地性的判别提供了一定的科学依据。     

基于DNA条形码的龙葵系统发育及变异位点分析

目的对来自主要龙葵产区龙葵种质资源的转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)和trn H-psb A基因间隔区序列进行系统发育学分析,为龙葵资源的合理利用和道地性评价提供理论基础。方法用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法扩增龙葵ITS区和trn H-psb A的DNA序列,并与美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库进行比对获取ITS1+ITS2和trn H-psb A的DNA序列。用邻接法(Neighbor joining,NJ)和最大简约法(maximum parsimony,MP)构建系统发育树,用Kimura two-parameter(K2-P)模型分析遗传距离,用Clustal X和DNAman软件进行多重比对。结果 17个龙葵样品的ITS1序列长度均为230 bp,ITS2序列长度均为206 bp,trn H-psb A序列长度为446 bp或447 bp,3个序列分别存在7个、2个和3个变异位点。系统发育的方法将中国龙葵种质资源聚为3个类群,这些类群与其所处的纬度存在一定的相关性。遗传距离的分析结果显示来自广东梅州的样品与来自北京和河北等地的样品存在最大的遗传距离。结论系统发育和变异位点的分析为中国龙葵资源的利用和进化研究,以及龙葵资源的道地性评价提供了理论基础,变异位点的分析还可应用于相关种质资源的鉴定。     

植物药材道地性的分子机制研究与应用

道地药材生产是药用植物研究的核心内容。植物药材道地性是由其特定的次生物质形成与积累所引起的。次生产物产生和积累的关键酶基因是药用植物道地性形成的分子内因,诱导这些基因表达的生态环境和栽培措施是道地药材形成的外因。在药用植物道地性相关酶基因克隆的基础上,药用植物的细胞培养、毛状根培养和遗传改良等基因工程和道地药材的分子鉴定,在药用植物道地性品质的栽培调控方面将展现良好的前景。     

不同产地赤芍的FTIR指纹图谱对比分析

目的 寻找能够鉴别不同产地赤芍成分差异的新方法。探讨赤芍道地性的形成原因。方法 利用傅里叶变换红外光谱仪测定不同产地的样品，对所获得的指纹图谱进行特征峰指认和对比分析。结果 赤芍野生品与栽培品的红外吸收频率，吸收峰的相对强度都存在比较大的差异。多伦赤芍（道地药材）的红外吸收峰形状也有一定的特异性。结论 首次运用傅里叶变换红外光谱技术对不同产地芍药根部的混合化学体系进行了全组分快速分析，为赤芍道地商品的鉴别及质量控制提供了可靠的依据。     

不同产地何首乌的ITS序列研究

目的研究不同产地何首乌的ITS片段遗传差异性,分析该片段在何首乌道地性的DNA分子鉴别和野生资源品种的鉴定及种质资源研究中的意义。方法从来自不同原产地的何首乌中提取总DNA,以核基因组ITS通用引物为引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序法进行测序。结果各样品rDNA的ITS及5.8S rDNA完全序列,18S和26S rDNA部分序列,共约648bp,其中ITS1长度为195bp,5.8S长度为164bp,ITS2长度为189bp。序列间共有17个变异位点。结论ITS序列可对何首乌的道地性做出鉴别,对野生资源品种的鉴定具有较好的分辨性。     

不同产地何首乌的ITS序列研究

目的研究不同产地何首乌的ITS片段遗传差异性,分析该片段在何首乌道地性的DNA分子鉴别和野生资源品种的鉴定及种质资源研究中的意义。方法从来自不同原产地的何首乌中提取总DNA,以核基因组ITS通用引物为引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序法进行测序。结果各样品rDNA的ITS及5.8S rDNA完全序列,18S和26S rDNA部分序列,共约648bp,其中ITS1长度为195bp,5.8S长度为164bp,ITS2长度为189bp。序列间共有17个变异位点。结论ITS序列可对何首乌的道地性做出鉴别,对野生资源品种的鉴定具有较好的分辨性。     

九华黄精本草考证

查阅古今文献,对九华黄精的基原植物及药材使用进行本草考证。九华黄精基原植物为多花黄精,叶序类型为互叶型;九华黄精作为药用,其炮制方法主要为九蒸九晒法,近现代九华黄精从药用转为食用,可以进行九华黄精的食品开发,为九华黄精的现代化生产打下基础;但是目前仅能确定湖南、贵州、广西、安徽九华山所产多花黄精为佳,因此需进一步研究从而确定现代九华黄精是否可以成为道地药材。     

芍药野生与栽培群体的遗传变异研究

目的探讨芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的野生群体和栽培群体之间的遗传分化与中药材赤芍和白芍道地性形成的关系。方法应用RAPD技术,使用21条随机引物对来自11个产地的43株有代表性的芍药样品进行PCR扩增。结果(1)芍药在物种水平上的多态位点比率为85.26%,基因多样度为0.166;其中野生群体(77.61%)高于药用栽培群体(54.96%)及观赏栽培群体(61.76%);(2)芍药群体间的遗传变异占总变异的29.50%,基因分化系数为0.254;野生与药用群体之间遗传距离最远(0.3632),药用与观赏群体之间遗传距离最近(0.0973),群体间遗传分化显著(P<0.001);(3)从聚类图看,芍药种内大致分为野生与栽培两大类群。在野生群体中来自多伦的芍药单独聚为一类;在药用栽培群体中产于安徽亳州的与产于浙江磐安、缙云的芍药各聚为一类。结论首次揭示了芍药种群的遗传分化,在分子水平上为赤芍和白芍道地性的形成找到依据。鉴于多伦产芍药(赤芍道地药材的主要来源)的种质资源面临灭绝的危险,建议列为濒危种质加以保护。     

当归药材道地性的RAPD分析

目的 从DNA分子水平上探讨当归药材道地性的生物学基础。方法 对来自不同产地的18个当归样品,提取其基因组DNA,并进行PAPD分析。对筛选出的10个引物的RAPD结果进行聚类分析,得出18个当归样品的聚合树状图。结果 显示地理分布距离越小,当归的遗传差异越小;反之,越大。但生态环境特别是小生境对当归遗传差异的作用亦不可忽视。结论 为我们从分子生物学角度研究当归药材道地性提供了新的启示。