广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析

目的克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景。方法利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性。结果该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基。成功构建了重组质粒且目的基因在E.coliBL21中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白。融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景。     

广州市番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染情况调查

目的了解广州市番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染情况。方法用人工胃液消化法对采集到的褐云玛瑙螺和福寿螺进行处理,镜下观察和计数广州管圆线虫第3期幼虫,比较不同地区、不同螺种的感染率和感染度;将螺体内检获的幼虫感染健康SD大鼠并解剖,以验证之前的检查结果。结果共检测褐云玛瑙螺367只,福寿螺357只,其中褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率为22.62%,阳性螺感染度为57.00条/螺;福寿螺感染率为3.08%,阳性螺感染度为1.64条/螺。大岗、石碁、化龙、榄核4镇和南沙区褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率分别为13.33%、15.00%、20.93%、73.68%和8.41%,福寿螺感染率分别为5.88%、2.88%、1.89%、0%和3.96%。结论番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺均存在广州管圆线虫感染,且以褐云玛瑙螺感染较为严重。不同调查区域间螺的感染情况亦存在一定差异。     

海南省广州管圆线虫病疫源地调查

目的了解海南省广州管圆线虫病疫源地的分布情况，为预防控制该病提供科学依据。方法按照卫生部《广州管圆线虫病疫源地调查方案》要求，采用研磨匀浆法对重要中间宿主进行检查。结果在3个调查点共解剖检查6种活体物种1160只。其中主要中间宿主福寿螺、褐云玛瑙螺、蛞蝓的感染率分别为10．80％、20．00％、21．75％。在距离民宅点近及周围有生活垃圾的环境的地方捕获的褐云玛瑙螺感染高。结论海南省广州管圆线虫病疫源地分布广泛，种类也较多，存在着广州管圆线虫病在人群中传播流行和局部地区的暴发疫情的潜在危险，应引起重视。     

广东省阳春市褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染的调查

目的 了解广东省阳春市褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫的感染情况.方法 在阳春当地采集野生的褐云玛瑙螺和福寿螺,在实验室用人工胃液消化法检查其中的广州管圆线虫幼虫并记数.用检获的幼虫感染实验小鼠.结果 共检查褐云玛瑙螺350只,福寿螺465只,广州管圆线虫第3期幼虫的阳性率分别为7.71%和0.86%;感染度分别为1～312和1～4.从上述感染的实验小鼠中检获到广州管圆线虫第4期幼虫,且其血清特异性IgM均为阳性.结论 阳春是广州管圆线虫的自然疫源地,该虫中间宿主以褐云玛瑙螺感染较严重.     

广东省江门市褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染情况调查

[目的]了解江门市白沙工业区褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫的感染情况。[方法]使用人工消化法对从上述地点采集的褐云玛瑙螺和福寿螺进行检查。[结果]共检查褐云玛瑙螺465只,福寿螺720只,广州管圆线虫第3期幼虫的阳性率分别为41.94%和1.81%;感染度分别为1~928和1~29。褐云玛瑙螺和福寿螺的螺体越大,其广州管圆线虫的感染率和感染度越高。[结论]江门市白沙工业区及其周围是广州管圆线虫自然疫源地。     

云南石仙桃氯仿萃取物活性部位对人肝癌细胞HepG2的周期抑制作用

目的通过体外实验研究云南石仙桃氯仿萃取物活性部位对人肝癌细胞株HepG2的细胞增殖抑制作用,并进一步研究其作用机理。方法采用噻唑兰(MTT)比色法测定对HepG2细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪技术和蛋白质电泳技术检测对HepG2细胞的细胞周期及相应的细胞周期蛋白表达的影响。结果云南石仙桃氯仿层活性部位通过下调周期蛋白Cyclin B1及其蛋白激酶p34cdc2的表达将HepG2细胞阻滞在G2/M期。结论云南石仙桃氯仿层活性部位对人肝癌细胞HepG2的细胞周期具有阻断作用。     

云南石仙桃的化学成分及其抑制NO生成的作用

目的研究云南石仙桃全草的化学成分,并通过测定所得化合物抑制大鼠巨噬细胞中NO的生成量,以确定云南石仙桃中抑制NO生成的活性成分。方法采用多种柱色谱法进行分离纯化,并根据理化常数和光谱分析进行结构鉴定。利用微板紫外比色法,体外测定各化合物对脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)诱导的RAW 264.7大鼠巨噬细胞NO的生成量。结果分离得到了7个化合物,分别为反式-3,3,′5-三羟基-2′-甲氧基二苯乙烯(trans-3,3,′5-trihydroxy-2′-m ethoxystilbene,Ⅰ)、顺式-3,3′-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯(cis-3,3-′d ihydroxy-5-m ethoxystilbene,Ⅱ)、反式-3,3,′5-三羟基二苯乙烯(trans-3,3,′5-trihydroxystilbene,Ⅲ)、3,3′-二羟基-5-甲氧基联苄(3,3-′d ihydroxy-5-m ethoxyb ibenzy l,batatas in-Ⅲ,Ⅳ)、3,4′-二羟基-3,′5-二甲氧基联苄(3,4-′d ihydroxy-3,′5-d im ethoxyb ibenzy l,g igan to l,Ⅴ)、3,3,′5-三羟基联苄(3,3,′5-trihydroxyb ibenzy l,Ⅵ)、2,7-二羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(贝母兰宁,2,7-d ihydroxy-4-m ethoxy-9,10-d ihydrophenan threne,coe lon in,Ⅶ)。结论化合物Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ具有较强的抑制大鼠巨噬细胞NO生成的作用。化合物Ⅰ和Ⅱ为新化合物,化合物Ⅲ~Ⅶ为首次从该属植物中分离得到。     

3例广州管圆线虫病患儿死亡的原因

目的　报告 3例广州管圆线虫病婴幼儿死亡的病因。为诊治该病提出建议。方法　根据临床症状、病理组织学的检查和有关资料复习及分析。结果与结论　 3例广州管圆线虫病患儿均为临床上误诊、误治和延误救治时机而死亡。及早检查脑脊液、气管冲洗液和粪便等查幼虫和及时治疗有可能挽救患儿。     

广州管圆线虫中间纤维蛋白的体外表达和初步免疫学鉴定

目的对广州管圆线虫中间纤维蛋白(intermediate filament,IF)基因进行体外表达、纯化、鉴定和抗原性质分析。方法将IF基因的重组表达载体pET-IF在大肠杆菌中表达,表达产物经组氨酸亲和层析纯化,SDS-PAGE鉴定蛋白质分子量,质谱分析氨基酸序列,生物信息学分析蛋白质结构,Western blot鉴定与人、大鼠和小鼠感染血清及人IgG4亚类的抗原反应性。结果SDS-PAGE、质谱分析和Western blot证明本研究获得的纯化蛋白为预期蛋白IF,其分子量为47.8kDa,肽指纹图谱与秀丽杆线虫IF蛋白家族具有高度同源性,并具有典型的IF结构特征,且IF结构的尾部存在抗原决定簇,融合蛋白IF能与大鼠感染血清、小鼠感染血清和患者血清IgG结合,也能与患者IgG4亚类结合。结论体外获得了抗原IF纯化蛋白,研究显示其可用于人类外周血检测并有助于检测现症感染和疗效考核。     

云南省广州管圆线虫病流行现状概述

整理分析1980年以来云南省有关广州管圆线虫病的文献资料,从广州管圆线虫的自然疫源地、中间宿主、终宿主以及人群发病等几个方面对云南省广州管圆线虫病的流行现状进行综述,为今后广州管圆线虫病的防治提供线索和依据。