BMI-1基因在66例白血病中的表达及其意义

目的：观察BMI—1（B-cell-specific moloney leukemia virus insert site 1）基因在白血病中的表达及其与白血病的关系。方法：应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术，分别检测慢性粒细胞白血病细胞株（K562），26例慢性粒细胞白血病（CML）患者，6例慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者，34例急性白血病（AL）患者和10例对照的骨髓单个核细胞（BMMNC）中BMI-1 mRNA的表达情况，分析其在白血病中的表达规律及临床意义。结果：BMI-1基因在10例对照组标本中无表达；K562细胞株中BMI-1纂因呈阳性表达；CML组中BMI-1基因的阳性率为15．4％，其中包括CML慢性期（CML—CP）及CML急变期（CML-AP），其阳性率分别为5％和50％；CLL组中BMI-1基因无表达；AL组中BMI-1基因表达率为47．1％，其中包括急忡髓系白血病（AML）及急性淋巴细胞白血病（ALL），其阳性率分别为57．7％和12．9％；CML-CP组与CML-AP组阳性率比较差异有统计学学意义（P〈0．05），初诊AL中，AML组和ALL组阳性率比较差异有统计学意义（P〈0．05），CML—AP组与初诊AL组阳性毕比较差异无统计学意义（P〉0.05）。对2例初诊BMI-1基因阳性表达患者随诊发现，初诊时BMI-1基因表达阳性，完全缓解后无表达，复发后再次表达，经再次治疗后仅达部分缓解，其BMI—1基因表达持续阳性。结论：BMI-1基因红出缸病中存在较高的表达，在正常人及完全缓解病例中无表达，且与疾病的转归相关，提示BMI-1基因高表达可能参与白血病的发生、发展过程，有可能作为一种分子标志，为白血病的靶向治疗提供新的位点。     

脂质体介导的p53基因转染对鼻咽癌细胞作用的研究

目的 通过转染野生型p53基因,观察其对鼻咽癌细胞CNE2生长的影响.方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒,用脂质体(lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,以RT-PCR检测p53基因的表达,通过细胞生长曲线、AO/EB染色和流式细胞术等方法对转染细胞的生物学行为进行检测.结果 人鼻咽癌CNE2细胞转染p53基因后,基因在细胞中表达增加,细胞的生长受到抑制,在荧光显微镜下观察到凋亡细胞增多,流式细胞技术显示细胞凋亡率增高.结论 采用脂质体转染野生型p53基因的方法,可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长,诱导鼻咽癌细胞凋亡.     

大鼠骨髓间充质干细胞谷氨酸诱导后Smac基因的表达及其意义

目的探讨骨髓干细胞（BMSCs）经谷氨酸培养后Smac基因表达情况及其是否参与了谷氨酸诱导的BMSCs凋亡调控。方法将原代培养的大鼠骨髓间充质干细胞，用流式细胞术鉴定细胞表型；加入30mmol／L谷氨酸培养后，采用DAPI荧光染色法，观察凋亡细胞的形态；用PL／Annexin—V双染法流式细胞仪计数各组（0、10、30、50mmol／L谷氨酸组）凋亡细胞的比例，通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）观察经30mmol／L、50mmol／L谷氨酸作用24h后Smac基因mRNA的表达变化。结果培养的BMSCs经流式细胞术鉴定发现：CD29，CIM4和CD105表达阳性，CIM5，CD14和CD34表达阴性，具备BMSCs的特征；经谷氨酸培养后，可见BMSCs细胞核皱缩，边聚，双核状；谷氨酸诱导组较多细胞呈凋亡改变，且随着谷氨酸浓度的增加，凋亡细胞的百分率也相应地增加（分别为14．24％、30．72％、93．31％）；RT—PCR法发现经30和50mmol／L谷氨酸作用后，BMSCs Smac基因表达较对照组升高（P〈0．05），且随着谷氨酸浓度的增加，Smac基因表达也相应增加。结论BMSCs经谷氨酸培养后Smac基因存在高表达，它可能参与了谷氨酸诱导的BMSCs凋亡调控。     

48例原发性不育患者染色体核型与AZF基因分析

目的探讨严重少弱精症和无精症的遗传病因。方法采用外周血染色体G显带，PCR技术以及PAGE电泳，对48例严重少弱精症和无精症患者进行外周血染色体核型分析及无精子症因子（AZF）基因的6个位点分析。结果48例中7例染色体异常，5例AZF基因有微缺失。结论严重少弱精症和无精症的发生与遗传密切相关，对男性不育患者进行治疗前有必要进行染色体核型分析及Y染色体AZF微缺失的检测。     

乳腺癌干细胞的富集及相关基因表达

目的通过微球体培养富集乳腺癌干细胞,并检测其相关基因的表达。方法将MCF-7乳腺癌细胞进行第一代微球体培养,7d后消化微球体获得单细胞悬液,取部分细胞进行第二代微球体培养,另一部分细胞则在胶原底物进行分化培养。于培养第11天收集第二代微球体细胞、分化细胞,采用流式细胞术进行干细胞比例分析;同时应用Real-time PCR技术检测β-catenin、CXCR4、SOX2、ALDH3A1 mRNA表达。结果流式细胞分析显示,微球体细胞和分化细胞的侧亚群细胞比例分别为(7.36±0.54)%和(4.32±0.42)%(P<0.05),CD55high比例分别为(17.41±1.09)%和(4.47±0.33)%(P<0.05)。Real-time PCR检测结果表明,微球体细胞与分化细胞相比,β-catenin、CXCR4、SOX2及ALDH3A1 mRNA表达分别上调了约1.5、5.0、4.0和5.7倍(P<0.01)。结论微球体细胞富集了较高比例的乳腺癌干细胞,且β-catenin、CXCR4、SOX2、ALDH3A1 mRNA呈现高表达。     

PICK1基因敲除小鼠的繁育及子代基因型的鉴定

目的 探讨蛋白激酶Cα相互作用蛋白(PICK1)基因敲除小鼠的优化繁育方法及 PICK1 基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,为进一步研究 PICK1蛋白的功能奠定基础.方法 用 6 种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组 DNA,用 PCR 方法扩增 PICK1 基因片段,电泳后观察结果.结果 PICK1 / 、PICK1 /-、PICK1-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性PICK1 基因突变纯合子小鼠有繁殖能力,雄性PICK1 基因突变纯合子小鼠无繁殖能力.琼脂糖凝胶电泳显示PCR 产物分子量大小为 400 bp 和 200 bp,与目的 基因片段相对分子质量大小一致.结论 雌、雄性PICK1 基因突变杂合子小鼠交配是繁育PICK1 基因突变纯合子子鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定PICK1 基因突变纯合子子鼠,为PICK1 蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型.     

XRCC3基因多态性与汉族人群膀胱癌的相关性

目的探讨DNA修复基因XRCC3多态性与膀胱癌危险性的关系。方法选择中国汉族人群中膀胱癌患者307例为病例组,316例非肿瘤泌尿系疾病患者为对照组,两组年龄性别构成均衡。以PCR RFLP技术,检测病例组和对照组的XRCC3(Thr241Met)基因型,比较不同基因型与膀胱癌危险性以及膀胱癌临床特征的关系。结果XRCC3基因型Thr/Thr、Thr/Met和Met/Met在病例组的分布频率分别为87.3%、12.1%和0.6%,在对照组的分布频率为92.4%、7.3%和0.3%。与携带Thr/Thr的个体相比,携带XRCC3变异基因型（Thr/Met和Met/Met）的个体具有更高的患癌风险（OR, 1.77;95%CI, 1.04～3.02)。XRCC3基因型与吸烟没有交互作用,与膀胱癌的临床类型亦无相关性,但与浅表性膀胱癌的复发关系密切。携带XRCC3变异基因型的浅表性膀胱癌患者具有更高的复发风险（OR,3.08;95%CI,1.13～8.41)。结论XRCC3基因多态性与膀胱癌危险性有关,携带变异基因型的个体易患膀胱癌,而且XRCC3基因有可能成为一个预测膀胱癌复发的指标。     

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及与临床意义. 方法 采用RT-PCR、免疫荧光法分别检测正常膀胱组织(12例)及膀胱癌标本中EZH2 mRNA(38例)及EZH2蛋白(68例)的表达. 结果 免疫荧光法检测显示正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为33.3%、79.4%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2蛋白表达率分别为65.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2蛋白表达率分别为68.9%、100.0%(P<0.05).RT-PCR检测结果 :正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为25.0%、84.2%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2 mRNA表达率分别为70.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2 mRNA表达率分别为72.7%、100.0%(P<0.05).EZH2在膀胱尿路上皮癌明显地高表达,EZH2表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期密切相关. 结论 结果 提示EZH2对于膀胱尿路上皮癌的早期诊断及判断预后可能有重要的意义.     

利用基因芯片筛选大肠癌中细胞增殖相关基因

目的 用基因芯片技术筛选大肠癌中细胞增殖相关基因. 方法 利用HG-U133 Plus2.0基因芯片.对大肠癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析. 结果 ①癌组织与正常组织比较,表达差异2倍以上基因共有1 200个,其中表达上调的474个,表达下调的726个.②在1 200个基因中,共有127个基因与细胞的增殖功能相关,其中表达上调的66个,表达下调的61个. 结论 127个细胞增殖相关基因可为大肠癌的基因治疗提供靶点.     

佛波酯对食管癌EC9706细胞NDRG_1表达及细胞增殖影响的研究

目的:探讨12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)作用于食管癌细胞EC9706后,对NDRG1mRNA表达、细胞增殖、细胞周期的影响。方法:采用50nmol/L的TPA作用于EC9706细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期的变化,原位杂交法检测NDRG1mRNA水平。结果:TPA能上调NDRG1mRNA水平,抑制EC9706细胞增殖,细胞周期发生G1→S期阻滞。结论:TPA可能通过上调NDRG1mRNA的表达而抑制EC9706增殖,促进其分化。