通过阻断GntR家族调控基因ygrA挖掘海洋链霉菌Streptomyces sp. OUC6819中抗MDR菌活性次级代谢产物

激活南海红树林来源链霉菌Streptomyces sp.OUC6819菌株中不表达或表达量低的隐性生物合成基因簇,挖掘具有优良多重耐药菌（MDR）抗菌活性的次级代谢产物。方法 通过生物信息学分析推测Streptomyces sp.OUC6819基因组中可能的GntR家族调控子,采用PCR-targeting策略敲除其中的ygrA基因,HPLC分析突变株和野生株的发酵产物的差异,并比较粗提物对5株MDR菌抑制活性。结果 HPLC分析结果表明与野生株相比,突变株中化合物1和化合物2产量分别产量提高了9倍和7倍;突变株发酵液粗提物对其中3株MDR菌抑制活性较野生株明显提高。结论 通过阻断GntR家族调控子ygrA激活了Streptomyces sp.OUC6819菌株中具有抗MDR菌活性次级代谢产物合成基因簇的表达,为从中发掘新的抗MDR菌抗生素奠定了必要基础;同时,将为其他海洋链霉菌中隐性基因簇的激活提供重要参考。     

Pseudoverticin B,a novel geldanamycin analog obtained as new cell cycle inhibitor from Streptomyces pseudoverticillus YN17707

Pseudoverticin B (1), a novel naturally occurring geldanamycin analog with cell cycle inhibitory activity, was isolated from the fermentation broth of Streptomyces pseudoverticillus YN17707, together with the known ansamycin antibiotic, hydroquinone geldanamycin (2), through bioassay-guided fractionation procedures. The structure of compound 1 was elucidated by spectroscopic methods, being characterized by an ansa bridge, same as that in geldanamycin and a novel hydroquinone-derived moiety. Compounds 1 and 2 arrested the cell cycle of tsFT210 cells at the G0/G1 phase with the minimum inhibitory concentration values of 10.1 and 20.2 μmolL^?1, respectively.     

一株海洋来源Streptomyces sp. SCSIO 1682中那西肽(nosiheptide)的分离鉴定及其生物合成基因簇分析

目的 对一株海洋来源的菌株SCSIO 1682进行16S rDNA分子生物学鉴定,对发酵产物中的抑菌活性化合物进行分离鉴定,并对抑菌活性化合物的生物合成基因簇进行分析。方法 通过构建基于16S rDNA序列的系统发育树来进行菌株鉴定;通过有机溶剂萃取、正相和反相硅胶层析等化学分离手段对菌株SCSIO 1682的次级代谢产物进行活性追踪分离纯化;运用HR-ESI-MS,₁H和₁₃C NMR等波谱手段对所得化合物进行结构解析;通过对菌株SCSIO 1682进行全基因组扫描测序鉴定所得化合物的生物合成基因簇。结果 该菌株被鉴定为Streptomyces sp. SCSIO 1682,所得抑菌活性化合物为那西肽,鉴定了那西肽的生物合成基因簇并进行生物信息学分析。结论 从海洋链霉菌Streptomyces sp. SCSIO 1682中分离鉴定了那西肽,那西肽生物合成基因簇的鉴定为利用组合生物合成和合成生物学技术对那西肽进行结构改造提供了新的基因资源。     

抗感染海洋天然产物marformycin生物合成基因簇中调控基因及转运基因的功能研究

目的 对海洋放线菌Streptomyces drozdowiczii SCSIO 10141抗感染次级代谢产物marformycins生物合成基因簇中的调控基因mfnM与转运基因mfnR进行生物信息学分析和功能鉴定。方法 利用生物信息学对mfnM与mfnR的功能进行预测,利用PCR-targeting技术对mfnM与mfnR进行体内阻断,构建双交换突变株△mfnM和△mfnR,对突变株进行发酵并利用HPLC对发酵液进行分析。结果 突变株△mfnM和△mfnR丧失了生产marformycins代谢产物的能力。结论 初步阐明了mfnM与mfnR的功能,mfnM编码一个正调控因子,对marformycins的生物合成起正调控作用;而mfnR编码的ABC转运蛋白,负责marformycins的胞外转运。     

产蓝色素放线菌的初步鉴定和蓝色素性质研究

对一株从土壤中筛选出来的产蓝色素的放线菌进行了初步鉴定, 命名为天蓝色链霉菌－１００（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ－１００ ）,并对蓝色素的性质进行了研究．结果表明此色素无臭无味,水溶性较强．酸性条件下,溶解度随ｐＨ 降低而减小．ｐＨ＜ ８ 时为红色,ｐＨ≥８ 时为蓝色,颜色随ｐＨ 增大而加深．于１００ ℃短时间处理,比较稳定．在ｐＨ 中性的条件下对光（包括紫外光）较稳定．大多数金属离子如Ｂａ２＋ 、Ｋ＋ 等对此色素无影响,Ｍｇ２＋ 使色素增色．Ｆｅ２＋ 在５×１０－４ ｍ ｏｌ／Ｌ时,使色素变性,但在５×１０－５ ｍ ｏｌ／Ｌ时,对色素没有多大影响．Ｐｂ２＋ 可以络合色素,使之沉淀;加入０．２５％ 盐酸乙醇后,色素再溶解．该蓝色素可作为天然色素或天然ｐＨ 指示剂开发．     

Isolation,structure elucidation and biological activity of angucycline antibiotics from an epiphytic yew streptomycete

In the course of study of epiphytic microorganisms occurring on the surface of roots of Taxus baccata L. a new strain Streptomyces sp. AC113 was isolated. According to 16S ribosomal DNA‐based identification the new strain is 99% identical with Streptomyces flavidofuscus. This strain cultivated in an arginine glycerol medium produced three major metabolites identified as (–)‐8‐O ‐methyltetrangomycin ( 1 ), 8‐O ‐methyltetrangulol ( 2 ) and 8‐O ‐methyl‐7‐deoxo‐7‐hydroxytetrangomycin ( 3 ). The chemical structures of these angucyclines were elucidated by 1D and 2D NMR as well as by mass spectrometry. Isolated angucycline metabolites showed significant antimicrobial activity against Bacillus cereus and Listeria mocytogenes. Cytotoxic activities of compounds 1 , 2 and 3 against four cell lines (B16, HT‐29 and non – tumor V79, L929) were evaluated. Compound 3 was the most potent anticancer agents with IC₅₀ 0.054 μg/ml against cell line B16. (© 2010 WILEY‐VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim)     

链霉菌多糖的免疫学活性研究

目的 研究链霉菌多糖(SMP)对正常小鼠和免疫抑制模型小鼠的免疫调节活性.方法 通过混合淋巴细胞培养方法检测SMP对正常小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响,用酸性α-醋酸萘酯酶染色法观察免疫抑制小鼠模型外周血中T淋巴细胞的变化,以及流式细胞仪检测免疫抑制模型小鼠脾细胞中T细胞亚群Lyt2 和L3T4 的比例变化.结果 SMP可以明显促进混合淋巴细胞的增殖,并对免疫抑制模型小鼠T淋巴细胞的抑制有保护作用,还可以调节模型小鼠CD4 /CD8 的比值至正常水平.结论 SMP具有调节免疫功能的作用.     

链霉菌RX-17溶菌酶的产生条件及溶菌特异性研究

通过液体及平板溶菌活性测定，证明了灰色链霉菌(Streptomyces griseus)RX-17发酵液中存在对变链球菌(Streptococcus mutans)lngbritt有强力溶解作用的物质-RX-17溶菌酶。产酶培养基碳、氮源最适配比为蔗糖3％、大豆蛋白胨1．25％、牛肉膏0．2％；最适产酶温度为33℃；高溶氧水平对酶的产生有利。溶菌特异性试验证实了RX-17溶菌酶对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、乳脂链球菌(S．cremaris)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、短乳杆菌(L．brevis)、产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)及铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等多种G^ 、G^-细菌均有良好的溶解作用。     

吸水链霉菌17997产生氢醌型格尔德霉素及其生物合成中间产物

目的 了解格尔德霉素生物合成PKS后修饰过程中的一些细节.方法 对格尔德霉素产生菌吸水链霉菌17997及其格尔德霉素生物合成聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)后修饰基因阻断变株(gdmP-和gdmN-)在ISPII平板不同时间的培养物进行乙酸乙酯提取,硅胶板TLC和NaOH显色分析,检测GDM及其生物合成中间产物,并利用LC-MS对中间产物进行鉴定.结果 吸水链霉菌17997原株、gdmN-和gdmP-变株在培养时间72～96h,发现氢醌型格尔德霉素(GQH2)、氢醌型4,5-双氢-7-去氨甲酰基-7-羟基格尔德霉素(H2GQH2-dC)和氢醌型4,5-双氢格尔德霉素(H2GQH2)分别为主要组分,相应的醌型化合物为次要组分;之后,这些氢醌型化合物随培养时间延长逐渐消失,相应的醌型化合物成为主要组分.双向硅胶板TLC分析证实GQH2、H2GQH2-dC和H2GQH2均可在空气中自发氧化为相应的醌型化合物.结论 在吸水链霉菌17997的GDM生物合成PKS后修饰过程中,首次提出GQH2自发氧化为GDM可能是氢醌型向醌型转变的位点,同时它也是GDM生物合成最后一步.     

循环筛选法在除虫链霉菌诱变育种中的应用

考察了诱变因素对除虫链力的产量变异效应,从选择了４种有效的诱变处理方式,并应用于该菌的诱变育种。通过引入循环筛选新方法,仅经４轮诱变筛选程序,得到了３株ａｖｅｒｍｅｅｔｉｎ高产菌,其中ＩＰ８４２突变株在２７℃经５ｄ摇瓶 ａｖｅｒｍｅｅｔｉｎＢ１ａ效价可达４２１ｍｇ／Ｌ,并具有较好的遗传稳定性。