Effect of Wuzi Yanzong Pills on Sertoli cells and blood–testis barrier in heat-stressed rats based on Akt signalling pathway

The blood–testis barrier (BTB) of Sertoli cells (SCs) is an important biological barrier that maintains spermatogenesis and provides a favourable microenvironment for spermatogenesis. However, heat stress can directly damage the BTB structural proteins of testicular SCs, leading to dyszoospermia. Wuzi Yanzong Pills (WYP) is a traditional Chinese medicine formula used to treat male reproductive diseases. However, whether WYP could ameliorate heat stress injury in primary SCs extracted from rat testes and BTB proteins remains unknown. Here, treatment with WYP (low, medium and high dose) increased the SC viability and the proliferation of cell antigen Ki67 significantly. Additionally, it promoted SC maturation, which presented in the form of increased androgen receptors (ARs) and decreased cytokeratin 18 (CK-18) in three WYP dose groups. WYP upregulated BTB proteins such as zonula occludens 1 (ZO-1) and occludin across all WYP groups and decreased phosphorylated Akt (p-Akt) in the middle and high-dose groups; however, ZO-1 and occludin recovery were reduced with the presence of Akt inhibitor in WYP groups. WYP improved SC viability and proliferation, and ameliorated dedifferentiation and BTB-proteins damaged by heat stress via Akt signalling. The findings present theoretical support for the effects of WYP in the management of dyszoospermia and male infertility.     

知柏地黄丸辅助治疗女童中枢性性早熟的系统评价

目的 系统评价知柏地黄丸辅助治疗女童中枢性性早熟（CPP）的临床疗效及安全性。方法 使用计算机对中国学术期刊全文数据库（CNKI）、维普中文科技期刊数据库（VIP）、万方数据库（Wanfang Date）、中国生物医学文献数据库（CBM）、Cochrane Library、PubMed和Web of Science等数据库进行文献检索,收集自建库起至2023年10月25日知柏地黄丸联合促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）治疗女童CPP的临床随机对照试验（RCT）,使用RevMan 5.4软件进行Meta分析。结果 共纳入14项RCTs、包括1 101例患儿。Meta分析结果显示：试验组临床有效率高于对照组［RR＝1.19,95% CI（1.13,1.25）,P＜0.000 01］;试验组治疗后子宫容积［MD＝-0.75,95% CI（-0.93,-0.58）］、卵巢容积［MD＝-0.26,95% CI（-0.34,-0.17）］、卵泡直径［MD＝-0.68,95% CI（-0.85,-0.50）］等第二性征回缩优于对照组（均P＜0.000 01）;试验组治疗后血清促黄体生成素（LH）水平［MD＝-0.75,95% CI（-0.95,-0.54）］、血清卵泡刺激素（FSH）水平［MD＝-1.23,95% CI（-1.53,-0.94）］、血清雌二醇（E2）水平［SMD＝-1.07,95% CI（-1.54,-0.59）］均明显低于对照组（均P＜0.000 01）;治疗后骨龄指数（BAI）［MD＝-0.12,95% CI（-0.16,-0.08）,P＜0.000 01］的改善优于对照组;试验组的不良反应率低于对照组［RR＝0.64,95% CI（0.40,1.03）,P＝0.07］。结论 知柏地黄丸联合GnRHa治疗女童CPP临床疗效明显优于单用GnRHa组,且能够更有效的使患儿第二性征回缩,降低性激素水平,抑制下丘脑-垂体-性腺轴的发育,有效延缓生长发育,且安全性良好,不会增加不良反应发生。     

治咳川贝枇杷滴丸祛痰镇咳药效学评价及对肺组织Muc5AC表达的影响

目的 研究治咳川贝枇杷滴丸（CBPP）的祛痰、镇咳作用,以及对肺组织Muc5AC表达的影响,明确其药效特点,为中药临床定位提供实验依据。方法 采用雄性SPF级ICR小鼠,分别为对照（生理盐水）组、盐酸氨溴索口服液（阳性药,临床等效剂量11.7 mg/kg）组和CBPP低、中、高剂量（70.2、140.4、280.8 mg/kg）组,采用气管酚红排泌实验结合分光光度计法探究CBPP的祛痰药效;利用氨水引咳实验观察CBPP高剂量组的镇咳作用;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测CBPP高剂量组对肺组织中Muc5AC mRNA表达的影响。家兔随机分为对照组、盐酸氨溴索口服液（10.5 mg/mL）组、CBPP（252 mg/mL）组,利用离体气管纤毛运动实验考察CBPP对气管纤毛运动的影响。结果 酚红排泌实验显示,与对照组比较,阳性药和CBPP显著促进正常小鼠气管酚红排泌量增加（P<0.05、0.01）,且CBPP作用呈剂量相关性;家兔离体气管纤毛运动实验显示,与对照组比较,阳性药和CBPP显著促进纤毛运动（P<0.05）,进而促进痰液排出;氨水引咳实验显示,与对照组比较,CBPP显著延长小鼠的咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数（P<0.05）;qRT-PCR结果显示,与对照组比较,CBPP显著降低肺组织中Muc5AC的mRNA表达（P<0.05）。结论 CBPP具有明显的祛痰作用,促进呼吸道腺体的分泌,并促进气管纤毛运动,降低Muc5AC的含量,促进痰液排出,并且对氨水刺激引起的咳嗽有一定的镇咳作用。     

脉络舒通丸联合利伐沙班治疗下肢深静脉血栓形成后综合征的临床效果

目的 探讨脉络舒通丸联合利伐沙班治疗下肢深静脉血栓形成后综合征(PTS)的临床效果。方法 回顾性分析2019年6月至2020年9月潍坊市人民医院血管外科收治的60例下肢深静脉血栓形成后综合征患者的临床资料。根据治疗方法不同将患者分为对照组和观察组,各30例。对照组患者给予利伐沙班片、弹力袜等基础治疗措施,观察组患者在对照组治疗方法的基础上,给予口服脉络舒通丸。记录患者Villalta评分和血液中纤维蛋白原含量(FIB)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等指标及不良反应发生情况。采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、χ²检验或Fisher精确检验进行组间比较。结果 治疗后观察组Villalta评分(包括患肢肿胀、疼痛、色素沉着等)明显优于对照组[(6.17±2.20)和(7.43±1.50)分];炎症指标(IL-6、hs-CRP)与FIB水平明显低于对照组[(32.35±4.68)和(48.75±5.21)pg/ml,(13.51±3.89)和(18.87±4.28)mg/L,(2.43±0.41)和(2.79±0.47)g/L],差异均有统计学意义(P＜0.05)。2组患者APTT及不良反应发生情况比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 脉络舒通丸联用利伐沙班可显著提升PTS的治疗效果,改善患者凝血功能和炎症反应情况,且安全性较好。     

五子衍宗丸通过下调IL-17通路减少细胞凋亡治疗少弱精子症

目的 探究五子衍宗丸（WZYZP）治疗少弱精子症（OAS）的药效与作用机制。方法 应用环磷酰胺（CTX）诱导的SD大鼠作为OAS的体内模型,通过ig 0.5、1.5 g·kg^-1 WZYZP探究其治疗OAS大鼠的体内药效与作用机制。通过全自动精子分析系统检测大鼠精子参数;应用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中睾酮的量,通过HE染色法观察给药后OAS大鼠睾丸组织形态学改变。采用网络药理学预测WZYZP治疗OAS的具体靶点。应用酶联免疫吸附法测定大鼠睾丸组织炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;通过TUNEL染色测定大鼠睾丸组织中细胞凋亡情况;免疫组织化学染色检测睾丸组织白细胞介素17（IL-17）表达情况;Western blotting检测Caspase-3、热休克蛋白90AA1（HSP90AA1）、磷酸化核因子κB（p-NF-κB）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、p-p38和p38的表达水平。使用HPLC检测WZYZP中的主要活性成分并与网络药理学所得靶点进行分子对接模拟以探索其具体机制。结果 体内实验结果表明,WZYZP可显著改善 CTX诱导的 OAS大鼠精子参数、血清睾酮水平（P＜0.001）和睾丸组织形态学。网络药理学结果表明WZYZP与OAS的关键通路为IL-17,关键靶点为 Caspase3、p38、NF-κB、HSP90和 ERK1/2。TUNEL染色结果表明,1.5 g·kg^-1 WZYZP可显著降低 OAS大鼠睾丸组织细胞凋亡 （P＜0.05）。 Western Blotting结果显示 ,与模型组相比 , 1.5 g·kg^-1WZYZP组 Caspase-3 （P < 0.001）和HSP90AA1（P < 0.01）的表达水平明显降低,NF-κB（P < 0.05）、ERK1/2（P < 0.05）和 p38（P < 0.05）磷酸化水平明显降低。分子对接模拟结果发现,8种主要活性成分（槲皮素、五味子醇甲、金丝桃苷、山柰酚、紫云英苷、五味子甲素、异槲皮素和绿原酸）和IL-17通路5种相关靶点（HSP90AA1、ERK、p38、NF-κB和Caspase3）的结合能均小于-20.92 kJ·mol^-1,具有较好的结合亲和力。结论 WZYZP可通过下调IL-17通路减少细胞凋亡发挥治疗OAS作用。     

丹参有效成分及其制剂抗抑郁药理作用研究进展

抑郁症作为一种常见的心理疾病,给患者的身心健康带来了巨大的负担,为社会卫生服务体系带来巨大挑战。临床上常用的抗抑郁化学药物主要是5-羟色胺再摄取抑制剂,疗效确切,但存在靶点单一、不良反应大、服药周期长、患者依从性差等缺点。中医药具有多靶点、多层次、多途径等特点,且不良反应小,在改善抑郁症患者症状、降低复发率等方面具有独到的优势。作为一种药用历史悠久的中药材,丹参在心脑血管疾病的防治中应用广泛,其针对抑郁症状的治疗近年来也被频繁使用,在抗抑郁领域展现出潜在治疗效果。对丹参有效成分水溶性成分（丹酚酸B、迷迭香酸、咖啡酸、丹参素钠）、脂溶性成分（丹参酮、丹参酮Ⅱ_A、隐丹参酮）及丹参类制剂（注射用丹参多酚酸、复方丹参滴丸等）在抗抑郁药理作用及机制的研究进展进行系统总结,旨在为丹参进一步开发和临床应用提供科学依据,为抑郁症治疗提供新思路。     

基于HIF-1信号通路探究人参固本丸延缓皮肤衰老作用机制

目的 基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术、网络药理学、分子对接、分子动力学模拟和实验验证,探究人参固本丸的物质基础及延缓皮肤衰老的作用机制。方法 根据正、负离子模式下质谱信息、质荷比、二级碎片离子等信息结合相关文献,推测鉴定化学成分。采用网络药理学方法,通过Swiss Target Prediction数据库获取人参固本丸的作用靶点,Genecards数据库筛选皮肤衰老靶点,取交集靶点,利用蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析核心靶点的关键通路。根据网络药理学结果,选择P值排名第1的HIF-1信号通路及其对应的人参固本丸中化合物进行分子对接及分子动力学模拟。应用H₂O₂诱导的HaCaT细胞皮肤衰老模型,CCK-8法评价人参固本丸（25、50、100、200、400、600 μg·mL^-1）及其含药血清（1%、5%、10%、20%、40%）对HaCaT细胞存活率的影响;给予人参固本丸（50、100、200 μg·mL^-1）后,DCFH-DA避光染色检测活性氧（ROS）含量,检测细胞划痕愈合率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测衰老相关基因、炎性衰老相关分泌表型基因、HIF-1信号通路中核心靶点的mRNA水平。结果 从人参固本丸中鉴定出95个化合物;网络药理学分析出12个核心靶点,筛选出HIF-1信号通路及对应的核心靶点蛋白激酶B（AKT1）、丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK3）、信号传导及转录激活蛋白3（STAT3）、表皮生长因子受体（EGFR）、B淋巴细胞瘤-2（BCL2）、白细胞介素（IL）-6、低氧诱导因子1A（HIF1A）。分子对接和分子动力学模拟验证活性成分5, 7-二羟基-6, 8, 4''-三甲氧基黄酮、（＋）-松脂醇、亚油酸、伪原薯蓣皂苷、N-对香豆酰酪胺和HIF-1信号通路核心靶点亲和力良好,构象稳定。体外实验表明,与模型组比较,人参固本丸可促进HaCaT细胞增殖、提高愈合率、降低ROS水平（P＜0.05、0.01）,人参固本丸组MAPK3、STAT3、IL-6、HIF1A、AKT1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、p53、p21、p16 mRNA水平表达显著降低（P＜0.05、0.01）,表皮生长因子受体（EGFR）、B淋巴细胞瘤-2（BCL2）mRNA水平表达升高（P＜0.05、0.01）。结论 人参固本丸中的化学成分可能通过调控AKT1、MAPK3、STAT3、EGFR、BCL2、IL-6、HIF1A靶点,降低ROS、炎症水平,延缓皮肤衰老。     

基于UPLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS技术和网络药理学探讨黄连上清丸解热抗炎的活性成分及其作用机制

目的 基于超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱（UPLC-Q Exactive Orbitrap-HRMS）技术、网络药理学和分子对接探究黄连上清丸解热抗炎的活性成分及其作用机制。方法 根据质谱信息、对照品裂解规律及参考文献资料对黄连上清丸中的化学成分进行指认;利用SwissADME数据库筛选黄连上清丸中的成药性成分,PharmMapper数据库获取成药性成分相关作用靶点;利用Gene cards和Disgenet数据库筛选解热、炎症相关靶点;对得到的成分作用靶点与疾病相关靶点取交集,获得黄连上清丸发挥解热抗炎作用的潜在靶点,采用Cytoscape 3.10.1软件构建“成分-靶点-疾病-复方”网络,分析活性成分;将共有靶点导入STRING网站,构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,分析关键靶点;通过微生信网站对关键靶点进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析;将活性成分与关键靶点进行分子对接验证;通过建立HPLC指纹图谱,控制黄连上清丸的质量。结果 从黄连上清丸中共鉴定144个化合物,其中黄酮类58个、生物碱类17个、环烯醚萜类7个、木脂素类4个、色原酮类8个、蒽醌类7个、香豆素类2个、皂苷类5个、有机酸类5个、酚酸类7个、苯丙素类9个、苯乙醇苷类4个、糖类2个、内酯类1个,以及其他类8个。黄连上清丸发挥解热抗炎作用的潜在作用靶点有218个,涉及2 036个生物过程、119个细胞组分、281个分子功能和155条信号通路。筛选得到莲心季铵碱、甘草宁G、大黄素、氧化小檗碱、甘草素、大黄素甲醚、花椒毒酚、粘毛黄芩素Ⅲ等12个潜在活性成分,胰岛素（INS）、RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT1）、表皮生长因子受体（EGFR）、热休克蛋白HSP 90-α（HSP90AA1）、基质金属蛋白酶-9（MMP9）等10个关键靶蛋白,以及Ras信号通路、叉头框蛋白O信号通路、Rap1信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等信号通路。12个潜在活性成分与关键靶点有较强的结合活性。建立的指纹图谱可指认黄连上清丸中的8个活性成分。结论 黄连上清丸可能是通过莲心季铵碱、甘草宁G、大黄素、氧化小檗碱、甘草素、大黄素甲醚等活性成分,作用于INS、AKT1、EGFR、HSP90AA1、MMP9等关键靶点,通过Ras信号通路、叉头框蛋白O信号通路、Rap1信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等信号通路,发挥解热抗炎作用。     

芪参益气滴丸对心衰大鼠RAAS系统的实验研究

目的阐明芪参益气滴丸对心梗后心衰大鼠血流动力学的改善作用及对肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的影响。方法利用左冠状动脉结扎术复制心梗后心衰大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、芪参益气滴丸组以及卡托普利组。生物信号处理分析系统评价各组大鼠血流动力学参数,放免检测肾素（Ren）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）含量,Westernblot检测AngⅡ的1型受体（AT1）、AngⅡ的2型受体（AT2）和血管紧张酶（ACE）的浓度变化。结果结果显示,该模型大鼠在术后28d出现显著的心梗后心衰病理改变。在动脉血流动力学方面,与假手术组相比,模型组大鼠的收缩压（SBP）与舒张压（DBP）下降显著;此外,模型组大鼠的左室收缩压（LVSP）、左室收缩压最大上升速率(+dp/dt_max)和舒张压最大上升速率(-dp/dt_max)明显低于假手术组。肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）被激活,其中伴随ACE、AT1表达的上升和AT2含量的下调。而芪参益气滴丸组和卡托普利组均能很好的改善动脉SBP和DBP（P<0.05）,且2组之间无统计学差异。此外,均能上调心衰大鼠心室左室舒张压末期压（LVEDP）和-dp/dr_max。但在抑制RAAS激活方面,芪参益气滴丸可以下调血浆肾素-血管紧张素Ⅱ,但对醛固酮无明显作用。芪参益气滴丸能够部分抑制AT1和ACE的表达,而对AT2具有明显的上调作用。作为血管紧张素酶抑制剂,卡托普利药效主要作用在ACE和AT1上,对AT2未见显著改善作用。结论芪参益气滴丸能够改善心衰大鼠血流动力学。该机制可能通过降低肾素、AngⅡ的表达,下调ACE和AT1受体,增加保护性受体AT2的含量,进而抑制RAAS系统的激活有关。     

淫羊藿通络丸薄层色谱鉴别方法的研究

目的：建立淫羊藿通络丸的薄层色谱鉴别方法。方法采用薄层色谱法。结果可鉴别出制剂中的炙淫羊藿、桂枝和炒白术等6味药材。结论薄层色谱法专属性强、简便可行,可用于淫羊藿通络丸的质量控制。