微小RNA-182通过靶基因Rac1调控高糖诱导的心肌细胞肥大

目的 探讨微小RNA(miR)-182调控高糖诱导的心肌细胞肥大的机制.方法 利用生物信息学方法预测调控Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)的候选miR.在糖尿病组小鼠(db/db小鼠)和对照组小鼠(db/m小鼠)心肌组织中验证所有候选miR的表达,并分别与Rac1 mRNA做Pearson相关性分析.体外实验,将原代培养的乳鼠心肌细胞分为对照组(葡萄糖浓5 mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度33 mmol/L,HG组).光镜下观察各组乳鼠心肌细胞的形态学变化.采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组乳鼠心肌细胞中miR-182和Rac1 mRNA表达水平.再将原代乳鼠心肌细胞分为4组,分别为正常糖组(葡萄糖浓度5 mmol/L,对照组)、高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L,HG组)、正常糖+miR-182模拟物组(miR-182组)和高糖+miR-182模拟物组(HG+ miR-182组).采用Lipofectamine2000转染miR-182模拟物(终浓度为100 nmol/L).分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测乳鼠心肌细胞中Rac1、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达水平.结果 生物信息学方法预测到参与调控Rac1的候选miR共6个,分别为miR-182、miR-142-3p、miR-140、miR-101a、miR-429和miR-200b.糖尿病组小鼠心肌组织中miR-182和miR-142-3pmRNA表达水平均明显低于对照组(P均＜0.05),且miR-182、miR-142-3p mRNA均与Rac1 mRNA表达水平呈负相关(相关系数分别为r=-0.89102,r=-0.837 19),miR-182与Rac1负相关性最为显著.体外实验结果显示HG组乳鼠心肌细胞中miR-182 mRNA表达水平明显低于对照组(P＜0.05),Rac1 mRNA表达水平则明显高于对照组(P＜0.05);光镜下观察HG+ miR-182组乳鼠心肌细胞肥大程度轻于HG组;HG+ miR-182组乳鼠心肌细胞Rac1和β-MHC mRNA及蛋白表达水平均明显高于HG组(P均＜0.05).结论 miR-182可能通过其靶基因Rac1对高糖诱导的心肌细胞肥大进行调控.     

心肌干细胞移植可短期内改善心肌梗死心电生理稳定性和提高室颤阈值

背景：课题组前期研究已证实心肌干细胞移植中期(6周)能有效改善心肌梗死大鼠的心电生理稳定性和室颤阈值。目的：比较心肌干细胞和骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠心电生理学稳定性和室颤阈值的短期疗效差异。方法：取30只健康雄性SD大鼠,开胸结扎大鼠的左前降支冠状动脉建立心肌梗死动物实验模型,随机分成3组,分别为心肌干细胞移植组,骨髓间充质干细胞移植组,PBS对照组,每组10只。分别于建模成功2周后在梗死区心肌内局部注射0.1 mL PBS悬浮的5×10⁶ PKH26标记的心肌干细胞、0.1 mL PBS悬浮的5×10⁶ PKH26标记的骨髓间充质干细胞及0.1 mL PBS。植入2周后,再次开胸检测大鼠心脏梗死区、梗死边缘区、非梗死区的心电生理特性和室颤阈值。实验结束后,分离心脏梗死边缘区进行病理切片及荧光显微镜检查PHK26标记的心肌干细胞和骨髓间充质干细胞缝隙连接蛋白43表达情况。结果与结论：心肌干细胞移植组单极电图纠正的激动恢复时间离散度、电刺激所激发的恶性心律失常及梗死区、梗死边缘区、非梗死区的室颤阈值与PBS组、骨髓间充质干细胞移植组相比差异有显著性意义(P < 0.05);骨髓间充质干细胞移植组单极电图纠正的激动恢复时间离散度及非梗死区的室颤阈值与PBS组相比差异有显著性意义。病理结果提示在心肌干细胞组、骨髓间充质干细胞组梗死边缘区发现有心肌干细胞、骨髓间充质干细胞的存在。通过组织免疫荧光检测,PKH26标记的心肌干细胞表达较多的缝隙连接蛋白43,而PKH26标记的骨髓间充质干细胞很少表达缝隙连接蛋白43,PBS组不表达缝隙连接蛋白43。上述结果提示心肌干细胞移植短期内心电生理学特性改善的效应较骨髓间充质干细胞优越,且改善效应与缝隙连接蛋白43相关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

山莨菪碱对兔心室肌细胞离子通道电流的影响

目的研究山莨菪碱对兔正常离体心室彤睫田胞离子通道电流的影响,探讨其抗心律失常的细胞学离子机制。方法以酶解的方法分离兔心室肌外膜单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究不同浓度山莨菪碱对兔正常心室肌细胞跨膜钠离子通道电流（INa）、L-钙通道电流（ICa-L）及瞬间外向钾通道电流（Ito）的影响。结果山莨菪碱浓度为10nmol／L时,对INa无明显影响（P〉0．05）。山莨菪碱浓度为100nmol／L时,INa电流密度减少到（-33．25&#177;4．46）pA／pF,1000nmol／L时INa电流密度减少到（-29．32&#177;3．55）pA／pF,抑制率分别为22．3％和31．5％,与基础值比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。山莨菪碱浓度为10nmol／L时,对ICa-L无明显影响（P〉0．05）。山莨菪碱浓度为100nmol／L时,ICa-L．电流密度减少到（-2．15&#177;1．02）pA／pF,1000nmol／L时ICa-L电流密度减少到（-1．82&#177;0．86）pA／pF,抑制率分别为31．3％和41．8％,与基础值比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。山莨菪碱浓度为10nmol／L时,Ito电流密度由（17．41&#177;3．13）pA／pF减少到（16．13&#177;2．93）pA／pF,100nmol／L时减少到（15．11&#177;2．88）pA／pF,1000nmol／L时减少到（14．96&#177;2．82）pA／pF,抑制率分别为7．3％、13．2％和14．1％,均无统计学差异（P〉0．05）。结论山莨若碱对离体正常单个心室肌细胞INa和ICa-L具有剂量依赖性抑制作用。     

硝苯地平对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌细胞蛋白偶联受体激酶的表达及亚细胞分布的影响

目的观察硝苯地平对自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚心肌细胞GRK2的表达及亚细胞分布的影响,探讨硝苯地平逆转心肌肥大的可能机制。方法以SHR为研究对象,分为对照组(SHRC)、低剂量硝苯地平干预组(SHRL:10mg·kg-1.d-1)及高剂量硝苯地平干预组(SHRH:30mg·kg-1.d-1)(n=6),由6月龄喂养至8月龄,处死后分离心脏,通过免疫荧光标记及Western Blot等方法,观察左心室心肌细胞GRK2的表达及其亚细胞分布的变化。结果 GRK2于左心室心肌组织总蛋白、浆蛋白中表达水平SHRL、SHRH较SHRC组显著减少,而SHRL与SHRH组中GRK2表达水平差异无统计学意义,于膜蛋白表达水平按对照组、低剂量组、高剂量组的顺序呈递减的趋势,即SHRC>SHRL>SHRH(P<0.05);激光共聚焦显微镜观察显示:与SHRC组比较,SHRL组及SHRH组GRK2在心肌细胞膜上分布减少,SHRH组较SHRL组又进一步减少。结论通过硝苯地平的干预,SHR左心室心肌细胞GRK2的表达减少且出现亚细胞分布的变化,提示硝苯地平对GRK2的影响可能是逆转心肌肥大及心室重塑的机制之一。     

连接蛋白40/43调节大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度与肠系膜上动收缩反应性的研究

目的 了解连接蛋白40(Cx40)/43调节失血性休克大鼠肠系膜上动脉(SMA)内膜依赖的血管收缩反应性,探讨与血管平滑肌细胞(VSMC)胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的关系.方法 以传至3～5代培养的SD大鼠血管内皮细胞(VEC)及VSMC为研究对象,观察不同程度缺氧对SMA和VSMC收缩反应性的影响;用Cx40/43的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)阻断SMA、VEC和VSMC的Cx40/43表达,观察Cx40/43对缺氧SMA的收缩反应性和VSMC[Ca2+]i的作用.结果 缺氧后SMA和VSMC的收缩反应性均呈先增加后降低的变化过程;缺氧可以引起VSMC钙超载,[Ca+]i从常氧状态下的(82±4)%增至缺氧30 min时的(115±8)%和缺氧2 h的(133±13)%;Cx40 ASODN可以增加VSMC的[Ca+]i和SMA对杨梅黄酮的收缩反应性,Cx43 ASODN则引起相反效应.结论 Cx40/43通过调节VSMC[Ca+]i,间接参与调节休克后SMA内膜依赖的血管收缩反应性.     

微囊蛋白1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的抑制机制及罗红霉素的调控作用

目的 探讨微囊蛋白1抑制气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的可能机制以及罗红霉素的调控作用.方法 复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理学变化,透射电镜观察各组ASMCs上微囊的结构及变化,用组织贴壁法体外培养ASMCs,实验设对照组(A组:含2.5％胎牛血清的高糖培养液处理1h)、哮喘组(B组:处理同A组)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路阻断剂PD98059组(C组:10×10-6mol/L的PD98059处理1h)、罗红霉素组(D组:100 mg/L的罗红霉素处理1h)、β-甲基环糊精组(E组:5μmol/L的β甲基环糊精处理1h);用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况,Western印迹检测各组微囊蛋白1表达;逆转录(RT)-PCR和Western印迹分别检测ERK1/2mRNA、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和磷酸化ERK1/2、MCP-1蛋白的表达.结果 C、D组ASMCs增殖显著低于B组(0.68±0.15、0.63 ±0.13比0.96 ±0.14,均P＜0.05);E组(1.26±0.11) ASMCs增殖强于B组(P＜0.05).C、D组微囊蛋白1表达均显著高于B组(0.332±0.057、0.392±0.064比0.237±0.032,均P＜0.05);C、D组ERK1/2蛋白表达均显著低于B组(0.241±0.017、0.268±0.007比0.346±0.009,均P＜0.01),E组(0.441±0.011) ERK1/2蛋白表达高于B组;C、D组ERK1/2 mRNA表达均显著低于B组(0.277±0.043、0.338±0.026比0.591±0.022,均P＜0.01).C、D组MCP-1蛋白表达均显著低于B组(0.198±0.015、0.286±0.019比0.482±0.026,均P＜0.01),E组(0.521±0.023) MCP-1蛋白表达较B有升高趋势;C、D组MCP-1mRNA表达均显著低于B组(0.212 ±0.042、0.249±0.032比0.676±0.053,均P＜0.01).结论 微囊蛋白1可能通过ERK信号通路抑制MCP-1表达,从而抑制哮喘ASMCs的增殖.罗红霉素可能上调微囊蛋白1的表达,抑制MCP-1 mRNA表达和翻译,进而抑制哮喘ASMCs的增殖.     

氟伐他汀对心肌细胞凋亡的调控作用及其可能机制研究

目的 以大鼠胚胎来源的心肌细胞为模型,观察氟伐他汀对心肌细胞凋亡的调控作用,并探讨其可能机制.方法 通过MTT检测法检测细胞活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时定量PCR以及Western Blot方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体的表达.结果 氟伐他汀能够以浓度依赖性的方式降低H9c2细胞的活性,10 μM 氟伐他汀处理H9c2细胞后其凋亡率增加,处理4 d后H9c2细胞凋亡率为54.9%;氟伐他汀能够上调 TβRⅡ mRNA 和蛋白的表达,而对TGF-β1及TβRⅠ的表达无明显的上调作用.结论 氟伐他汀能够诱导H9c2细胞的凋亡,这种凋亡诱导作用可能与氟伐他汀对TβRⅡ的上调作用有关.     

人参皂苷Rg_2对体外培养低氧心肌细胞的保护作用

目的 观察人参皂苷Rg2对低氧心肌细胞的保护作用.方法 取新生24 h的Wistar大鼠心肌细胞,体外培养4 d,随机分为正常组、模型组、人参皂苷Rg2组.人参皂苷Rg2组加入0.025 mmol/L的人参皂苷Rg2,正常组与模型组加入等量的培养液.孵育4 h后,将模型组与人参皂苷Rg2组移入37 ℃恒温密闭容器中,连续充以体积分数0.95的N2和体积分数0.05的CO2混合气体,流速20 mL/min,持续1 h,然后应用锥虫蓝染色计数存活细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量.结果 人参皂苷Rg2组与正常组心肌细胞凋亡率比模型组明显降低(F=4.75,q=6.44～8.09,P<0.05);人参皂苷Rg2组与正常组心肌细胞SOD活性、MDA和NO含量与模型组相比差异有显著性(F=5.67～13.72,q=4.35～13.68,P<0.05).结论 人参皂苷Rg2在体外有抗低氧损伤的作用,其作用机制可能是通过抑制细胞凋亡、提高抗氧化酶的活力、清除自由基而发挥作用.     

RhoA/SRF信号通路介导Nelin诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的 探讨Nelin基因对人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的调控机制.方法 应用过表达慢病毒载体[Nelin-VSMC]及干扰慢病毒载体[LV-Nelin-SiRNA-VSMC]制备稳定转染的VSMC细胞模型,通过荧光定量PCR以及蛋白质印迹分析(Western blotanalysis,WB)等技术手段,观察Nelin蛋白过表达及表达抑制对人VSMC表型转化的影响及其调控机制.结果 Nelin-VSMC组细胞呈收缩表型,细胞细长,成“谷-峰”样生长,Nelin mRNA、Nelin蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMoα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子-血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,经Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,SRF在细胞核中表达显著减少,同时SMα-actin表达下调;LV-Nelin-SiRNA-VSMC组细胞呈合成表型,细胞体积变大,细胞极性消失,生长状态无序,Nelin mRNA、Nelin蛋白和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.结论 在体外培养的人VSMC中,Nelin依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMC向收缩表型转换.     

子宫腺肌病子宫内膜-肌层连接区超微结构研究

目的研究子宫腺肌病子宫内膜-肌层连接区超微结构的改变与子宫腺肌病发病的关系。方法透射电镜下观察子宫腺肌病组子宫内膜-肌层连接区(8例)和对照组子宫内膜-肌层连接区(8例)的超微结构。结果与对照组相比,子宫腺肌病组腺上皮细胞表面微绒毛密集,胞质内线粒体体积增大,功能活跃,未见细胞凋亡;平滑肌细胞排列紊乱,正常带结构扭曲,胞质内细胞器减少,线粒体空泡化;肥大细胞增多,胞质内充满大量电子密度高的颗粒,周围胶原纤维增多,与平滑肌细胞紧密相邻。结论子宫内膜-肌层连接区的结构改变与子宫腺肌病的发生有密切关系。