Implications of mismatch repair genes hMLH1 and hMSH2 in patients with sporadic renal cell carcinoma

OBJECTIVES

To analyse the implications of DNA mismatch repair genes hMLH1 and hMSH2 in sporadic renal cell carcinoma (RCC).

MATERIALS AND METHODS

Specimens of tumour and healthy renal tissue were collected from 89 patients treated for sporadic RCC. Another 95 blood samples taken from individuals with no history of cancer were also analysed. After DNA extraction and PCR amplification, microsatellite instability (MSI) was determined using the Bethesda microsatellite panel, two exonic microsatellites of the TGFbRII and BAX genes, and the microsatellite D3S1611. The promoter methylation status of hMLH1 was investigated using the HpaII and MspI restriction enzymes. In addition, a sequencing analysis of complete coding region of hMLH1 and hMSH2 genes was performed.

RESULTS

MSI and promoter hypermethylation of hMLH1 were not detected. Interestingly, loss of heterozygosity (LOH) was common among patients with RCC, particularly in microsatellite D3S1611 (34.9%). Mutations were identified in eight patients: K618A and V716M in gene hMLH1; and I145V, G322D, and the novel mutation P349A, in gene hMSH2. The mutations also appeared in healthy renal tissue and therefore, were considered as germline DNA sequence variations. There were G322D and K618A changes in >1% of the healthy control subjects, suggesting that they are DNA polymorphisms.

CONCLUSIONS

Our data show that loss of function of both hMLH1 and hMSH2 is not involved in sporadic RCC, either by promoter methylation or mutation in their exons. However, LOH indicated that chromosomal instability affecting large fragments of DNA was the main genetic alteration we detected associated with RCC.     

大肠癌中DCC基因与蛋白激酶C的表达与预后

目的 探讨大肠癌组织中 DCC（Deleted in Colorectal Carcinoma）基因和蛋白激酶 C（Protein Ki-nase C）的表达与预后的关系。方法 采用免疫组化 En VisionTM法,对91例大肠癌组织中的DCC蛋白及PKC表达状态进行检测,并对其结果与各临床病理因素和生存期的关系进行相关的统计分析。结果 91例大肠癌中DCC阴性率为43.9％,PKC阴性率为51.6％,两者的表达水平呈正相关（相关系数r=0.041,P=0.005）。其中DCC的表达与肿瘤分化程度、术后有无脏器的转移、5年生存率有统计学相关性（P<0.05）;而PKC的表达仅与肿瘤组织分化程度有统计学相关性（P=0.019）。利用Cox回归模型进行单因素和多因素分析,发现只有分期与DCC表达水平可做为大肠癌独立的预后因素。结论　DCC基因的表达缺失可以作为判断大肠癌转移潜能及预后的独立指标。     

血浆K-ras突变联合CA19-9检测对胰腺癌的诊断价值

目的: 探讨血浆K-ras基因突变联合CA19-9检测对胰腺癌的诊断价值.方法: 对连续58例疑为胰腺肿瘤患者,入院时抽取外周静脉血,分离血浆并提取DNA.采用突变富集PCR-RFLP法分析K-ras基因密码子12突变,用放射免疫法测定血清CA19-9.所有病例的血标本分析均在术前完成,并将检测结果与手术探查、病理诊断进行比较.结果: 41例胰腺癌患者中,血浆K-ras基因突变者29例(占70.7%),血清CA19-9升高者30例(占73.2%).联合K-ras与CA19-9检测胰腺癌的敏感性为90.2%(37/41).在其他17例非胰腺癌患者中,有3例血浆K-ras突变,8例血清CA19-9有升高.结论: 血浆K-ras突变可能是诊断胰腺癌的一个有价值的指标,若同时测定血清CA19-9,可提高检测胰腺癌的敏感性.     

以基因重组技术开发木聚糖类半纤维素资源

木聚糖类半纤维素是一类取之不尽而又亟待开发利用的碳水化合物，经生物降解后所产生的木糖和少量其它单糖，可以用作基本碳源生产各种发酵产品，包括有机酸、氨基酸、单细胞蛋白、糖醇、工业酶类、溶剂或燃料醇。有关半纤维素酶及其基因的研究已经积累了很多资料，其中包括木聚糖酶、木糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、木聚糖乙酰酯酶以及它们的基因。通过基因重组技术可以使发酵工程菌获得降解半纤维素的能力，或者把能有效降解半纤维素的微生物构建成发酵工程菌，从而把半纤维素转化为所需求的生物工程产品。     

抑癌基因ING1mRNA在大肠癌中的表达、突变分析及其意义

目的 探讨人大肠癌组织中ING1基因表达及突变水平与大肠癌临床病理特征的关系。方法 选择人大肠癌组织标本及正常对照52例，应用逆转录PCR法检测ING1mRNA的表达，用DNA单链多态性分析法检测基因突变情况；同时应用免疫组化方法检测大肠癌中p53蛋白的表达情况。结果 ING1mRNA在大肠癌中的表达较正常组织明显减弱，其低表达与肿瘤的Dukes分期及淋巴结转移显著相关（P≤0.01),ING1mRNA的表达水平与p53蛋白表达呈显著正相关（P≤0.01),ING1基因在大肠癌中的突变率极低。结论 ING1可能通过降低表达而不是通过突变在大肠癌发生发展中起重要调节作用。     

重组腺相关病毒介导抑癌基因联合诱导人肝癌细胞系凋亡与生长抑制研究

目的 观察腺相关病毒介导的抑癌基因p53,p16和p21联合治疗肝癌的可能性和效果。方法 用携带人野生型p53,p16和p21的腺相关病毒分别或联合转导人肝癌细胞系HLE，HepG2,QGY-7701,QGY-7703,BEL-7402,SMMC-7721，通过体外及裸鼠体内实验研究转基因的表达及对癌的促凋亡和生长抑制作用。结果 腺相关病毒介导的p53,p16及p21对人肝细胞肝癌细胞系均有明显的促凋亡作用，体外凋亡率约30％左右，体内生长抑制率30％－44％；联合感染肝癌细胞效果更明显，体外凋亡率达56％，体内癌生长抑制率65％。结论 腺相关病毒介导的外源抑癌基因p53，p16和p21不仅对多种肝癌细胞系均有诱导凋亡和抑制生长作用，联合应用治疗肝癌更具有明显的相互协同作用。进一步提高病毒滴度和纯度是腺相关病毒作为载体进行基因治疗的目标。     

应用生物信息学挖掘肝母细胞瘤发病差异基因

目的筛选肝母细胞瘤(hepatoblastoma)组织与小儿正常肝脏组织中的差异表达基因,探究肝母细胞瘤的发病机制,为其诊断和治疗提供新方向。方法从GEO数据库中检索获取肝母细胞瘤组织和小儿正常肝脏组织的芯片数据,通过R语言软件RSTUDIO筛选芯片中的差异表达基因,使用DAVID数据库对筛选所得的差异表达基因进行功能注释,通过STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,并进行中心性分析。结果经筛选共获得肝母细胞瘤组织中290个差异表达基因,其中上调基因99个,下调基因191个(P0.05)。GO(Gene Ontology)功能注释分析显示,上调差异基因主要涉及细胞分裂、细胞外外泌体、金属离子结合等94个功能簇,下调差异基因主要涉及脂蛋白代谢、细胞外外泌体、血红素结合等100个功能簇。蛋白质相互作用网络分析示IMPDH2、AGXT、ALDH1A1、ALDH2、PFAS、SERPINC1、AGXT2、KNG1、APOA1、MAT1A、APOC3和HSD17B6 12个基因为与其他节点关系最密切的核心调控基因。结论通过多种生物信息学方法联合分析三组高通量基因芯片,获得了肝母细胞瘤组织与正常小儿肝脏组织间的差异表达基因,并进一步从不同角度分析肝母细胞瘤异常增殖、转移等恶性生物学过程的发生机制,为肝母细胞瘤的诊断和治疗提供新方向。     

小剂量电离辐射可消灭部分肿瘤

小剂量电离辐射能减少肿瘤的转化、发生及生长,并在恶性淋巴瘤患者中进行临床试验,取得良好的治疗效果,其作用机制目前尚不十分清楚,可能与提高机体抗氧化能力、降低染色体损伤及增加损伤细胞的清除等机制有关。小剂量电离辐射可消灭部分肿瘤的发现,为白血病和真性红细胞增多症的治疗,开辟了一个新的途径。