钩藤总生物碱对慢性束缚应激小鼠的抗抑郁作用

目的 研究钩藤总生物碱(TAU)对慢性束缚应激(CRS)抑郁模型小鼠的抗抑郁作用.方法 将小鼠束缚在特制的离心管内,每天8 h、连续10 d,制作小鼠抑郁模型,并灌胃给予不同剂量的TAU(80、40、20 mg/kg)和氟西汀(Fluoxetine,FLU 10 mg/kg)治疗.以自主活动实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验评价各组小鼠抑郁行为,用ELISA法测定小鼠血清皮质酮(CORT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和NO的含量.结果 TAU能显著增加小鼠体质量,缩短抑郁模型小鼠强迫游泳不动时间及提高小鼠糖水偏好值,改善小鼠抑郁行为;且TAU能显著降低抑郁小鼠血清CORT、TNF-α和NO水平.结论 TAU具有明显的抗抑郁作用,其机制可能是通过调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能,减少血清中TNF-α和NO含量.     

钩藤总碱的提取工艺和急性毒性及其对人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的 利用正交试验优选钩藤最佳提取工艺,研究钩藤总碱对小鼠急性毒性和对过氧化氢(H₂O₂)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用。方法 采用L₉(3⁴)正交试验法,选择乙醇浓度、提取次数、提取时间、物料比为考察因素,用HPLC测定异钩藤碱、钩藤碱、去氢毛钩藤碱和毛钩藤碱含量并计算转移率,以主成分分析综合得分为指标,优选钩藤总碱的最佳提取工艺。选用KM小鼠,灌胃钩藤总碱溶液,进行最大耐受量(maximum tolerated dose,MTD)的测定,观察14 d内小鼠情况变化,后摘眼球取血,测定小鼠血清中的尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT)含量变化。测定钩藤总碱对1.0 mmol·L^-1 H₂O₂诱导损伤的HUVEC存活率和上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、内皮素(endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量的影响。结果 优选的钩藤总碱最佳提取工艺为用70%乙醇加热回流提取2次,每次2 h,物料比1:8。急性毒性试验表明,给药后14 d内,各组小鼠活动正常、无明显不良反应、无死亡;钩藤总碱溶液对小鼠的MTD为21.0 g·kg^-1·d^-1,相当于临床成人日用量的1 377倍;与空白组比较,钩藤总碱组GPT显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组HUVEC存活率及上清液中NO含量显著降低(P<0.01或P<0.05),LDH、ET-1含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,钩藤总碱5 μg·mL^-1细胞存活率显著升高(P<0.01),LDH、ET-1含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论 优选的钩藤总碱提取工艺简单可行,钩藤总碱对小鼠急性毒性较小,对HUVEC损伤有保护作用。     

基于网络药理学、分子对接与实验验证探究钩藤治疗热性惊厥的作用机制

目的 通过网络药理学与分子对接技术探究钩藤Uncaria rhynchophylla治疗热性惊厥的作用机制,并进行实验验证。方法 通过TCMSP与BATMAN-TCM数据库检索钩藤活性成分及相关作用靶点,用TCMSP、PubChem数据库和SwissADME平台对活性成分进行筛选;通过GeneCards数据库和OMIM数据库提取热性惊厥疾病靶点,经Uniprot数据库进行蛋白-基因symbol转换;药物靶点与疾病靶点取交集绘制Venn图,通过STRING数据库绘制蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络,使用Cytoscape 3.7.2软件构建“中药-活性成分-关键靶点-疾病”网络,采用DAVID v6.8在线分析平台对关键靶点进行基因本体（gene ontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,利用Cytoscape 3.7.2软件将富集分析结果可视化并将分析所得关键化合物及靶点进行分子对接。通过免疫组化、Western blotting及脑片膜片钳技术对钩藤的作用机制进行验证。结果 得到钩藤活性成分29个,活性成分对应靶点297个,活性成分靶点与疾病靶点取交集得到关键靶点81个。KEGG通路富集分析结果显示,钩藤治疗热性惊厥主要作用于神经元配体-受体相互作用、尼古丁成瘾、环磷酸腺苷信号通路。GO功能富集分析结果显示,尼古丁反应、质膜和细胞外配体门控离子通道活性显著性最大。免疫组化及Western blotting结果显示,钩藤显著抑制热性惊厥模型乳鼠脑组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（N-methyl-D-aspartic acid receptor 2A,NMDAR2A）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（N-methyl-D-aspartic acid receptor 2B,NMDAR2B）的表达（P＜0.05、0.01、0.001）。脑片膜片钳实验结果显示,钩藤对海马CA1区锥体神经元NMDA受体诱发兴奋性突触后电流（NMDA receptor evoked excitatory postsynaptic currents,eEPSC_NMDA）具有抑制作用。结论 通过网络药理学及分子对接技术发现了钩藤治疗热性惊厥的活性成分及作用靶点,通过免疫组化、Western blotting及膜片钳技术证实了钩藤对NMDAR的抑制作用,为进一步研究钩藤治疗热性惊厥的作用机制、药物研发等提供理论基础。     

不同功能区土壤-钩藤系统重金属累计特征及评价

以不同功能区土壤及钩藤为研究对象,探讨了不同功能区土壤和钩藤中重金属含量,分析了重金属在钩藤中的富集特征,并对不同功能区土壤重金属污染进行评价,结果表明:土壤中铜(Cu)、砷(As)、铅(Pb)和铬(Cr)表现为耕地林地荒地,镉(Cd)表现为林地耕地荒地,汞(Hg)表现为耕地荒地林地;参照《土壤环境质量标准》,Cd在林地、耕地和荒地下均超过了一级标准,林地下Cd超过了二级标准,耕地和荒地下Hg超过了一级标准;以《绿色食品产地环境技术条件》为标准,林地下土壤Cd超过了标准规定的限量值;依据《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,3种功能区下钩藤中重金属均符合标准;从单因子污染指数来看,林地土壤受到重金属Cd的污染;从综合污染指数来看,钩藤在不同功能区下土壤都没有受到重金属的污染;钩藤钩对Cu,Cr,Pb,As的富集系数为荒地林地耕地,荒地下钩藤钩对重金属Cu的富集系数大于1;除Cu外,其余重金属富集系数均比较低。     

Neuroprotective effect of 1-methoxyoctadecan-1-ol from Uncaria sinensis on glutamate-induced hippocampal neuronal cell death

Ethnopharmacological relevance

We isolated a single compound, 1-methoxyoctadecan-1-ol (MOD), from dried hooks and stems of Uncaria sinensis, which is used in traditional Korean medicine to provide relief from various nervous related symptoms.

Materials and methods

Neuroprotective effects of MOD against glutamate-induced oxidative stress in HT22 cells were investigated by analyzing cell viability, lactate dehydrogenase, flow cytometry, reactive oxygen species (ROS) and Western blot assays.

Results

Exposure to glutamate alone resulted in remarkable hippocampal neuronal cell death; however, pretreatment with MOD resulted in suppression of neuronal death and ROS accumulation in connection with cellular Ca²⁺ level after exposure to glutamate. Stimulation by glutamate also caused significant protein level of phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinases (MAPK), and dephosphorylated phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K), however, pretreatment with MOD resulted in inhibition of these changes in protein level. Treatment with glutamate alone led to suppressed protein level of mature brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and phosphorylated cAMP response element binding protein (CREB); however, pretreatment with MOD resulted in significant enhancement of this level of protein. Anti-oxidant N-acetyl-L-cysteine and both Ca²⁺ inhibitors, BAPTA and EGTA, showed effects similar to those of MOD in all proteins examined, except mature BDNF.

Conclusions

Our results suggest that MOD mainly exerted neuroprotective effects in suppression of ROS accumulation and up-regulation of mature BDNF in association with p38 MAPK and PI3K signaling in hippocampal neuronal cells.     

辨证施护联合常规护理麻疹逆症30例临床观察

[目的]观察辨证施护联合常规护理麻疹逆症疗效。[方法]采用前瞻性设计方法,对30例住院患者进行常规护理(环境护理;高热护理;眼、口腔及皮肤护理);辨证施护,a.邪毒闭肺,麻杏石甘汤(麻黄炙3g,生石膏15g,杏仁5g,前胡、黄芩10g,芦根15g,苏子、葶苈子5g,甘草3g),1剂/d,水煎300mL,早晚温服;联合抗生素,重症患儿加丙种球蛋白;b.邪毒攻喉,清咽下痰汤(玄参、射干、桔梗、牛蒡子各6g,金银花5g),1剂/d,水煎100mL,喷喉或含漱;c.邪陷心肝,羚角钩藤汤(水牛角15g,钩藤、菊花、石菖蒲、竹茹、茯神各10g,白芍15g,甘草3g),1剂/d,水煎300mL,早晚温服。连续治疗7d为1疗程。观测临床症状、麻疹、体温、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]痊愈30例,总有效率100%,平均住院天数13±1.5d。[结论]辨证施护联合常规护理麻疹逆症效果满意,值得推广。     

论钩藤的带钩率与质量控制

目的 论钩藤的带钩率与质量的关系,建立钩藤的显微鉴定和异钩藤碱的高效液相含量测定.方法 采用中药材粉末显微鉴定法,寻找钩藤药材在显微镜下的最常见的特征性细胞与带钩率的关系;用高效液相法测定不同带钩率的钩藤药材提取物的异钩藤碱含量.结果 显微鉴定:特征性细胞与带钩率不同有关联;含量测定方法:操作简单,准确,异钩藤碱在1.0943～70.0350 μg之间呈良好的线性关系,异钩藤碱的回收率为 97.83%.结论 本实验用定性、定量方法来检验不同带钩率的钩藤药材与提取物的质量,对药材的进一步开发利用提供了科学依据.并对传统用药习惯进行论证.     

倒挂金钩茎枝的化学成分研究

目的研究倒挂金钩Uncaria lancifolia茎枝的化学成分。方法采用硅胶、RP18、Sephadex LH-20等柱色谱和高效液相色谱技术进行化合物的分离和纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从倒挂金钩茎枝的95%乙醇提取物中分离得到18个化合物,分别鉴定为台钩藤碱A(1)、台钩藤碱E(2)、异帽柱木菲碱(3)、四氢脚鸭木碱(4)、异胡豆苷(5)、卡丹宾碱(6)、glabratine(7)、异长春花苷内酰胺(8)、(13R)-hydroxy-octodeca-(9Z,11E,15Z)-trien-oic acid(9)、(6S,9R)-长寿花糖苷(10)、苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、integracin A(12)、integracin B(13)、6β,19α-二羟基乌苏-3-氧代-12-烯-28-酸(14)、乌苏酸(15)、齐墩果酸(16)、β-谷甾醇(17)、β-胡萝卜苷(18)。结论首次对倒挂金钩中的化学成分进行了研究,所有化合物均首次从该植物中分离得到,化合物9~13首次从该属植物中分离得出。化合物1~8为单萜吲哚生物碱,是钩藤属植物中的特征性成分。     

中药减压提取沸点与饱和蒸气压关系影响因素研究

目的研究减压提取工艺条件下水和不同体积分数乙醇沸点、饱和蒸气压的相关性,并比较不同药材(穿心莲、红花、白芷、钩藤、黄芩、丹参、陈皮)的加入和不同粒径药材的加入对饱和蒸气压的影响。方法采用理论计算和仪器实验测定结合方法,获取不同沸点下和饱和蒸气压的理论值及实测值,并进行统计分析。结果得到饱和蒸气压与溶剂乙醇体积分数和沸点之间的回归方程P=76.467 1+0.035 2 T2+1.201 0TV-30.749 4V2-3.123 9T-14.966 7V;实验条件下,水和不同体积分数乙醇纯溶剂饱和蒸气压理论值较实测值小;加入药材后饱和蒸气压实测值比纯溶剂实测值增大;药材粉碎后,提取温度达到一定温度后饱和蒸气压会降低。结论药材的加入和粉碎对溶剂饱和蒸气压有影响,但其变化范围小。     

天麻钩藤饮治疗偏头痛40例

目的:观察天麻钩藤饮治疗偏头痛的临床疗效。方法:将80例偏头痛患者随机分为对照组和治疗组,每组各40例。对照组口服氟哌噻吨美利曲辛片,每次1片,早晨、中午各1次;治疗组在对照组基础上服天麻钩藤饮。观察两组患者治疗前后每个月头痛发作次数、每次头痛持续时间及中医证候积分情况。结果:治疗组患者治疗后4周、治疗后8周每个月头痛发作次数及每次头痛持续时间均短于对照组治疗后同期,差异具有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后中医证候积分低于治疗前,且治疗组低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:天麻钩藤饮治疗偏头痛能够有效改善临床症状。