Free radical scavengers from the heartwood of Juniperus chinensis

The antioxidant activity of Juniperus chinensis (Cupressaceae) was determined by measuring the radical scavenging effect on DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). The methanolic extract of J. chinensis heartwood showed the strong antioxidant activity. The antioxidant activity of n-BuOH soluble fraction was stronger than that of the others, and the fraction was subjected to purification by repeated silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. Quercetin, naringenin, taxifolin, aromadendrin and isoquercitrin were isolated from the n-BuOH fraction. Their structures were elucidated by physico-chemical and spectroscopic studies.     

槲皮素对小鼠免疫功能影响研究

目的：研究槲皮素对小鼠免疫作用的影响。方法：将小鼠分为低、中、高3个剂量组，分别为0．23、0．46、0．69g／kg槲皮素组和空白对照组、溶剂为对照组。小鼠连续灌胃30天后开始试验，分别进行免疫指标测定。结果：各剂量组与空白组比较，小鼠淋巴器官／体重比值差异均无显著性。中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应、明显增强小鼠碳廓清能力、明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、明显升高小鼠血清溶血素含量、明显增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能；各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。结论：按照增强免疫力功能作用评价程序规定，该受试物具有增强免疫力功能作用。     

槲皮素对视网膜母细胞瘤细胞抑制作用的研究

目的研究槲皮素（Quercetin,Que）在体外对人视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma,RB）Y79细胞株的生长抑制和凋亡的影响。方法体外培养Y79细胞：在体外对Y79细胞经不同浓度槲皮素处理48h、72h后进行检测,用MTT法测定半数抑制浓度（IC50）,观察槲皮素的细胞毒性作用,用Hoechst33342/Pl双荧光染色观察细胞核形态变化。结果槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Y79细胞的生长,并存在剂量-效应关系;应用MTT法计算不同浓度槲皮素作用48h、72h的半数抑制浓度（IC50）是148μmol/L、115μmol/L。Hoechst33342/Pl双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等,细胞凋亡的形态学改变。结论槲皮素可使视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖抑制和凋亡诱导。     

槲皮素抗小鼠P388白血病的作用

目的：研究槲皮素抗小鼠P388白血病的作用。方法：采用DBA／2小鼠腹腔注射P388细胞的方法建立白血病小鼠模型，80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、高剂量槲皮素组、低剂量槲皮素组，每组20只。于第7天末次给药后每组小鼠随机抽取10只处死，收集腹水分别计数，观察腹水细胞荧光形态变化，分析细胞周期及细胞凋亡率，观察骨髓涂片及心、肝、脾、肾的组织病理学改变。观察记录其它小鼠一般情况及生存期。结果：给予槲皮素的两组小鼠平均生存期较两对照组显著延长（P〈0．05），且高剂量组小鼠平均生存期较低剂量组显著延长（P〈0．05）。在第7天处死小鼠后，高剂量组小鼠无肉眼可见腹水。低剂量组小鼠腹水细胞的密度显著减小，G0-G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加，细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。各组小鼠骨髓涂片及心、肝、脾、肾组织病理切片未见明显异常。结论：槲皮素对P388白血病小鼠有延长生存期及抑制腹水细胞增殖和诱导腹水细胞凋亡的作用。     

槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis 肺癌生长的抑制作用

 目的 探讨槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用及其机制。方法 复制C57BL小鼠Lewis肺癌模型，将40只接种Lewis肺癌的C57BL小鼠随机分成4组：对照组（A组）、槲皮素组（B组）、川芎嗪组（C组）、槲皮素＋川芎嗪组（D组），每组10只。连续用药20日，观察移植瘤生长情况，于接种后第22天处死各组小鼠，采用免疫组化半定量检测肿瘤组织微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）及增殖核抗原（PCNA）的表达水平，用原位凋亡TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果 （1）B、C、D组肿瘤的生长明显受到抑制，瘤重明显低于A组，其抑瘤率分剐为39．87％、35．45％、54．58％，D组抑瘤率明显高于B、C组，差异有显著性（P〈0．05）。（2）B、C、D组MVD、VEGF及PCNA表达水平明显低于A组（P〈0．05或0．01），尤其是D组表达最低。B、C、D组AI较A组增高（P〈0．05或0．01），D组最高。结论 槲皮素与川芎嗪联合用药可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长，其作用机制与抑制微血管生成、抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关。     

西河柳中槲皮素与异鼠李素在植物体内分布及随季节变化

目的:建立西河柳中槲皮素与异鼠李素的HPLC测定方法;研究槲皮素与异鼠李素在西河柳不同部位的分布及随季节变化的规律。方法:以NUCLEODUR100-5C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)为流动相,流速为0.8ml·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为360 nm。结果:槲皮素与异鼠李素线性范围分别为:0.17～1.01μg(r=0.999 7)和0.19～0.95μg(r=0.999 6),回收率分别为:102.3%,100.7%RSD4.0,3.1%;西河柳中槲皮素与异鼠李素含量随季节的变化而变化,且不同部位有不同的含量。结论:该方法可用于控制西河柳药材质量;西河柳中槲皮素与异鼠李素含量按春、夏、秋次序依次降低,在嫩技叶中含量最高。     

GSTM1 and GSTT1 polymorphism influences protection against induced oxidative DNA damage by quercetin and ascorbic acid in human lymphocytes in vitro

Antioxidants are of major importance in the protection against cellular oxidative damage caused by endogenous as well as exogenous free radicals. This study aims to establish the impact of genetic polymorphisms in GSTM1 and GSTT1, which encode for enzymatic antioxidative defence, on H₂O₂-induced oxidative DNA damage and on the effectiveness of quercetin and ascorbic acid in preventing this induced damage in human lymphocytes. Lymphocytes from 12 healthy volunteers were pre-incubated either with 10 μM of quercetin or with 10 μM of ascorbic acid, and exposed to 25 μM H₂O₂ for 1 h. The induction of oxidative DNA damage was quantified using the Comet assay. Genotyping of these 12 subjects showed that six individuals were GSTM1+ and six were GSTM1−; eight were GSTT1+ and four GSTT1−.

Results

Baseline levels of oxidative DNA damage did not differ between GSTM1 or GSTT1 variants and their respective wild types. Also with respect to ex vivo induced levels of oxidative DNA damage, no significant difference was seen between variants and wild types of both genotypes. The protection against H₂O₂-induced oxidative DNA damage by quercetin was significantly higher in GSTT1 wild types than in GSTT1 variants (57% and 9% decrease, respectively; p = 0.01); furthermore, GSTT1 wild types were protected against induced oxidative DNA damage by ascorbic acid pre-incubation while GSTT1 variants showed an increase of damage (16% decrease vs. 91% increase; p = 0.01). For GSTM1 variants and wild types, observed differences in protective effects of quercetin or ascorbic acid were not statistically significant. Overall, quercetin proves to be better in protecting human lymphocytes in vitro against oxidative DNA damage upon H₂O₂ challenge than ascorbic acid.     

槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:目的:探讨黄酮类化合物槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用,并对其机制做初步探讨。方法:应用MTT法检测不同浓度槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布;比色法测定凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:槲皮素能明显抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,存在剂量依赖(r=0.709;P<0.01)与时间依赖(r=0.703;P<0.01);HEN1细胞经不同浓度槲皮素(15、30、60、90、120μmol/L)作用48 h后细胞凋亡率分别为4.81%、9.02%、14.33%、19.65%、28.88%,明显高于对照组(1.70%)(P<0.01);随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加,将细胞特异性地阻滞在G2/M期,出现凋亡峰;槲皮素组的HEN1细胞凋亡相关因子caspase-3表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:槲皮素能通过caspase-3途径抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性。     

糖尿病新型分子靶点葡萄糖-6-磷酸酶活性的检测及应用

目的:研究利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性,并推荐其作为一种常用的实验室检测方法。方法:以胶原酶原位灌注消化的方法分离大鼠肝细胞,用含10?S的1640培养液进行原代培养。待细胞贴壁后分别换用新鲜的含葡萄糖和不同浓度栎精的培养液培养16 h,随后利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定酶的活性。结果:各组G-6-Pase的活性不全相同,其差别具有统计学意义(F=114.423,P<0.05);高糖组与对照组相比较,G-6-Pase的活性明显增加(P<0.05);不同浓度栎精组G-6-Pase的活性下降,均低于高糖组(P<0.05),但其组间差异无统计学意义(P>0.05),没有呈现出剂量依赖性变化。结论:利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖-6-磷酸酶活性,是目前值得推崇的一个检测速度较快、结果较稳定的方法。此外,栎精能够有效逆转高糖诱导的G-6-Pase活性增加,利用它对于G-6-Pase活性的干预作用可能改善糖尿患者的高血糖状态。     

槲皮素对2型糖尿病患者外周血单个核细胞DNA损伤体外修复的观察

目的观察2型糖尿病(DM)患者氧化/抗氧化状态、外周血单个核细胞(PBMCs)DNA损伤情况及槲皮素的体外修复作用。方法采用单细胞凝胶电泳技术检测39例2型DM合并血管并发症、29例2型DM无并发症患者PBMCsDNA损伤情况(用彗星率表示),与26例健康对照比较。检测受试者血浆总抗氧化能力(TAC)、丙二醛(MDA)及巯基(SH)含量。观察槲皮素对2型DM患者PBMCsDNA损伤的体外修复作用。结果2型DM无并发症组PBMCs彗星率及血浆MDA含量明显高于健康对照组(P均<0.01),血浆SH含量、TAC明显低于健康对照组(P均<0.01);2型DM血管并发症组彗星率及MDA含量高于无并发症组(分别为P<0.01和P<0.05),TAC低于无并发症组(P<0.05)。2型DM无并发症组及血管并发症组患者彗星率与MDA含量呈正相关(r分别为0.446和0.504,P<0.05和P<0.01),与TAC呈负相关(r分别为-0.418和-0.399;P均<0.05)。体外修复显示:10μmol/L槲皮素作用4h显著降低了2型DM患者PBMCs彗星率(P均<0.01)。结论2型DM患者体内存在氧化/抗氧化失衡、DNA氧化损伤,血管并发症组重于无并发症组。氧化应激可能参与了2型DM患者血管并发症的发生发展。