Sema6D对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成能力的影响及机制

目的 探讨沉默信号素蛋白6D(Sema6D)对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及促进血管形成能力的影响.方法 检测人骨肉瘤组织及细胞系中Sema6D的表达情况,脂质体法转染靶向siRNA后通过CCK-8、细胞划痕、Transwell、人脐静脉内皮细胞与肿瘤条件培养基共培养实验探究骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和体外促血管形成能...     

HMGB2沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响

目的 探讨HMGB2沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响。方法 采用将靶向HMGB2的寡核苷酸克隆至pLKO.1 puro载体质粒构建靶向沉默HMGB2表达的慢病毒shRNA。将MDA-MB-231细胞分为对照组、空转染组及HMGB2干扰组,其中空转染组及HMGB2干扰组分别转染包含随机序列shRNA和靶向HMGB2 shRNA的病毒液,对照组仅行常规培养而不行任何转染。采用Western blotting检测各组转染48 h后的HMGB2蛋白水平以评价转染效率,采用MTT法计算各组细胞的存活率,流式细胞术检测转染48 h后的细胞凋亡率,Transwell法检测转染48 h后的细胞侵袭和转移水平。结果 HMGB2干扰组的HMGB2蛋白水平低于对照组和空转染组,差异有统计学意义（P＜0.05）,提示构建的载体沉默HMGB2的效果显著。与对照组和空转染组比较,HMGB2干扰组的细胞存活率降低,且随着转染时间的延长而呈降低趋势,差异均有统计学意义（P＜0.05）;HMGB2干扰组细胞的早期、晚期及总凋亡率均高于其余两组,且侵袭细胞数目和迁移细胞数目均低于其余两组,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 shRNA靶向沉默MDA-MB-231细胞中HMGB2表达效果显著,可抑制细胞增殖及侵袭迁移并诱导细胞凋亡,为乳腺癌靶向治疗提供一定参考。     

艾瑞昔布抑制肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移及其机制

背景与目的：环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)与肺癌血管生成、淋巴转移相关,COX-2抑制剂能够抑制肺癌侵袭和转移。该研究探讨COX-2抑制剂艾瑞昔布能否抑制肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤侵袭和转移及其机制,以及与洛铂联合应用的疗效。方法：将肺腺癌A549细胞接种于30只BALB/c雄性裸鼠右侧腋部皮下,建立移植瘤模型。将造模成功裸鼠(n=29)随机分为4组：对照组(n=7)、艾瑞昔布组(n=8)、洛铂组(n=7)和艾瑞昔布联合洛铂组(n=7)。对照组灌胃等量灭菌蒸馏水及尾静脉注射等量0.9%NaCl溶液,治疗组分别给予灌胃艾瑞昔布片每日40 mg/kg及尾静脉注射洛铂每周7.5 mg/kg相应处理。每日观察裸鼠饮食、活动等一般情况。给药6周后处死裸鼠,剥取移植瘤组织。应用免疫组织化学法和real-time PCR分别检测各组肿瘤PTEN、cortactin蛋白及相应mRNA表达水平。采用单因素方差分析及非参数检验进行统计学分析。结果：最后1周发现所有裸鼠饮食、活动较之前减少,逐渐消瘦,洛铂组及联合组变化较明显。与对照组相比,艾瑞昔布组及联合组PTEN蛋白及其mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P均<0.001);与对照组相比,艾瑞昔布组及联合组cortactin蛋白及其mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。PTEN与cortactin蛋白、PTEN mRNA与cortactin mRNA均呈显著负相关(r=-0.660、-0.983,P均<0.001)。结论：艾瑞昔布能够抑制非小细胞肺癌侵袭和转移,其作用机制可能与上调PTEN蛋白及下调cortactin蛋白表达有关。艾瑞昔布对洛铂化疗可能具有增敏作用。     

非整倍体与肿瘤细胞致瘤性关系的初步研究

背景与目的：非整倍体与肿瘤形成有关,本研究旨在探讨非整倍体与肿瘤细胞致瘤性的关系。方法：C3和C5细胞系是来自于同一淋巴瘤细胞系的两个亚克隆,采用CCK-8检测2个淋巴瘤细胞系C3和C5的增殖能力;应用常规染色体分析法检测这些细胞系的核型;采用软琼脂克隆形成实验检测这些细胞系的体外致瘤能力;采用Transwell小室检测这些细胞系的侵袭转移能力;通过小鼠体内成瘤实验检测这些细胞系的体内致瘤能力。结果：两个细胞系中C3增殖能力强于C5,差异有统计学意义。核型分析结果表明,这两个细胞系都是非整倍体核型,细胞系C3的众数范围是38~78,C5的众数范围是28~50,C3细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为20.33%、8.47%和71.2%,C5细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为11.11%、86.42%和2.47%。C3和C5细胞系的非整倍体细胞比例分别为95.73%和13.58%。C3细胞系可以在软琼脂中形成克隆,而C5细胞系未能形成克隆。在体外,C3细胞系的侵袭转移能力强于C5细胞系。体内致瘤实验结果表明,C3细胞系恶性程度较高,体内致瘤能力明显强于C5细胞系,C3细胞系在体内的转移灶较多,在肝脏和肾脏均有转移灶点,而C5细胞系只在肾脏出现转移灶点。结论：非整倍体与肿瘤细胞致瘤性之间存在相关性,非整倍体对细胞的恶性转化及肿瘤发生具有重要贡献。     

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。     

微小RNA-375对鼻咽癌细胞侵袭迁移及JAK2／STAT3 信号通路的影响

目的 探讨微小RNA-375（miR-375）调节鼻咽癌细胞侵袭、迁移的作用及对Janus激酶2／信号转导与转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路的靶向调控。方法 选取鼻咽癌CNE-1细胞并采用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-375模拟物（miR-375组）和miR-375 阴性对照（NC组）,同时设不行转染的CNE-1细胞为对照组,采用实时荧光定量 PCR（QPCR）检测转染48 h各组miR-375的表达情况;划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力变化;Western blotting检测JAK2／STAT3信号通路中JAK2、STAT3蛋白的变化情况。结果 QPCR检测显示,miR-375在miR-375组的表达量为10.74±1.21,高于NC组的1.09±0.14和对照组的1.12±0.17,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-375组的细胞迁移率为（18.22±1.78）％,低于对照组的（43.67±2.60）％和NC组的（49.70±1.31）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-375组的穿膜细胞数为（45.76±4.34）个,亦低于对照组的（144.98±3.65）个和NC组的（126.23±6.32）个,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR 375组JAK2、STAT3蛋白的表达水平分别为0.31±0.6和0.27±0.05,均低于对照组的0.54±0.05和0.41±0.06以及NC组的0.50±0.06和0.43±0.07（P＜0.05）,NC组和对照组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 上调miR-375表达可抑制CNE-1细胞的侵袭和迁移能力,可能与抑制JAK2／STAT3 信号通路的激活有关。     

MicroRNA-30a在膀胱癌中的表达及作用

目的 探究微小RNA(miRNA)在人膀胱癌细胞系中的表达及其对人膀胱癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭能力的影响。方法 应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌细胞系(5637和T24)和膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中miRNA-30a的表达水平。通过对T24细胞转染miR-30a mimic和5637细胞转染miR-30a inhibitor上调或下调miR-30a的表达,并对其分别转染NC mimic和NC inhibitor作为对照。利用流式细胞技术、MTT法和Transwell法探究miR-30a的表达对膀胱癌细胞增殖、凋亡以及侵袭能力的影响。结果 在两种膀胱癌细胞系(5637和T24)中miRNA-30a的表达显著低于正常膀胱细胞系SV-HUC-1,并且在恶性度较高的T24膀胱癌细胞中其表达水平明显低于恶性度相对较低的5637细胞系。细胞转染72h后,miR-30a mimic组T24细胞OD值(0.83±0.09)明显低于NC mimic组(1.21±0.12)(P=0.003);miR-30a inhibitor组5637细胞OD值(1.28±0.14)高于NC inhibitor组(1.09±0.14)(P=0.019)。miR-30a mimic组T24细胞凋亡率(21.27±2.42)%明显高于NC mimic组(10.61±1.29)%;miR-30a inhibitor组5637细胞凋亡率(6.78±2.57)%明显低于NC mimic组(13.42±1.40)%,差异均具有统计学意义(P=0.0002,P=0.0014)。miR-30a mimic组穿膜细胞数(183.57±16.61)低于NC mimic组(465.80±9.20)(P＜0.0001);miR-30a inhibitor组(581.25±11.02)高于NC mimic组(397.13±7.57)(P＜0.0001)。结论 miR-30a表达的上调能够抑制膀胱癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,并降低膀胱癌细胞的迁移及侵袭的能力。膀胱癌细胞中miR-30a的低表达可能与膀胱癌的发生发展及转移有关。     

磷酸肌醇4磷酸对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响

目的 了解磷酸肌醇4磷酸 （PI4P） 对人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的影响,探索PI4P在人脑胶质瘤发生过程中的作用机制。方法 包装慢病毒,构建U87-GFP （过表达PI4P细胞系对照组）、U87-GFP-PI4P （过表达PI4P细胞系实验组）、U87-Scramble （沉默PI4P细胞系对照组）、U87-shPI4P （沉默PI4P细胞系实验组） 细胞系。应用Werston blot检测各组PI4P的表达水平,应用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 免疫印迹实验检测出U87-GFP-PI4P细胞系中外源性PI4P表达,而U87-shPI4P细胞系中PI4P表达较对照组U87-Scramble细胞系减少。过表达PI4P的U87-GFP-PI4P细胞迁移能力较对照组U87-GFP细胞增强 （P < 0.01）;沉默PI4P后迁移能力较对照组减弱 （P < 0.01）。过表达PI4P的U87细胞侵袭能力强于对照组 （P < 0.05）,沉默PI4P后侵袭能力减弱 （P < 0.05）。结论 PI4P可促进脑胶质瘤细胞的侵袭迁移,为脑胶质瘤的基础研究及临床治疗提供新的靶点。     

AT模体结合因子1对结直肠癌LOVO细胞增殖侵袭的影响

目的 构建ATBF1高表达的LOVO细胞,并观察其增殖性、凋亡率、侵袭性的变化。方法 将pEGFP-ATBF1转染入LOVO细胞后,在荧光显微镜下观察其转染情况,通过RT-PCR、Western blot检测并研究转染后ATBF1、Notch3的表达情况。利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）和小室迁移实验分别研究LOVO细胞的增殖状态与侵袭能力,通过流式细胞术探索ATBF1对LOVO凋亡的影响。结果 与空白组（未处理组）、对照组（转染pEGFP质粒）对比,实验组（转染pEGFP-ATBF1质粒）LOVO细胞的增殖性、侵袭性明显受到抑制（P<0.001）,流式细胞术提示实验组LOVO细胞的凋亡率为15.9%,空白组和对照组的凋亡率仅为5.2%和4.6%,而Western blot分析结果表明实验组癌基因Notch3表达量较其他两组有所下降（P<0.05）。结论 抑癌基因ATBF1可抑制LOVO的增殖性及侵袭性,并促进其凋亡,同时可下调Notch3的表达,这意味着Notch3有可能是ATBF1的一个下游基因。     

miR-219在舌鳞状细胞癌中的表达及意义研究

目的 探讨miR-219在舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表达及其在TSCC发生发展中的作用。方法 利用qRT-PCR检测miR-219在26例TSCC组织及对应癌旁组织标本、舌磷癌细胞SCC-15及正常口腔黏膜细胞中的表达。在舌磷癌细胞SCC-15中转染miR-219基因,用MTT法、克隆形成实验、Transwell细胞迁移及侵袭实验检测miR-219过表达对舌磷癌细胞SCC-15增殖、克隆形成、迁移及侵袭的影响。结果 qRT-PCR结果显示,miR-219在TSCC组织中的表达水平明显低于对应正常癌旁组织(P＜0.001),舌磷癌细胞SCC-15中miR-219的表达水平亦低于正常口腔黏膜细胞(P＜0.05)。MTT结果表明,转染miR-219后,与对照组相比,舌磷癌细胞SCC-15的增殖受到明显抑制(P＜0.05)。克隆形成实验发现,miR-219过表达明显抑制了SCC-15细胞的克隆形成能力(P＜0.05)。同时miR-219上调也明显抑制了舌磷癌细胞SCC-15迁移及侵袭能力(P＜0.05)。结论 在TSCC中miR-219表达降低;miR-219上调可抑制舌磷癌细胞SCC-15的增殖、克隆、迁移及侵袭能力。