缓冲液种类对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响

目的 寻找可同时分离酸性和碱性蛋白的合适缓冲液。方法 以马心肌红蛋白、β—乳球蛋白A、碳酸酐酶Ⅱ和核糖核酸酶A为标准混合样品，详细研究了四种缓冲液，磷酸盐、硼酸盐、Tricine和Tris对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响。结果 磷酸盐缓冲液与毛细管壁和蛋白均可发生作用，能改变碱性蛋白质的迁移规律；而硼砂缓冲液主要是通过与毛细管壁作用抑制蛋白的吸附，不改变蛋白质的迁移规律；Tris和Tricine不能有效地抑制蛋白质的吸附。结论 磷酸盐是同时分离酸性和碱性蛋白质的较好缓冲液。     

A radial distribution function analysis of an amorphous calcium phosphate with calcium to phosphorus molar ratio of 1.42

A radial distribution function (RDF) analysis was performed on amorphous, freeze-dried calcium phosphate prepared under conditions of pH=7.3–8.0 with Ca/P molar ratio of 1.42. Diffracted intensities were obtained by using reflection geometry, copper radiation, and a receiving graphite monochromator. For purposes of analysis, the material was treated as a random binary alloy consisting of calcium and phosphate ions. Major peak positions were found to occur atr=2.55, 3.75 and 6.40 Å and were substantiated by the application of an artificial temperature factor. The first major peak was attributed to a superposition of peaks corresponding to the Ca–O and O–O distances. There is also evidence of a peak at 2.9 Å which suggests the existence of a phosphorus-oxygen network, i.e. condensed phosphates. Densities obtained by this analysis and direct measurement agreed and were substantially less than the accepted value for Ca₃(PO₄)₂. The area under the peak in the RDF corresponding to the unresolved Ca–O and O–O distances yields a coordination number of about 3.

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Zusammenfassung Eine Funktionsanalyse der radialen Verteilung (FRV) wurde an amorphem, gefriergetrocknetem Calciumphosphat ausgeführt, welches bei pH 7,3–8,0, mit einem molaren Ca/P-Verhältnis von 1,42, hergestellt worden war. Die Beugungsintensitäten wurden mittels Reflexionsgeometrie, Kupferbestrahlung und einem empfangenden Graphitmonochromator erhalten. Zum Zweck der Untersuchung wurde das Material als eine, aus Calcium- und Phosphationen bestehende, randomisierte binäre Mischung behandelt. Die wichtigsten Spitzen wurden beir=2,55; 3,75 und 6,40 Å festgestellt und wurden durch die Verwendung eines künstlichen Temperaturfaktors bestätigt. Die erste wichtige Spitze wurde einem Zusammenfallen von Spitzen zugeschrieben, welche den Ca–O- und O–O-Abständen entsprachen. Bei 2,9 Å wurde ebenfalls eine Spitze festgestellt, welche auf eine Phosphor-Sauerstoff-Verbindung, also auf kondensierte Phosphate, hinweist. Die mit dieser Analyse erhaltenen Dichten entsprachen den direkten Messungen und waren beträchtlich niedriger als dies für Ca₃(PO₄)₂ angenommen wurde. Die Zone unterhalb der Spitze in der FRV, die den unaufgelösten Ca–O-und O–O-Abständen entspricht, ergibt die Koordinationszahl von etwa 3.

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Résumé Une analyse de fonction de distribution radiaire (RDF) a été réalisée à partir de phosphate de calcium amorphe, après congélation-dessication, préparé à un pH=7.3–8.0 avec un rapport molaire Ca/P de 1.42. Des intensités diffractées sont obtenues en utilisant la géométrie de réflection, les radiations du cuivre et un monochromateur enregistreur de graphite. Pour les besoins de l'analyse, le matériel est traité comme un alliage binaire moyen comportant des ions calcium et phosphate. Les positions de pics majeurs s'observent àr=2.55, 3.75 et 6.40 Å et ressortent par application d'un facteur artificiel de température. Le premier pic important est attribué à une superposition de pics correspondant aux distances Ca–O et O–O. Il existe aussi un pic à 2.9 Å, qui semble indiquer l'existence d'un réseau phosphore-oxygène, à savoir des phosphates condensés. Les densités obtenues par cette analyse concordent avec la mesure directe et sont nettement moindres que la valeur reconnue, pour Ca₃(PO₄)₂. La région située sous le pic dans le RDF, correspondant aux distances non connues Ca–O et O–O, donnent un nombre de coordination d'environ 3.

     

Influence of preparation conditions on the composition of type B carbonated hydroxyapatite and on the localization of the carbonate ions

Summary It is shown how certain aspects of the composition and structure of carbonated apatites depend strictly on preparation conditions, for example, excess of phosphate or calcium ions in the reaction medium, CO₃ ²⁻ concentration, pH, ammonia added or not. Depending on those conditions, either one or the other of the two proposed mechanisms of introduction of carbonate ions into the B sites is dominant. The mechanisms are (1) replacement of a phosphate ion by a carbonate ion with the formation of three vacancies, one in a phosphate oxygen site and one each in the neigh-boring Ca²⁺ and OH⁻ sites; and (2) replacement of a phosphate ion by a carbonate accompanied by a hydroxyl ion. Whether mechanism (1) is observed to dominate over mechanism (2), or vice versa, is accounted for by the relative concentrations of the various ions in the reaction medium. The number of vacancies is decreased by the presence of either, or both, excess calcium ions or ammonia in the reaction medium. A structural-chemical mechanism is advanced for the view that, with the smallest CO₃ ²⁻ content, the A sites are favored but with increasing carbonate content the B sites become favored and the A-site content becomes less than it is when the total carbonate content is less.     

Stoffwechsel des Kaninchenherzensin situ während Asphyxie und in der post-asphyktischen Erholung

Zusammenfassung Im linksventrikulären Myokard des Kaninchens wurden die Gewebsgehalte von Substraten und Metaboliten des Glykolysecyclus und des Adenylsäure-Phosphokreatin-Systems bei aeroben Kontrollbedingungen, nach einmaliger Asphyxie von 2–5 min Dauer, nach einer Serie von 4 Asphyxien von einmal 3 min und dreimal 2/12 min Dauer mit zwischenzeitlichen Erholungspausen von 10 min Dauer und in der post-asphyktischen Erholung untersucht.Die myokardiale anaerobe Glykolyse deckt trotz einer sehr hohen Glykolyserate nicht den hohen Energiebedarf des kreislaufbelasteten Herzens in der Asphyxie; entsprechend erfolgt die Abnahme der energiereichen Phosphate, die Ausdruck des myokardialen Energiedefizits in der Anaerobiose ist, besonders rasch im Vergleich zu anderen anaeroben Situationen. Im Herzen asphyktischer Kaninchen wird der glykolytische Fluß durch die Phosphofructokinase-Reaktion nicht begrenzt.In der post-asphyktischen Erholung erfolgt die Einstellung normaler Gewebsgehalte an ATP und der Summe der Adeninnucleotide in Abhängigkeit von dem Ausmaß der Änderungen im Status des Adenylsäure-Systems während der Anaerobiose. Mit Wiederherstellung der Sauerstoffversorgung steigt der ATP-Gehalt rasch an. Diese erste, rasche Phase dauert wenige Minuten; ihr liegt die Rephosphorylierung von ATP-Abbauprodukten zugrunde, die zu Ende der anaerobiose noch am Wirkort in der Zelle vorhanden sind. Rephosphorylierbare Substrate sind ADP, AMP und Adenosin. Eine zweite, langsame Phase der ATP-Erholung wird manifest, wenn normale Gewebsgehalte und Relationen im Adenylsäure-System in der raschen Erholungsphase nicht erreicht werden, weil die Summe aus Adeninnucleotiden und Adenosin in der Anaerobiose vermindert worden ist. Ihr liegt eine Neubildung von Adeninnucleotiden zugrunde. Die Rate der post-asphyktischen Erhöhung des myokardialen ATP-Gehaltes in der zweiten Phase ist niedrig und beträgt nur knapp 0,06 Mol pro Gramm Feuchtgewebe und pro Stunde. Ein unter 10% der Norm gesenkter Glykogengehalt wird in knapp 5 Std normalisiert. Die Gewebsgehalte der Glykolyse-Intermediate, des Lactats und der übrigen Substanzen des Adenylsäure-Phosphokreatin-Systems werden unabhängig von dem Ausmaß der Änderungen während Asphyxie innerhalb weniger Minuten auf normale Werte eingestellt.Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft.     

Electromagnetic modulation of biological processes: Influence of culture media and significance of methodology in the Ca-uptake by embryonal chick tibiain vitro

Summary The present studies are aimed at establishing molecular correlations in the interaction of very low frequency electromagnetic fields with biological systems. Ca-uptake by chick embryo tibia rudiment in short-term culture was a useful model. Tibiae of 8- to 10-day-old chick embryos were incubated 60 min in simplified culture media in the presence of⁴⁵Ca at 37.5±0.5°C either inside or outside pulsating electromagnetic fields. Radioactivity count in the medium was the most accurate method for determining Ca-uptake by the rudiment. The effect of the fields on the Ca-uptake depended markedly on the chemical composition of the culture medium: bicarbonate was indispensable; glucose or sucrose was important; phosphate was potentiating; ethanol, Mg²⁺, and NaF were stimulating. The field had no effect in (a) blank medium without tibia, (b) tibiae that had been altered by fixation with aqueous glutaraldehyde, (c) nonliving artificial systems endowed with great or small ion sorption capacity. The unique bicarbonate effect with living systems and the passive behavior of nonliving ion sorbing systems prompt the suggestion that the electromagnetic field probably couples with specific processes, such as a bicarbonate-dependent Ca²⁺ ATPase and the active ion transport, at the cell membrane level. The molecular mechanisms remain to be established.     

Uptake of 5′-deoxy-5′-s-isobutyl thioadenosine into chick embryo fibroblasts

The uptake of 5′-deoxy-5′-S-isobutyl thioadenosine (iBuS)^5′ Ado into chick embryo fibroblasts is due to a mixed transport system: (1) a high affinity system with apparent K_m values of 0.022 mM and 0.055 mM for normal and Rous Sarcoma Virus transformed cells respectively; (2) a low affinity system with apparent K_m values of 0.800mM and 0.720mM for the normal and transformed cells. The drug enters the cells rapidly, and is found in the acid-soluble fraction. Only analogues of (iBuS)^5′Ado modified in the 5′-S-side chain are found to be inhibitors of the high affinity system. This indicates that an intact adenosine is required. 2′-Deoxyglucose and factors affecting the cell membrane reduce the (iBuS)^5′Ado uptake.