非整倍体与肿瘤细胞致瘤性关系的初步研究

背景与目的：非整倍体与肿瘤形成有关,本研究旨在探讨非整倍体与肿瘤细胞致瘤性的关系。方法：C3和C5细胞系是来自于同一淋巴瘤细胞系的两个亚克隆,采用CCK-8检测2个淋巴瘤细胞系C3和C5的增殖能力;应用常规染色体分析法检测这些细胞系的核型;采用软琼脂克隆形成实验检测这些细胞系的体外致瘤能力;采用Transwell小室检测这些细胞系的侵袭转移能力;通过小鼠体内成瘤实验检测这些细胞系的体内致瘤能力。结果：两个细胞系中C3增殖能力强于C5,差异有统计学意义。核型分析结果表明,这两个细胞系都是非整倍体核型,细胞系C3的众数范围是38~78,C5的众数范围是28~50,C3细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为20.33%、8.47%和71.2%,C5细胞系中亚二倍体、二倍体和超二倍体所占比例分别为11.11%、86.42%和2.47%。C3和C5细胞系的非整倍体细胞比例分别为95.73%和13.58%。C3细胞系可以在软琼脂中形成克隆,而C5细胞系未能形成克隆。在体外,C3细胞系的侵袭转移能力强于C5细胞系。体内致瘤实验结果表明,C3细胞系恶性程度较高,体内致瘤能力明显强于C5细胞系,C3细胞系在体内的转移灶较多,在肝脏和肾脏均有转移灶点,而C5细胞系只在肾脏出现转移灶点。结论：非整倍体与肿瘤细胞致瘤性之间存在相关性,非整倍体对细胞的恶性转化及肿瘤发生具有重要贡献。     

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。     

微小RNA-375对鼻咽癌细胞侵袭迁移及JAK2／STAT3 信号通路的影响

目的 探讨微小RNA-375（miR-375）调节鼻咽癌细胞侵袭、迁移的作用及对Janus激酶2／信号转导与转录激活子3（JAK2／STAT3）信号通路的靶向调控。方法 选取鼻咽癌CNE-1细胞并采用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-375模拟物（miR-375组）和miR-375 阴性对照（NC组）,同时设不行转染的CNE-1细胞为对照组,采用实时荧光定量 PCR（QPCR）检测转染48 h各组miR-375的表达情况;划痕实验和Transwell 小室实验分别检测各组细胞的迁移能力和侵袭能力变化;Western blotting检测JAK2／STAT3信号通路中JAK2、STAT3蛋白的变化情况。结果 QPCR检测显示,miR-375在miR-375组的表达量为10.74±1.21,高于NC组的1.09±0.14和对照组的1.12±0.17,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR-375组的细胞迁移率为（18.22±1.78）％,低于对照组的（43.67±2.60）％和NC组的（49.70±1.31）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-375组的穿膜细胞数为（45.76±4.34）个,亦低于对照组的（144.98±3.65）个和NC组的（126.23±6.32）个,差异均有统计学意义（P＜0.05）;miR 375组JAK2、STAT3蛋白的表达水平分别为0.31±0.6和0.27±0.05,均低于对照组的0.54±0.05和0.41±0.06以及NC组的0.50±0.06和0.43±0.07（P＜0.05）,NC组和对照组以上指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 上调miR-375表达可抑制CNE-1细胞的侵袭和迁移能力,可能与抑制JAK2／STAT3 信号通路的激活有关。     

MicroRNA-30a在膀胱癌中的表达及作用

目的 探究微小RNA(miRNA)在人膀胱癌细胞系中的表达及其对人膀胱癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭能力的影响。方法 应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测膀胱癌细胞系(5637和T24)和膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中miRNA-30a的表达水平。通过对T24细胞转染miR-30a mimic和5637细胞转染miR-30a inhibitor上调或下调miR-30a的表达,并对其分别转染NC mimic和NC inhibitor作为对照。利用流式细胞技术、MTT法和Transwell法探究miR-30a的表达对膀胱癌细胞增殖、凋亡以及侵袭能力的影响。结果 在两种膀胱癌细胞系(5637和T24)中miRNA-30a的表达显著低于正常膀胱细胞系SV-HUC-1,并且在恶性度较高的T24膀胱癌细胞中其表达水平明显低于恶性度相对较低的5637细胞系。细胞转染72h后,miR-30a mimic组T24细胞OD值(0.83±0.09)明显低于NC mimic组(1.21±0.12)(P=0.003);miR-30a inhibitor组5637细胞OD值(1.28±0.14)高于NC inhibitor组(1.09±0.14)(P=0.019)。miR-30a mimic组T24细胞凋亡率(21.27±2.42)%明显高于NC mimic组(10.61±1.29)%;miR-30a inhibitor组5637细胞凋亡率(6.78±2.57)%明显低于NC mimic组(13.42±1.40)%,差异均具有统计学意义(P=0.0002,P=0.0014)。miR-30a mimic组穿膜细胞数(183.57±16.61)低于NC mimic组(465.80±9.20)(P＜0.0001);miR-30a inhibitor组(581.25±11.02)高于NC mimic组(397.13±7.57)(P＜0.0001)。结论 miR-30a表达的上调能够抑制膀胱癌细胞的增殖,促进细胞的凋亡,并降低膀胱癌细胞的迁移及侵袭的能力。膀胱癌细胞中miR-30a的低表达可能与膀胱癌的发生发展及转移有关。     

磷酸肌醇4磷酸对人脑胶质瘤U87细胞侵袭迁移的影响

目的 了解磷酸肌醇4磷酸 （PI4P） 对人脑胶质瘤细胞侵袭迁移的影响,探索PI4P在人脑胶质瘤发生过程中的作用机制。方法 包装慢病毒,构建U87-GFP （过表达PI4P细胞系对照组）、U87-GFP-PI4P （过表达PI4P细胞系实验组）、U87-Scramble （沉默PI4P细胞系对照组）、U87-shPI4P （沉默PI4P细胞系实验组） 细胞系。应用Werston blot检测各组PI4P的表达水平,应用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 免疫印迹实验检测出U87-GFP-PI4P细胞系中外源性PI4P表达,而U87-shPI4P细胞系中PI4P表达较对照组U87-Scramble细胞系减少。过表达PI4P的U87-GFP-PI4P细胞迁移能力较对照组U87-GFP细胞增强 （P < 0.01）;沉默PI4P后迁移能力较对照组减弱 （P < 0.01）。过表达PI4P的U87细胞侵袭能力强于对照组 （P < 0.05）,沉默PI4P后侵袭能力减弱 （P < 0.05）。结论 PI4P可促进脑胶质瘤细胞的侵袭迁移,为脑胶质瘤的基础研究及临床治疗提供新的靶点。     

AT模体结合因子1对结直肠癌LOVO细胞增殖侵袭的影响

目的 构建ATBF1高表达的LOVO细胞,并观察其增殖性、凋亡率、侵袭性的变化。方法 将pEGFP-ATBF1转染入LOVO细胞后,在荧光显微镜下观察其转染情况,通过RT-PCR、Western blot检测并研究转染后ATBF1、Notch3的表达情况。利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）和小室迁移实验分别研究LOVO细胞的增殖状态与侵袭能力,通过流式细胞术探索ATBF1对LOVO凋亡的影响。结果 与空白组（未处理组）、对照组（转染pEGFP质粒）对比,实验组（转染pEGFP-ATBF1质粒）LOVO细胞的增殖性、侵袭性明显受到抑制（P<0.001）,流式细胞术提示实验组LOVO细胞的凋亡率为15.9%,空白组和对照组的凋亡率仅为5.2%和4.6%,而Western blot分析结果表明实验组癌基因Notch3表达量较其他两组有所下降（P<0.05）。结论 抑癌基因ATBF1可抑制LOVO的增殖性及侵袭性,并促进其凋亡,同时可下调Notch3的表达,这意味着Notch3有可能是ATBF1的一个下游基因。     

miR-219在舌鳞状细胞癌中的表达及意义研究

目的 探讨miR-219在舌鳞状细胞癌(Tongue squamous cell carcinoma,TSCC)中的表达及其在TSCC发生发展中的作用。方法 利用qRT-PCR检测miR-219在26例TSCC组织及对应癌旁组织标本、舌磷癌细胞SCC-15及正常口腔黏膜细胞中的表达。在舌磷癌细胞SCC-15中转染miR-219基因,用MTT法、克隆形成实验、Transwell细胞迁移及侵袭实验检测miR-219过表达对舌磷癌细胞SCC-15增殖、克隆形成、迁移及侵袭的影响。结果 qRT-PCR结果显示,miR-219在TSCC组织中的表达水平明显低于对应正常癌旁组织(P＜0.001),舌磷癌细胞SCC-15中miR-219的表达水平亦低于正常口腔黏膜细胞(P＜0.05)。MTT结果表明,转染miR-219后,与对照组相比,舌磷癌细胞SCC-15的增殖受到明显抑制(P＜0.05)。克隆形成实验发现,miR-219过表达明显抑制了SCC-15细胞的克隆形成能力(P＜0.05)。同时miR-219上调也明显抑制了舌磷癌细胞SCC-15迁移及侵袭能力(P＜0.05)。结论 在TSCC中miR-219表达降低;miR-219上调可抑制舌磷癌细胞SCC-15的增殖、克隆、迁移及侵袭能力。     

转移相关基因-2调控肿瘤侵袭转移的研究

转移相关基因-2（MTA2）是转移相关基因家族成员之一,其蛋白质序列及功能结构域编码序列与MTA1具有高度同源性。MTA2参与构成核小体重构及组蛋白去乙酰化酶（NuRD）复合物,并可与多种转录因子相互作用,参与基因转录调控。MTA2在多种恶性肿瘤中异常表达,并与肿瘤恶性生物学行为密切相关,提示MTA2在肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用。本文将对MTA2在肿瘤中的表达情况、生物学功能以及在肿瘤侵袭、转移中的相关分子机制等进行综述。     

抑制Notch和PI3K/Akt信号通路对食管腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨Notch和PI3K/Akt两条信号通路对人食管腺癌细胞OE33增殖、侵袭及迁移能力的影响及两条信号通路之间的联系。方法 应用Notch信号通路阻滞剂DAPT和PI3K/Akt信号通路阻滞剂LY294002分别单独和联合处理OE33细胞,设置对照组;Western blot和实时定量PCR法检测OE33细胞中NICD、Hes1、p-Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达变化;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;划痕实验用于检测细胞迁移能力的变化;Transwell细胞侵袭实验用于检测细胞的侵袭能力变化。结果 Notch1通路阻滞剂DAPT能减低Notch1通路相关蛋白NICD和Hes1的表达,并能提高p-Akt蛋白的表达;PI3K/Akt路阻滞剂LY294002不仅使p-Akt的蛋白表达水平减低,还能降低Hes1的蛋白表达水平,同时使NICD的蛋白和Hes1的mRNA表达水平增高。DAPT和LY294002联合处理组的NICD、Hes1、p-Akt的蛋白表达均较空白对照组和单药处理组降低,同时细胞的增殖、迁移和转移能力亦明显减弱。各处理组中PTEN的蛋白和mRNA表达水平较对照组均有一定程度的升高。结论 Notch和PI3K/Akt两条信号通路在食管腺癌细胞OE33中可能存在串话, 同时抑制这两种信号通路能有效的抑制OE33的增殖、侵袭及迁移。     

Rap2a对肺癌细胞侵袭能力的影响及其机制

目的 检测小G蛋白家族成员Rap2a对人肺癌细胞迁移侵袭的影响及机制探讨。方法 构建pcDNA3.1-Rap2a质粒,转染入A549和H1299细胞,运用划痕和Transwell小室实验观察Rap2a对肺癌细胞侵袭能力的影响。CCK-8和流式细胞术检测Rap2a对细胞增殖和凋亡的影响,Western blot检测Bcl-2、Bax、ERK和Akt等的蛋白表达水平。结果 与空质粒组相比,转染Rap2a质粒的肺癌细胞侵袭能力明显增加,但细胞的增殖和凋亡能力无明显变化, Bcl-2和Bax的蛋白水平也无明显变化。Western blot结果显示,Rap2a过表达后p-Akt473的表达水平增加。结论 人Rap2a促进肺癌细胞的迁移侵袭可能与Rap2a影响Akt磷酸化水平有关。