成年鼠被毛毛乳头细胞分离方法的建立与评价

目的 寻求一种简单高效的分离培养小鼠被毛毛乳头细胞的方法.方法 取5周龄C57小鼠背部皮肤,刮去毛发后予0.2％Ⅰ型胶原酶37℃消化2h,刮下毛球部,经过2次Ficoll密度梯度离心后,得到纯净的毛乳头进行培养.检测毛乳头贴壁率、毛乳头细胞特异性标记表达及其体内毛囊重建能力.结果 该分离方法能显著降低工作强度,减少污染机会,获得的毛乳头贴壁快、细胞迁出快.qRT-PCR、细胞免疫荧光实验结果均证实体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞可表达与毛囊诱导能力相关的特异性标记物ALP、β-catenin及Versican,且与触须毛乳头细胞相比差异无统计学意义(P＞0.05).体外培养的小鼠被毛毛乳头细胞具有诱导毛囊再生的能力.结论 胶原酶消化结合Ficoll梯度离心是一种简单、有效地分离获取小鼠背部毛乳头的方法.     

密度梯度离心联合上游法的精液处理在供精体外受精胚胎移植中的应用

目的:观察供精体外受精-胚胎移植术(D-IVF)中采用密度梯度离心法联合上游法处理精液后的胚胎情况。方法:回顾本院2013年1月-2014年7月D-IVF 135个周期,观察冷冻精液复苏后经采用密度梯度离心法联合上游法处理后精子总活动率、前向运动精子活动率等精液情况,以及受精以后的受精率、卵裂率、临床妊娠率,对照组为同期46个因丈夫梗阻性无精行ICSI的周期。结果:处理后精子总活动率、前向运动精子活动率均大大提高,但是精子密度却大大下降,处理前后比较差异均有统计学意义(P0.05);受精以后的实验室资料和对照组比较,各项参数差异无统计学意义(P0.05)。结论:密度梯度离心法联合上游法的精液处理方法在D-IVF中是一种稳定可行的方法。     

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。　方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。　结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。　结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。     

SD大鼠肝枯否细胞分离培养的改良方法与鉴定

目的枯否细胞(Kupffer cells,KC)是肝内巨噬细胞群,活化的KC参与多种生物、病理学反应过程。然而,KC分离、培养技术进展缓慢。为研究KC致炎、抗炎活化机制,旨在建立经济、简便、有效、稳定分离培养SD大鼠肝KC的方法。方法选用健康雄性SD大鼠,采用0.05%IV型胶原酶灌注肝,经25%和50%percoll密度梯度离心,提取肝KC。荧光显微镜下观察细胞自发荧光情况,锥虫蓝拒染实验鉴定细胞活力,倒置显微镜下观察KC培养过程中细胞形态变化,吞噬墨水、latex珠实验以及免疫细胞化学染色法鉴定细胞纯度。结果大鼠肝KC得率为(3.22±0.31)×107(n=24),细胞活力为(92.35±0.13)%,细胞纯度均在(94.62±0.24)%。结论该方法简单、可行,为进一步研究KC功能和作用机制奠定基础。     

离心速度与时间对精子活动的影响

选用12例正常男性精液，用合成营养液将精子稀释至20×109／L，用不同的离心速度和离心时间，分别观察其对精子的活动率、6h存活率及精子活动力的影响，结果提示优选精子的最佳离心速度和离心时间是1000r／min和6min时，精子活动力能提高。增加离心速度和时间，则降低精子的活动力。     

地塞米松、二甲亚砜及低速离心对人巨细胞病毒复制的影响

本文报道低速离心、地塞米松和二甲亚砜对人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上增殖的影响。结果表明本法能使人类巨细胞病毒的细胞病变分别提前2～3天。地塞米松能增加人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上空斑形成能力约3倍。     

快速大量分离血浆低密度脂蛋白亚组分的方法

目的 :研究快速大量分离低密度脂蛋白亚组分的方法。方法 :通过2步超速离心法分离LDL亚组分 ,并用电泳法及电镜观察鉴定2种亚组分。结果 :仅用10h就将LDL亚组分分开 ,并证实经分离的2种亚组分为纯品。结论 :本方法是1种分离LDL亚组分较好方法     

体外诱导小鼠骨髓单个核细胞向内皮分化的实验研究

目的:为组织工程研究做准备,分离培养小鼠骨髓单个核细胞并诱导向血管内皮分化。方法:成年Balb/c小鼠,应用淋巴细胞分离液(密度1.077g/m l),将长骨骨髓经F icoll非连续密度梯度离心,收集中层的单个核细胞,加入诱导培养基并置于纤维连接素包被的培养板上进行诱导分化,观察细胞生长状况,以透射电镜及Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组化以及流式细胞仪方法对培养细胞进行鉴定。结果:细胞圆形、纺锤形单层融合贴壁生长;Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组化染色阳性;透射电镜显示细胞具有内皮特征性的W-P小体。结论:采用F icoll密度梯度离心可获得较高纯度的骨髓单个核细胞,经体外培养并诱导分化,具有血管内皮细胞的特征。     

大鼠骨髓基质干细胞体外诱导向内皮分化的实验研究

目的分离培养大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),并诱导其向内皮分化,为组织工程研究作准备。方法成年SD大鼠,应用Ficoll淋巴细胞分离液(密度为1．077g／m1)将长骨骨髓经非连续密度梯度离心,收集中层的单个核细胞,加入诱导培养基并置于纤维连接素包被的培养板上进行诱导分化,观察细胞生长状况,通过透射电镜观察、流式细胞仪检测阳性细胞百分率及Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组织化学检测,对培养细胞进行鉴定。结果细胞呈圆形、纺锤形单层融合贴壁生长;Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组织化学染色阳性;透射电镜示细胞具有内皮特征性的Weibel-Palade小体。结论Ficoll密度梯度离心可获得较高纯度的BMSCs,经体外培养并诱导分化,具有血管内皮特征。     

2种纯化流感病毒方法的比较研究

目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose—density—gradient—centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorption and release-RBC,AR—RBC)进行纯化,收集纯化病毒测定血凝效价,比较2种纯化方法。结果SDGC法纯化病毒可在30％和45％蔗糖层面交界处的区带中检测到流感病毒,血凝效价为1：2560;用AR—RBC法纯化病毒过程中用新鲜鸡红细胞出现了溶血现象,而用甲醛处理过的鸡红细胞则无此现象,血凝效价均为1：2560。结论与SDGC法纯化病毒比较,AR-RBC法是一种经济实用、操作简便并有较高纯化效率的方法,尤以甲醛处理过的鸡红细胞纯化效果最好。