非洲紫罗兰原生质体的制备及不同组分培养基对细胞增殖的影响

目的 探讨非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）原生质体的制备方法,并比较不同组分培养基对原生质体再生及增殖的影响。方法 以非洲紫罗兰愈伤组织制备悬浮细胞,以细胞生长曲线确定最佳培养时间,并将纤维素酶（cellulase R-10）和果胶酶（pectolyase Y-23）按2︰1（质量比）混合分别酶解悬浮细胞18、20、24 h,比较原生质体得率和细胞活力以确定最佳酶解时间。分别以原生质体基础培养基提取愈伤组织提取物、根尖提取物及培养土浸出物配制培养基培养原生质体16 d,观察原生质体细胞壁再生并比较细胞增殖率。结果 悬浮细胞培养8天细胞增殖率最大,细胞活力93.8%; 4%（质量分数）纤维素酶和2%（质量分数）果胶酶混合酶解21 h原生质体得率达到峰值,细胞活力为75.2%,延长至24 h后得率与21 h相比,差异无统计学意义,但细胞活力降至69.5%。以不同组分培养基培养原生质体,最早于第6 d在愈伤组织提取物培养基中观察到再生细胞壁及细胞分裂;第16天,愈伤组织和根尖提取物培养基细胞增殖率显著高于原生质体基础培养基和培养土浸出物培养基,并以愈伤组织为佳,而培养土浸出物无促进作用。结论 以非洲紫罗兰愈伤组织悬浮细胞培养8 d并以4%纤维素酶和2%果胶酶混合酶解21 h能获得较多高活力的原生质体;愈伤组织提取物培养基能有效促进原生质体再生及细胞增殖。     

不同种类红豆杉愈伤组织的诱导及紫杉醇含量的差异

研究云南红豆杉、东北红豆杉、红豆杉、南方红豆杉和杂种红豆杉形成愈伤组织的一些因素,比较不同植株来源的愈伤组织系的生长特点和紫杉醇含量。通过考察愈伤组织形成的时间和比率来研究取样时间、当照条件、培养基中２,４－Ｄ浓度和外植体类型对愈伤组织诱导的影响,用高效液相色谱法测定愈伤组织中紫杉醇含量,愈伤组织形成的迟早和比率在不同种类红豆杉之间和同一种类不同植株之间差异较大,在黑暗中,在添加有０．１ｍｇ／ＬＢ     

南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件,在ＭＳ－培养基上,附加不同种类和浓度配比的激素,在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较,其中当２,４－Ｄ１．２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２． ８ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ或 ４ ｍｇ／Ｌ时,愈伤组织诱导率和生长量最高,结果表明,不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响。为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础,为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径。     

稀土元素对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响

目的:探讨稀土元素镧、铈对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响.方法:冬凌草均匀愈伤组织在添加不同浓度La3或Ce3的培养基中培养,通过质量法测定愈伤组织鲜质量、绘制生长曲线,HPLC测定甲素、乙素含量.结果:CeCl3·7H2O浓度为1μmol·L-1时,愈伤生物量最高,是空白条件下的2.4倍.空白及对照条件下甲素含量均为0;空白条件下乙素含量最低为0.11％,随着Ce3+浓度升高而升高,当浓度为10 μmol· L-1时高达0.58％;乙素随着La3+浓度升高而降低,当浓度为0.1 μmol· L-1时含量高达0.44％.结论:0～ 10 μmol·L-1的La3+及Ce3+均有利于冬凌草愈伤生物量的积累及乙素的合成,对甲素的合成无影响,将CeCl3 ·7H2O浓度10 μmol· L-1作为最佳条件选择.     

冬凌草细胞悬浮培养技术研究

目的:建立冬凌草细胞悬浮培养体系。方法:采用冬凌草愈伤组织为原材料,以MS培养基为基础培养基,分别对激素种类及浓度、愈伤组织接种量、继代培养起始密度以及最佳继代时间进行考察,绘制悬浮细胞生长曲线。结果:冬凌草细胞悬浮培养最佳培养基配方为MS、0.5mg·L~(-1)NAA、0.5 mg·L~(-1)2,4-D、0.5 mg·L~(-1)6-BA,愈伤组织接种量为60 g·L~(-1),继代培养起始密度为液体培养基量的四分之一,最佳继代时间为8天。结论:冬凌草细胞悬浮体系的建立,原材料愈伤组织至关重要,只有获得较为疏松长势良好的颗粒状愈伤组织才能用以建立细胞悬浮培养体系,因此在对愈伤组织的继代培养过程中,如何降低愈伤组织褐化率,促进愈伤组织生长有待于进一步探索。     

尼古丁对大鼠骨折愈合过程中骨痂含量变化及成熟度的影响

目的 探讨尼古丁对大鼠骨折愈合过程中骨痂含量变化及成熟度的影响.方法 60只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为模型组、轻度尼古丁组、重度尼古丁组,每组各20只,造模前对三组大鼠分别皮下注射0.5 ml/(kg·d)生理盐水、2 mg/(kg·d)尼古丁、4 mg/(kg·d)尼古丁连续3周.制造大鼠桡骨3 mm的横断骨折愈合模型;于术后3、7、14、21 d每组随机处死5只大鼠,取左侧桡骨标本作为观察对象,使用HE染色法检测骨痂厚度及成熟度.结果 造模后第3天,轻度尼古丁组、重度尼古丁组与模型组比较,骨痂厚度差异无统计学意义(P＞0.05),显微镜下骨痂成熟度无差异;造模后第7天模型组、轻度尼古丁组、重度尼古丁组骨痂厚度分别为(1.59±0.09) mm、(1.43±0.12)mm、(1.39±0.09)mm,第14天各组骨痂厚度分别为(1.98±0.12)mm、(1.78±0.08)mm、(1.68±0.09)mm,第21天各组骨痂厚度分别为(2.39±0.09)mm、(1.93±0.11)mm、(1.89±0.09)mm,各给药组与模型组比较,骨痂厚度差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);给药组骨痂厚度及骨痂成熟度较模型组低.结论 尼古丁影响骨痂增殖分化使骨痂含量减少及骨痂成熟延迟,而延缓骨折的愈合过程.     

药用植物茅苍术的组织培养

目的针对茅苍术野生资源濒危的情况,系统地探讨了以组织培养为手段进行快速繁殖的途径。方法以叶柄和叶片为外植体,在MS培养基上添加不同的激素配比进行培养。结果较适宜诱导叶柄形成愈伤组织的激素组合是2,4-D 4.0 mg.L-1+Kt 0.4 mg.L-1,叶片适宜诱导愈伤组织的激素组合是2,4-D4.0 mg.L-1+Kt 0.4 mg.L-1;对于芽的增殖,较适宜的激素组合是6-BA2.0mg.L-1+IBA0.4 mg.L-1或6-BA3.0 mg.L-1+IBA0.4mg.L-1;而根的诱导则在MS+IAA0.5 mg.L-1或MS+NAA0.5 mg.L-1培养基上进行最好。结论采用组织培养方式可以进行茅苍术的快速繁殖,为确保这一珍稀药用植物资源的保护和可持续利用提供了有效途径。     

黑果枸杞基茎丛生芽诱导及植株高效再生体系的建立

目的优化黑果枸杞Lycium ruthenicum离体培养方法及条件,探索有效增殖方式,筛选适宜的植株再生途径,建立其人工高效繁殖技术体系。方法以无菌实生苗带1～2个节的茎段为材料,采用MS、改良的MS1以及改良的MS2为基本培养基,通过单因素、完全组合及L_9(3~4)正交试验研究不同植物激素种类及其质量浓度对愈伤组织诱导、腋芽萌发、基茎不定丛芽诱导及植株再生的影响。结果在MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L培养基中,可诱导出大量愈伤组织,但其再分化能力较弱,培养35 d后最高增殖系数仅为4.36;而在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.05 mg/L+KT 0.5 mg/L中培养,随着腋芽萌发,茎段与培养基接触的节处开始膨大并出现不定芽点,萌发出基茎丛生芽,发生率达100%,培养45 d增殖系数最高可达到42.84;试管苗生根的适宜培养基为改良的MS1+NAA 1.0 mg/L,培养40 d后生根率达98.9%;试管苗经炼苗后移栽成活率90%以上。结论研究通过基茎丛生芽这一全新的增殖途径,成功建立了黑果枸杞体外高效再生体系,不仅大大提高了试管苗的产量及品质,也为枸杞属其他植物的体外快繁提供了另一思路。     

贯叶金丝桃愈伤组织的诱导及其有效成分的定性

目的 :诱导出贯叶金丝桃的愈伤组织 ,并确定其中含有金丝桃素。方法 :在不同条件下采用组织培养技术 ,进行贯叶金丝桃的愈伤组织诱导研究 ,用HPLC方法确定其中含有的金丝桃素。结果和结论 :最佳诱导条件是MS基本培养基加入生长调节物质 2 ,4 D(4μg·L- 1 )和 6 BA(0 .2 μg·L- 1 )。叶腋等分生组织较多的部位易于诱导愈伤组织。诱导出的愈伤组织 ,经HPLC方法确定其含金丝桃素     

珍稀药材小蔓长春花组织培养及长春胺含量的测定

目的:研究不同植物生长物质配比对小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织诱导的影响,及各生长期无菌植株、愈伤组织中长春胺含量差异.方法:以小蔓长春花无菌苗的叶、茎、根为材料,采用正交设计实验研究2,4-D,6-BA,NAA对小蔓长春花愈伤组织诱导的影响.在无菌植株生长20,40,60 d,愈伤组织形成高峰期30 d,继代培养30 d时,采用HPLC分别对其中的长春胺含量测定,实验数据进行统计分析.结果:培养基中添加的6-BA,NAA对小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织的诱导、生长无显著影响,而2,4-D则影响显著.无菌植株生长20,40,60 d时,长春胺分别为(0.015±0.003)%,(0.097±0.001)%,(0.113±0.06)%;诱导培养、继代培养至30 d时,小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织长春胺分别为(0.024±0.0025)%,(0.016±0.0015)%,(0.010±0.0015)%,(0.041±0.002)%,(0.019±0.001)%,(0.016±0.002)%.结论:诱导小蔓长春花叶、茎、根愈伤组织形成的最适培养基为MS+2,4-D 1.0mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1.不同生长期无菌植株中长春胺含量差异显著,源于不同外植体的愈伤组织中的长春胺含量不同,其中叶诱导的愈伤组织长春胺含量显著高于茎、根产生的愈伤组织.