全血中性粒细胞分离方法对fMLP诱导极性化的影响

目的 比较Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法两种常用的中性粒细胞分离方法,为中性粒细胞极性化研究提供有效手段.方法 取健康成年人外周血,采用Percoll非连续密度梯度离心法和Dextran沉降法分离中性粒细胞,分别检测分离后的中性粒细胞的极性、纯度、存活率,比较二者对极性信号分子F-actin的聚合和胞内Ca2+的影响.结果 二者在极性率、纯度、存活率方面并不存在显著性差异,但Dextran沉降法在fMLP诱导细胞极性3 min内对F-actin的聚合产生抑制作用,同时可使胞内Ca2+升高的Ca2+峰降低约25%.结论 对PMNs极性功能研究时,两种分离方法都可以选择.Percoll非连续密度梯度离心法更有优势,但在需要纯化大量PMNs时,Dextran沉降法也是一种好的选择.     

HCMV感染孕妇外周血中胎儿细胞的分离

目的运用不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞。方法取20名人巨细胞病毒抗原血症(pp65)阳性的孕妇外周EDTA抗凝血,经不连续密度梯度离心初步富集、免疫磁珠法分选及胎儿细胞。结果 20名pp65阳性孕妇外周血中分选到胎儿有核红细胞的有16例,10份正常妊娠妇女外周血细胞涂片中发现胎儿有核红细胞数9例。10份未妊娠妇女外周血细胞涂片中均未发现胎儿有核红细胞。结论不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法结合特异性抗体-HbF标记、识别能有效地分选出母血中胎儿有核红细胞,应用于进一步的无创性产前诊断,将有着良好的应用前景。     

Time intervals between semen production,initiation of analysis,and IUI significantly influence clinical pregnancies and live births

PurposeDoes IDEF mapping help monitor the technical process of IUI and explore the potential improvements which might contribute to increased pregnancy and live birth rates?MethodRetrospective analysis of 1729 homologous IUI cycles of couples attending a fertility clinic in a university hospital setting. Standardized conventional semen parameters were analyzed and the semen samples prepared via discontinuous density gradient centrifugation.ResultsThere was no significant association between sperm concentration, motility and morphology (analysis phase), and pregnancy outcome. Only female and male ages were significantly associated with the pregnancy outcome. There was a significant difference in the odds on clinical pregnancies and live births when analysis was ≤ 21 min initiated, and < 107 min between sample production and IUI, adjusted for male and female age.ConclusionsAdjusting for the couple’s age, we could show that time intervals between semen production and analysis and IUI when kept low significantly influenced clinical pregnancies and live births.     

大鼠MSCs的体外分离、培养及鉴定的实验研究

[目的]体外分离、培养及鉴定大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）。[方法]密度梯度离心法体外分离、培养7周龄sD大鼠MSCs,利用差速贴壁原理纯化MSCs,并通过形态学观察、细胞表面抗原标志物、多细胞系诱导分化对其进行鉴定。[结果]第3代（P3代）不表达抗原CD34,表达抗原CD44,符合MSCs表面标志物特征。[结论]密度梯度离心法能够建立稳定的MSCs体外分离培养体系。     

中药复方制剂工艺中澄清技术对有效成分影响探讨

从４个方面对中药复方制剂工艺中澄清技术对有效成分的影响进行了探讨。即水提醇沉法使用已久,虽然使单服剂量缩小,但对有效成分的损失较大,使原方的治疗效果明显降低;高速离心法、超滤法、１０１果汁澄清法等是近几年报道较多,应用效果较好的方法,各有特点,既能单独,也可结合应用,能保证复方中主要有效成分不受损失,是值得推广和需要进一步探讨的方法。     

蒙药孟根乌苏中HgS微-纳米颗粒的提取、分离及体外溶出研究

目的对蒙药孟根乌苏中HgS微-纳米颗粒的提取、分离及体外溶出进行研究。方法采用索氏提取法去除单质硫,确定孟根乌苏提取的最佳时间。采用差速离心法分离HgS颗粒;通过控制PVP浓度、投料比、离心机转速等因素获得不同粒径的HgS微-纳米颗粒;利用扫描电镜(SEM)及X-射线衍射法(XRD)分析颗粒形貌和结构组成;采用双硫腙比色法对比研究不同粒径范围的HgS颗粒、孟根乌苏原药材及孟根乌苏-18味丸在模拟人工胃液、人工肠液中的溶出情况。结果分离得到的6个HgS颗粒样品的粒径分布较均匀,粒径分别为2 000～4 000、800～2 000、200～800、80～200、50～80、20～50 nm。提取后样品中主要成分为α-HgS及β-HgS。体外溶出结果表明,随着HgS颗粒粒径变小,汞的溶出度增大,表明汞的溶出与HgS颗粒粒径大小呈反比关系。同时汞的溶出度也受硫、p H值及复方的影响。结论该法可简单、高效地分离HgS颗粒。为不同粒径HgS微-纳米颗粒的药动学和药理学研究提供了基础。     

微柱离心-HPLC测定胰岛素脂质体的包封率

目的使用微柱凝胶离心分离结合高效液相色谱法(HPLC)定量的方法,建立胰岛素脂质体包封率的测定方法。方法采用了改良的薄膜分散法来制备胰岛素脂质体。使用Sephadex G-50填充凝胶离心微柱,分别使用去离子水及磷酸缓冲液作为洗脱液,分离载药脂质体和游离胰岛素后,经HPLC测定胰岛素浓度并计算包封率。结果通过洗脱曲线确定了洗脱方式,上样体积为600μL,使用去离子水洗脱5次(每次600μL)可将载药脂质体完全洗脱,再使用pH 7.4磷酸盐缓冲液洗脱6次可将其中的游离药物完全洗脱。实现了完全分离载药脂质体与外水相游离药物,经HPLC测定并计算得出3批胰岛素脂质体的平均包封率为36.03%。结论对于亲水性多肽药物脂质体,微柱离心可以实现有效分离脂质体与游离药物的目的,结合HPLC测定其中胰岛素的含量,可以作为测定胰岛素脂质体包封率的有效方法。     

大鼠肝星状细胞的分离和培养

目的:本文参考Friedman等的不连续密度离心法并作改良,建立了一种经济、简便、可靠的分离大鼠肝星状细胞(HSC)的方法。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶灌流大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离HSC,并进行体外培养,结果:分离培养的HSC经台盼蓝拒染实验活细胞大于98％,细胞得率为3.95×10个/肝脏。结论:该方法简便、实用、稳定、可靠,而且本方法的建立为进一步研究HSC与肝纤维化的关系,尤其是细胞水平及分子生物学水平的研究奠定了基础。     

浸渍离心法制备不同难溶性药物介孔二氧化硅纳米粒载药规律及机制研究

目的用浸渍离心法制备载不同性质的难溶性药物的介孔二氧化硅纳米粒(MSNs),探寻药物质量浓度与载药量的关系和MSNs载药机制。方法制备空白MSNs,用透射电子显微镜(TEM)和氮气吸附-脱附解析进行表征。以水飞蓟宾、葛根素、盐酸小檗碱、姜黄素和阿魏酸为模型药物,分别固定药物溶液体积和药物质量,采用浸渍离心法载药,测定载药量,分析载药规律,并用紫杉醇、丹参酮IIA和延胡索乙素3种药物对其载药规律进行验证。对载药量较高的水飞蓟宾、葛根素和阿魏酸MSNs进行扫描电子显微镜(SEM)和差示扫描量热法(DSC)表征,分析载药机制。结果空白MSNs粒径为(220±21)nm,比表面积为353.53 m2/g,平均孔径1.53 nm,孔容积率约为0.4 cm3/g。在药载比不变的情况下,无论是固定药物溶液体积,还是固定药物质量,载药量都与药物质量浓度呈线性关系,且与药物性质无关,5种药物的综合回归方程分别为固定药物溶液体积Y=0.351 7 X+0.982 5,r=0.991 4和固定药物质量Y=0.359 2 X+0.248 3,r=0.991 0。SEM显示载药MSNs表面没有明显的药物结晶。载药MSNs的DSC均观察到了药物的熔融峰,但单位吸热量均比等比例的机械混合物明显减小。结论药物溶液质量浓度是决定MSNs浸渍离心法载药效果的关键因素,药物主要以无定形及微晶形式分散于MSNs的介孔中。     

微柱离心-药脂比测定脂质体药物包封率

目的建立一种准确测定脂质体包封率的方法。方法以氟吡洛芬、酮洛芬、拓扑替康为模型药物脂质体,通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)微柱离心去除游离药物,以HPLC法测定药物含量,以定磷法测定磷脂含量,通过药脂比测定药物包封率。结果无需将脂质体完全洗脱,通过检测洗脱脂质体中的药脂比能够准确测定脂质体包封率;对于水溶性药物拓扑替康,若将脂质体完全洗脱,则可能无法将游离药物完全分离。结论在一定条件下微柱离心去除游离药物,通过药脂比测定包封率方便准确。