大理市市售福寿螺广州管圆线虫感染监测报告

从大理市泰兴农贸市场随机抽取在售的福寿螺,用肺检法检测广州管圆线虫幼虫。共采集福寿螺32次,62份样品,其中24份阳性,阳性率38.71%;检查福寿螺4 708只,其中68只感染广州管圆线虫,感染率1.44%。福寿螺主要来源于瑞丽和洱源。大理州存在着广州管圆线虫病流行的危险因素,应加强食品流通中的卫生监测及公众的健康教育;并进一步做好大理市广州管圆线虫自然疫源地调查。     

广州管圆线虫Asp-1基因的克隆表达及各虫期转录水平研究

目的构建广州管圆线虫天冬氨酰蛋白酶（Asp-1）基因的原核表达系统,研究该基因在各虫期的转录水平。方法构建重组质粒pET-30a（＋）-Asp-1,并转化至大肠杆菌BL21（DE3）表达载体,经IPTG诱导表达后,Ni-IDA亲和层析纯化表达产物。通过以β-肌动蛋白为内参、以各期虫cDNA为模板的实时荧光定量PCR,研究该基因在各虫期的表达水平。结果获得纯化的重组蛋白,相对分子质量约为43000,与生物信息学分析预测结果一致。qRT-PCR显示该基因在三期幼虫中表达丰度最高,四/五期幼虫、成虫雄虫、雌虫依次降低。结论 Asp-1基因的表达丰度在三期幼虫中最高的实验数据与三期幼虫感染性最强的事实相符,提示天冬氨酰蛋白酶有可能是幼虫入侵宿主的关键酶,为后续广州管圆线虫虫体侵入宿主的机制以及宿主保护机制研究打下基础。     

应用12D5和21B7单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的 研制快速诊断广州管圆线虫感染的金标层析检测试剂.方法 双抗体(12D5和21B7)夹心ELISA检测实验感染广州管圆线虫的大鼠、广州管圆线虫感染病例血清循环抗原(CAg),同时将12D5和21B7单抗点样于固相的硝酸纤维膜上,以胶体金-protein A为标记物制备金标免疫层析试剂快速检测实验感染广州管圆线虫的大鼠、广州管圆线虫感染病例血清循环抗原.结果经鉴定单抗12D5为IgG1,21B7为IgM,两株单抗同时识别广州管圆线虫成虫相对分子质量55×10~3的蛋白,12D5和21B7双抗体夹心ELISA和金标层析法对实验感染广州管圆线虫的大鼠血清中CAg检出率为100%(48/48),广州管圆线虫感染病例血清CAg检出率为100%(32/32),与日本血吸虫、肝吸虫、肺吸虫、旋毛虫、蛔虫、包虫病例血清无交叉反应,与健康人血清无反应.结论 12D5、21B7双抗体夹心ELISA和金标层析法对感染广州管圆线虫人和动物血清中CAg检测的特异性强,金标层析法操作简便、快速,结果判读容易,不需特殊设备,且敏感性高,能够确定现症感染.     

A pooling strategy of a PCR-based assay to detect Angiostrongylus cantonensis in snail intermediate host,Pomacea canaliculata

Pooling field specimens could reduce the number of assay and thus increase the efficiency in detecting and screening pathogen infections by polymerase chain reaction (PCR)-based assay. We investigated a pooling strategy in diagnosis of Angiostrongylus cantonensis in Pomacea canaliculata. Two settings of specimens were prepared, divided into portions and detected by multiplex PCR. Specimens A was 0.4490 g positive lung tissue of 28 larval nodes from four snails mixed with 1.310€g negative lung tissue from six snails and divided into 32 portions. Specimens B was 0.5448 g positive lung tissue with 26 larval nodes from two snails mixed with 1.092 g negative lung tissue from seven snails and divided into 48 portions. Repeated sampling was performed and sample size-accumulated positive rate curves were drawn. According to the sample size-accumulated positive rate curves, the appropriate sample size of the two specimens were 18 and 15, respectively, which is 0.36–0.58 to the total sample size. These test characteristics and the relevant factors to the sample size would need to be determined in much larger studies and more appropriately in field populations. The result indicates that the number of larval node is not the most important, nor the only factor to the sample size. It also implies the feasibility to detect A.€cantonensis in P. canaliculata by pooling strategies.     

UPLC-MS/MS同时测定不同产地石仙桃中30种酚类成分的含量

目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定石仙桃中30种酚类成分含量的方法,并对不同产地的石仙桃药材进行质量评价.方法 采用Welch Xtimate UHPLC C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL·min-1...     

三种方法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫效果的比较研究

目的 比较肺检法、匀浆法和酶消化法检测福寿螺肺囊内广州管圆线虫的效果，以寻找快捷检测方法。 方法 将60只实验室人工感染广州管圆线虫的福寿螺均分2组，分别解剖成螺肺囊与肌肉两部分。镜检两组螺肺囊广州管圆线虫幼虫结节数，用匀浆法和酶消化法分别检测螺肺囊中广州管圆线虫幼虫，比较不同检测方法的效果。酶消化法同时检测福寿螺肌肉内幼虫数，分析螺肺囊与肌肉内幼虫数的相关关系。 结果 肺检法、匀浆法和酶消化法等3种方法检测螺肺囊内幼虫的灵敏度依次为96.7%、93.4%和100%，差异无统计学意义（χ²=2.069，P>0.05）。肺检法的检测速度明显快于匀浆法与酶消化法，差异具有统计学意义（Z=4.782，P＜0.01）；螺肺囊与肌肉组织内的幼虫数呈正相关(r=0.847, P＜0.01）。 结论 肺检法的检测效果与匀浆法和酶消化法相似，但其检测速度更快，适合现场大规模螺体广州管圆线虫的定性筛查。     

广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析

目的克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景。方法利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性。结果该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基。成功构建了重组质粒且目的基因在E.coliBL21中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白。融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高。结论广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景。     

广州市番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染情况调查

目的了解广州市番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺广州管圆线虫感染情况。方法用人工胃液消化法对采集到的褐云玛瑙螺和福寿螺进行处理,镜下观察和计数广州管圆线虫第3期幼虫,比较不同地区、不同螺种的感染率和感染度;将螺体内检获的幼虫感染健康SD大鼠并解剖,以验证之前的检查结果。结果共检测褐云玛瑙螺367只,福寿螺357只,其中褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率为22.62%,阳性螺感染度为57.00条/螺;福寿螺感染率为3.08%,阳性螺感染度为1.64条/螺。大岗、石碁、化龙、榄核4镇和南沙区褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率分别为13.33%、15.00%、20.93%、73.68%和8.41%,福寿螺感染率分别为5.88%、2.88%、1.89%、0%和3.96%。结论番禺地区褐云玛瑙螺和福寿螺均存在广州管圆线虫感染,且以褐云玛瑙螺感染较为严重。不同调查区域间螺的感染情况亦存在一定差异。     

广州管圆线虫感染致病机制的研究进展

广州管圆线虫病是因感染了广州管圆线虫后其幼虫移行至宿主中枢神经系统,从而引起以嗜酸性粒细胞增多为特征、以脑炎和脑膜脑炎为主要临床表现的一种危害严重的食源性寄生虫病,阐明其致病机制对于广州管圆线虫病防治具有重要意义。本文主要就广州管圆线虫感染引起嗜酸性粒细胞增多性脑炎和脑膜脑炎机制研究进展作一综述。     

左旋咪唑及吡喹酮对鼠体内广州管圆线虫幼虫杀灭效果的研究

本文报道感染50条和100条广州管圆线虫幼虫的大白鼠,在感染后第6天开始用左旋咪唑及吡喹酮口服治疗,前者给10mg/kg/日,连用3天和6天,后者给25mg/kg/日,连用6天,每组大白鼠在感染后第14,15、21、22天解剖,从鼠脑收集虫体数,与对照组比较,治疗组收集虫数明显少,治疗3天和6天虫减少率分别为90～96％和99～100％,提示:左旋咪唑有高的杀幼虫效果。连用6天优于连用3天,两者有显著差异,(U=8.30,P<0.001)。吡喹酮治疗6天,虫减少率为65～97％,也有良好的杀虫效果,但不如左旋眯唑好,两者比较,有显著差异,(U=7.45P<0.001)。