弓形虫McAb的制备和鉴定

弓形虫是一种人兽共患病的病原寄生虫,是一级实验动物必须检测的项目之一。目前最常用的检查方法是检测血清抗体。抗原检查应该是最直接、直观的手段,但是直接涂片、饱和盐水漂浮和动物接种等方法或检出率低或步骤繁琐。制备制异性的ＭｃＡｂ,用于弓形虫抗原检测是这个研究的出发点。我们通过小鼠腹腔繁殖弓形虫速殖子,利用Ｇ２砂蕊漏斗过滤,提纯速殖子,反复冻融及超声波粉碎,制备可溶性抗原。常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,免疫剂量为１００μｇ／只,取免疫后小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,间接ＥＬＩＳＡ法筛选,有限稀…     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备基因重组人睫状神经营养因子 (rhCNTF)单克隆抗体。方法利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠 ,取其脾细胞与小鼠NS -1骨髓瘤细胞融合 ,制备 3株抗rhCNTF的单克隆抗体 ,分别命名为CA2 、CA6 和BB11。结果 3株抗体类型均为IgG2a,免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体 ;抗体相加试验表明 3株单抗是针对CNTF两个不同的抗原决定簇。     

单克隆抗体乳胶增强免疫法检测HbA1c的评价

目的评价单克隆抗体乳胶增强免疫法（MLEI）检测HbAlc在临床应用中的真实性和可靠性。方法相关性试验采用与离子交换层析（IEC）进行对比研究;重复性实验用批内精密度和批间精密度;准确性实验用倍比稀释平均回收率表示;特异性实验采用加干扰物法。结果相关性实验表明,MLEI法与IEC法呈良好的线性关系,Y=1．2978＋0．8549X,r=0．9043。重复性实验为MLEI法平均批内CV为4．4％,批间洲分别为5．9％和6．3％,平均6．1％。而IEC法的批内CV分别为7．7％和8．6％,平均CV8．15％,MILE法平均回收率为93．8％。特异性实验表明,648μmol／L胆红素,500mg／L抗坏血酸和2000U乳糜微粒均不干扰MLEI法。结论Ⅺ皿法检测HBA1C具有简便、快速、重复性好、准确度高,干扰因素少和全自动测定的优点。     

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻,重链可变区基因的克隆及序列分析

获得鼠抗人精浆蛋白单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础。方法；从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，经反转录，ＰＣＸＲ分离获得了γ－Ｓｍ－ＭｃＡｂ轻链可变区基因和重链可变区基因，分别克隆入ｐＵＣ１９质粒中，用全自动荧光ＤＮＡ序列分析仪对ＶＨ，ＶＬ基因序列进行了分析。     

循环抗体和循环抗原检测对泡球蚴病的疗效评价

本文对小鼠继发性泡球蚴病用吡喹酮脂质体、吡喹酮、阿苯达唑、甲苯达唑、氟苯达唑进行化疗，对各组治疗期间的小鼠血清用间接血凝（ＩＨＡ）、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），分别检测循环抗体（ＣＡｂ）和循环抗原（ＣＡｇ）。结果表明，除阿苯达唑组小鼠血清抗体水平在治疗结束时下降明显，与对照组有显著差异外，其余各治疗组的抗体水平下降均不明显。各组治疗结束时，小鼠血清的ＣＡｇ水平明显下降，与对照组有显著差异（Ｐ＜０．０１），表明检测循环抗原可作为疗效考核的指标之一。     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

消灭丝虫病地区病原学监测方法的研究

为筛选适宜在消灭丝虫病地区应用的简易、经济、实用的病原学监测方法,对单克隆抗体（McAb）-ELISA检测丝虫特异IgG4和快速免疫色谱技术（ICT）检测血清和血浆中的班氏丝虫抗原诊断丝虫病的效果进行对比研究。结果检测班氏微丝蚴血症者59例,丝虫特异IgG4阳性57例,阳性率96.61%;ICT丝虫抗原阳性56例,阳性率为94.92%。两种方法均具有较高的敏感性,差异无显著性（P＞0.05）。同时分别检测非流行区健康者40人,囊虫病患者30例及25例华支睾吸虫病患者血清,两种方法均呈阴性,未出现交叉反应,特异性为100%。现场研究两种方法分别检测基本消灭丝虫病后出生儿童302人,消灭丝虫病地区人群372人,晚期丝虫病患者55例（乳糜尿41例,象皮肿14例）,原微丝蚴血症转阴者60例。结果仅消灭丝虫病地区人群中1例（以往血检阴性）丝虫特异IgG4强阳性,ICT丝虫抗原弱阳性,但反复镜检未发现微丝蚴。其余均为阴性。研究表明,两种方法均具有较高的敏感性和特异性,均可用于消灭丝虫病地区病原学的监测。McAb-ELISA检测丝虫特异IgG4可大面积用于消灭丝虫病地区的病原学监测。而ICT检测班氏丝虫抗原更适用于个案病例的检测。     

检测血吸虫循环抗原的多价单克隆抗体诊断试剂盒的研制和应用

用杂交瘤技术生产抗血吸虫肠相关循环阳极抗原（ＣＡＡ）单克隆抗体与血吸虫卵糖蛋白单克隆抗体经混合后标记辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），制成Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，检测轻、中、重不同疫区粪检阳性的血吸虫病人血清中循环抗原，阳性率分别为８４．３％、８７．２％和９１．５％。累计阳性率为８９．２％（６１９／６９４）。对健康人、肝吸虫、肺吸虫病人血清均未出现阳性反应，显示有较高的敏感性和特异性。ＥＰＧ＞８０的病人循环抗原检出率高干ＥＰＧ／８０的病人。说明循环抗原检出率与感染度有关。血吸虫病人经吡喹酮治疗后半年和１年循环抗原转阴率分别为７１．４％和８８．６％。结果表明．该试剂盒可用于确诊病人和考核疗效。试剂盒质量稳定，操作简便快速，整个试验可在１小时内完成，且不需特殊仪器，适于现场大规模查病应用。     

PREPARATION AND IDENTIFICATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST THE EXTRACELLULAR DOMAIN OF INTEGRIN α6 SUBUNIT-THE SPECIFIC LAMININ RECEPTOR

Objective: To prepare monoclonal antibody (McAb) against the Integrin α6 extracellular domain and identify its biological activities. Methods: Fusion-protein of integrin α6 extracellular domain (GST-IAGED) was expressed in E.coli. JM109 and used for immunizing BALB/C mice. The spleen cells from immunized mice were fused with SP2/0 cells and selectively cultured with HAT medium. ELISA and immunocytochemistry staining were used to select hybridomas. Results: One strain of hybridoma cells that secreted specific monoclonal antibody against integrin α6 extracellular domain was indentified. The immunoglobulin subclass of the McAb was IgG1. Conclusion: The McAb against the extracellular domain of integrin α6 was successfully prepared by using GST-IA6ED fusion protein expressed by E.Coli. And the McAb had positive reaction with human hepatocarcinoma cells-BEL-7402.     

用单克隆抗体对泡球蚴角皮层起源的免疫组化研究(英文)

棘球蚴和泡球蚴包囊角皮层的发生源一直是有争议的。虽然大多数的观点倾向于包囊生发层产生学说,但是到目前仍然缺乏结论性的证据。在本实验中,我们首次通过使用特异性抗泡球蚴包囊角皮层单克隆抗体,对泡球蚴包囊组织进行了免疫组织化学研究。研究结果表明,泡球蚴包囊角皮层极有可能是由包囊生发层产生而来的。