悬钩子木多糖的分离纯化及免疫调节活性研究

目的 从悬钩子木中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并进行免疫调节活性研究。方法 采用热水浸提法提取悬钩子木粗多糖（Rubus sachalinensis polysaccharides,RSP）,再经Cellulose DE-52纤维素离子交换柱、Sephadex G-100凝胶柱色谱进行分离纯化;利用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）鉴定纯度并测定相对分子质量;采用气相色谱分析其单糖组成;采用红外光谱和核磁共振波谱对其结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-2（IL-2）、γ-干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）释放能力的影响。结果 从悬钩子木中分离纯化得到RSP1-1和RSP1-2 2种多糖,相对分子质量分别为13 227（多分散指数1.15）和9 343（多分散指数1.08）;2种多糖均主要含阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比分别是RSP1-1（9.5：7.0：10.3：18.6）和RSP1-2（5.7：11.1：10.3：14.2）;红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明RSP1-1可能主要含有α-1,3-Ara、β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段,RSP1-2可能主要含有β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段。质量浓度在5~200 μg/mL时,RSP1-1、RSP1-2和RSP2均可刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖（P<0.05）,并且明显促进淋巴细胞分泌IFN-γ和TNF-α（P<0.05）,质量浓度为5 μg/mL时能促进淋巴细胞分泌IL-2（P<0.05）。结论 RSP1-1和RSP1-2均为首次从悬钩子木中分离得到的天然来源的均一多糖。红外光谱及核磁共振波谱进一步表征了其纯度和结构特征。RSP1-1、RSP1-2和RSP2均能不同程度促进脾淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α,呈现一定的免疫调节活性。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定芪胶膏中的黄芪甲苷含量

目的 建立测定芪胶膏中黄芪甲苷含量的高效液相色谱法.方法 采用Waters Symmetry Shield TM RP色谱柱C18(5 μm 4.6 mm×250 mm,柱子编号:186000112),以乙腈-水(34∶66)为流动相,流速1.0 ml/min,柱温40℃,漂移管温度60℃,载气压力30 psi.结果 黄芪甲苷进样量在1.9046～ 13.9674 μg范围内时,与峰面积积分值有良好的线性关系(r=0.9991,n=6),平均加样回收率为98.52％,RSD =3.7％ (n =6).结论 高效液相色谱-蒸发光散射检测法灵敏、简便、重复性好,可用于芪胶膏的质量控制.     

中药怀牛膝的液相色谱指纹图谱研究

目的：建立怀牛膝药材液相色谱指纹图谱检测方法,为其质量控制提供方法。方法：以蜕皮甾酮为参照物,采用RP-HPLC法,色谱柱为Kromasil-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为254nm。结果：该方法可使怀牛膝药材中各成分较好分离,并根据检测结果确定了14个共有指纹峰,建立了怀牛膝HPLC指纹图谱共有模式。结论：建立的指纹图谱方法简便可靠,可以作为怀牛膝药材质控的重要方法。     

Identification of metabolic pattern and bioactive form of resveratrol in human medulloblastoma cells

Cancer preventive reagent trans-resveratrol is intracellularly biotransformed to different metabolites. However, it is still unclear whether trans-resveratrol exerts its biological effects directly or through its metabolite(s). This issue was addressed here by identifying the metabolic pattern and the bioactive form of resveratrol in a resveratrol-sensitive human medulloblastoma cell line, UW228-3. The cell lysates and condition media of UW228-3 cells with or without 100 μM resveratrol treatment were analyzed by HPLC and LC/MS which revealed (1) that resveratrol was chemically unstable and the spontaneous generation of cis-resveratrol reduced resveratrol's anti-medulloblastoma efficacy and (2) that resveratrol monosulfate was the major metabolite of the cells. To identify the bioactive form of resveratrol, a mixture-containing approximately half fraction of resveratrol monosulfate was prepared by incubating trans-resveratrol with freshly prepared rat brain lysates. Medulloblastoma cells treated by 100 μM of this mixture showed attenuated cell crisis. The overall levels of the three brain-associated sulfotransferases (SULT1A1, 1C2 and 4A1) were low in medulloblastoma cells in vivo and in vitro in comparison with that in human noncancerous and rat normal cerebella; resveratrol could more or less up-regulate the production of these enzymes in UW228-3 cells but their overall level was still lower than that in normal cerebellum tissue. Our study thus demonstrated for the first time that trans-resveratrol is the bioactive form in medulloblastoma cells in which the expression of brain-associated SULTs was down-regulated, resulting in the increased intracellular bioavailability and anti-medulloblastoma efficacy of trans-resveratrol.     

阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质比较研究

 目的：研究中药阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质，寻求各自内在特征。方法：采用红外、紫外、原子吸收光谱、氨基酸自动分析色谱及PC，TLC，HPLC，SDS-APGE电泳法进行定性鉴别。结果：3种胶的UV光谱图、HPLC指纹图及SDS-PAGE电泳分析的分子质量分布差别显著。结论：UV光谱图、HPLC指纹图及蛋白质的分子质量分布可作为鉴别3种胶真伪优劣的依据。     

川芎药材超高效合相特征图谱的建立

目的构建川芎Ligusticum chuanxiong超高效合相色谱(UPC2)特征图谱,与HPLC特征图谱进行比较,为川芎质量评价提供新的参考。方法采用UPC2-PDA法,以CO2为流动相,异丙醇-甲醇(3∶7)为助溶剂,梯度洗脱,建立川芎药材化学成分特征图谱;利用主成分分析和聚类分析方法,分析川芎药材品质与产地的关联性。结果建立了不同产区川芎药材特征图谱,以藁本内酯为参照峰,确定了8个共有特征峰,同时指认了5种特征性成分;经主成分分析4个主成分因子的累积方差贡献率为93.097%,聚类分析将20批不同产地药材分为3大类。结论建立的川芎药材UPC2特征图谱的不仅精密度、重复性、稳定性良好,而且在分析方法上优于HPLC特征图谱,还可以对不同产地川芎药材品质进行快速、有效地评估。     

基于特征图谱对葛根配方颗粒过程控制的质量分析

[目的]通过特征图谱分析葛根饮片、标准汤剂、配方颗粒之间的相关性,以实现葛根配方颗粒过程控制的质量分析。[方法]采用UPLC建立特征图谱,测定葛根饮片、标准汤剂、配方颗粒中葛根素含量,同时以UPLC特征图谱为对照,建立三者特征峰共有模式,进行相关性评价。[结果] 24批葛根饮片、标准汤剂、配方颗粒中葛根素平均含量分别为5.8%、10.3%、7.8%,其特征图谱中均呈现8个共有特征峰,特征图谱相似度均大于0.90,表明这三者之间的物质成分一致。[结论]经方法学考察,建立的特征图谱方法稳定、含量测定准确度高,既可用于对葛根配方颗粒和葛根临床汤剂一致性评价,又可对葛根配方颗粒过程控制质量分析提供依据。     

沉香药材HPLC-DAD特征图谱研究

 目的 建立沉香药材的HPLC-DAD特征图谱。方法 采用Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长252 nm,柱温30 ℃,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速0.7 mL·min^-1,对23个批次沉香药材进行分析,并利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A进行数据处理。结果 通过多点校正及自动匹配,共确定了17个共有峰。通过与标准品比对,确证了其中的12个色谱峰。综合各批次沉香样品的差异、各成分含量及分离度,将其中的9个色谱峰设定为沉香药材的特征峰。以色谱峰1(沉香四醇)为参照,其他8个色谱峰的相对保留时间分别为1.033 6、1.219 3、1.248 6、1.783 3、1.891 5、1.918 4、2.404 6和2.458 2。结论 该方法符合方法学验证要求,可用于沉香药材的质量控制。     

柱色谱-分光光度法测定菝葜中总黄酮的含量

目的 建立测定菝葜中总黄酮含量的方法.方法 测定波长500 nm,以芦丁为对照品,采用柱色谱-分光光度法测定不同产地菝葜中总黄酮的含量.结果 芦丁在8.02～48.12 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为96.70%,RSD=1.24%.结论 所建方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于药材的质量控制.     

巫山淫羊藿饮片HPLC特征图谱研究及朝藿定C的定量分析

目的:建立巫山淫羊藿饮片中朝藿定C的含量测定方法及巫山淫羊藿饮片的HPLC特征图谱。方法:采用HPLC法对20批巫山淫羊藿饮片进行特征图谱研究,建立HPLC特征图谱共有模式,进行相似度比较,并将巫山淫羊藿饮片与淫羊藿饮片进行相似度比对。色谱条件:采用Welchrom C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1mL·min-1,检测波长270nm,柱温25℃。结果:朝藿定C进样量在0.0996～4.980μg(r=0.9996)范围内线性关系良好,巫山淫羊藿饮片羊油炙品和生品中的平均加样回收率(n=6)分别为100.7%(RSD=0.64%)和99.78%(RSD=1.5%);建立了巫山淫羊藿的HPLC特征图谱,确定了5个共有峰,巫山淫羊藿饮片生品和羊油炙品的平均相似度为0.91;巫山淫羊藿饮片与淫羊藿饮片的平均相似度为0.84,二者特征图谱差异明显。结论:巫山淫羊藿饮片和淫羊藿饮片特征图谱差异明显,可以作为饮片辨识和鉴别的参考方法。且该方法简便、准确,专属性强,为2010年版中国药典一部增订巫山淫羊藿饮片含量测定项进行了研究。