运用超高效液相色谱-生物化学检测在线联用分析方法筛选中药中的丁酰胆碱酯酶抑制剂

目的:建立超高效液相色谱(UPLC)-生物化学检测(BCD)在线联用技术快速筛选中药中的丁酰胆碱酯酯酶(BChE)抑制剂的方法.方法:运用UPLC-DAD-BCD方法快速筛选吴茱萸、钩藤、苦参、山豆根提取物中的BChE抑制剂.以莲心碱为阳性对照,考察UPLC-DAD-BCD方法用于BChE抑制剂筛选的可行性.运用超高效...     

基于网络药理学探讨人参-钩藤药对治疗原发性高血压的作用机制

目的基于网络药理学探究人参-钩藤药对治疗原发性高血压有效成分的靶基因及作用机制。方法通过中药系统药理学数据库(TCMSP)中药数据库检索人参-钩藤药对的化学成分和靶基因,以生物利用度(OB)>30%和类药性(DL)>0.18为条件筛选药对的潜在有效成分,并通过TCMSP数据库预测药对的潜在靶点。运用Uniprot数据库寻找到潜在靶点相对应的人类基因名称,通过GeneCards数据库检索原发性高血压的疾病靶点,与药对的潜在靶点相映射,绘制韦恩图,将映射找到的有效成分的靶基因导入Cytoscape 3.7.2构建疾病-药对-成分-靶点网络图。利用STRING数据库构建蛋白互作网络图选出核心靶标,最后将人参-钩藤药对治疗原发性高血压的有效靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果共获得人参-钩藤药对46个有效成分和176个有效靶点。GO分析发现,主要途径有调控核受体活性、转录因子活性、肾上腺素能受体活性、类固醇激素受体活性、G蛋白偶联胺受体活性等。KEGG通路富集分析发现,主要通路为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路等。结论人参-钩藤药对通过多种靶点、多种途径、多种信号通路协同发挥治疗原发性高血压的作用,为进一步药物作用机制的研究提供理论基础,并为指导临床提供依据。     

钩藤叶化学成分的研究

目的 研究茜草科植物钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks.叶的化学成分.方法 用多种色谱方法和重结晶法进行分离和纯化,经理化、光谱和色谱分析等方法鉴定结构.结果从钩藤叶中分离得到5个化合物,鉴定为喜果苷(vincoside lactam,Ⅰ)、异去氢钩藤碱(isocorynoxeine,Ⅱ)、异钩藤碱(isorhynchophylline,Ⅲ)、去氢钩藤碱(corynoxeine,Ⅵ)、钩藤碱(rhynchophylline,Ⅴ).结论化合物Ⅲ为首次从钩藤叶中分离得到,通过2D-NMR技术完善了化合物Ⅲ的核磁数据.     

气相色谱(GC)法测定钩藤中钩藤碱的含量

目的:建立气相色谱测定钩藤中钩藤碱含量的方法。方法:采用非极性毛细管柱AT.SE-54(15m×0.25mm×0.33μm);柱流速1.0ml.min-1;柱箱起始温度150℃,保持15min,以10℃.min-1的速率升至230℃,保持8min;进样口温度:280℃;检测器(FID)温度:280℃;载气为氮气。结果:钩藤碱在0.25442～1.2721μg范围内,线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为99.21%,平均RSD为1.32%。结论:该方法稳定,结果可靠,重复性好,可作为可为钩藤质量控制标准的制定提供相应的依据。     

三种一般钩藤ITS序列的RFLP分析

目的以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对采集自3个不同地区的一般钩藤Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jack.进行RFLP遗传分析,研究不同地理区域一般钩藤的rDNA ITS序列是否具有生物地理差异。方法通过改良CTAB法提取一般钩藤总DNA,利用通用引物对其rDNA ITS序列进行PCR扩增,并对连接转化后扩增得到的rDNAITS序列进行限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)分析。结果获得采集自广东韶关阳山、广东梅州大埔、广西植物园的3种一般钩藤两种限制性内切酶(Msp I&HaeⅢ)酶切图谱。结论通过基于rDNAITS序列进行的RFLP分析,表明这3个地区的一般钩藤rDNA ITS序列无明显差异,不同区域的一般钩藤其遗传本质不具有地理差异。     

钩藤属植物部分品种药材钩藤碱成分的分析

目的:探索钩藤属部分品种钩藤碱成分的含量,为评价这些品种药材质量提供试验依据.方法:应用HPLC测定钩藤属攀茎钩藤、侯钩藤、毛钩藤、倒挂金钩、北越钩藤和华钩藤33批不同产地药材钩藤碱含量.采用Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(含0.002 mol·L 1三乙胺,用冰乙酸调pH7.5)(64∶36),流速为1.0 mL·min-1,检测波长254 nm.结果:攀茎钩藤和侯钩藤有5批样品可检出钩藤碱,但含量均较低,其余样品均未能检出钩藤碱.结论:试验所用钩藤属不同品种质量有所差异,同一品种质量随着产地不同而异.     

天麻钩藤饮联合西药治疗高血压随机平行对照研究

[目的]观察天麻钧藤饮联合西药治疗高血压疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将120例住院患者按随机数字表法分为两组。对照组60例硝苯地平控释片,30mg/次,1次／d,晨起服用,血压不能达标加用其他类型降压药。治疗组60例天麻钧藤饮（天麻15g,钩藤、石决明各25g,山栀15g,黄芩10g;牛膝15g,杜仲10g,益母草、桑寄生各10g,夜交藤15g,茯神10g）,1剂／d,水煎350mL,早晚温服。西药治疗同对照组。连续治疗15d为1疗程。观测临床症状、清晨血压、24h动态血压、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]治疗组显效31例,有效19例,无效10例,总有效率83．33％。对照组显效27例,有效16例,无效17例,总有效率71．67％。治疗组疗效优于对照组（P〈0．05）。24h动态血压及高血压两组均有改善（P〈0．05）,治疗组改善优于对照组（P〈0．05）。[结论]天麻钩藤饮联合西药治疗高血压疗效满意,值得推广。     

HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨

目的:探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法.方法:采用RP-HPLC,对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察,同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况.结果:钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用同流提取时,平均加样回收率87.51％～88.83％,提取回收率12.60％;当样品采用超声提取时,平均加样回收率99.48％ ～ 103.2％,提取回收率47.08％.异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用回流提取时,平均加样回收率107.9％～113.9％,提取回收率40.00％,当样品采用超声提取时,平均加样回收率97.00％～99.59％,提取回收率51.03％.质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱,有一小部分转化为未知成分;异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid4种成分.结论:HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法,并应注意同收率问题.     

两种大叶钩藤ITS序列的RFLP分析

目的通过对两种不同产地大叶钩藤（Uncaria macrophylla Wall.）的核糖体内转录间隔区（rDNA ITS）序列进行RFLP遗传分析,研究不同地理区域大叶钩藤的rDNA ITS序列是否具有生物地理上的差异。方法通过CTAB法提取样品DNA,利用通用引物对其rDNA ITS进行PCR扩增,从而对连接转化后扩增得到的rDNA ITS序列进行限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP）分析。结果获得采集自广东肇庆鼎湖山和广西植物园的两种大叶钩藤两种限制性内切酶（MspⅠ＆HaeⅢ）酶切图谱。结论基于对rDNA ITS序列进行的RFLP分析,表明这两个地区的大叶钩藤rDNA ITS序列并无明显差异,不同地理区域的大叶钩藤其遗传本质不具有地理差异。     

HPLC测定天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量

目的：建立天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量测定方法。方法：采用InertsilODS（250ram×4．6mm,5斗m）色谱柱,流动相乙腈（A）一0．2％磷酸水（B）进行梯度洗脱（0—20min,A：B=2：98;20—22min,A：B=2：98一A：B：11：89）,流速为1．2mL／min,检测波长220nm,柱温30~C。结果：测定天麻素在19．3—193．21xg线性关系良好（r：O．9997）,松脂醇二葡萄糖苷在6．12—61．2斗g线性关系良好（r=O．9999）,平均回收率分别为100．2％和98．5％。结论：本方法简便、准确,可同时测定天麻钩藤饮中天麻素和松脂醇二葡萄糖苷的含量。