Quantitative analysis of SMN1 gene and estimation of SMN1 deletion carrier frequency in Korean population based on real-time PCR

Spinal muscular atrophy (SMA) is an autosomal recessive disorder, caused by homozygous absence of the survival motor neuron gene (SMN1) in approximately 94% of patients. Since most carriers have only one SMN1 gene copy, several SMN1 quantitative analyses have been used for the SMA carrier detection. We developed a reliable quantitative real-time PCR with SYBR Green I dye and studied 13 patients with SMA and their 24 parents, as well as 326 healthy normal individuals. The copy number of the SMN1 gene was determined by the comparative threshold cycle (Ct) method and albumin was used as a reference gene. The homozygous SMN1 deletion ratio of patients was 0.00 and the hemizygous SMN1 deletion ratio of parents ranged from 0.39 to 0.59. The deltadelta Ct ratios of 7 persons among 326 normal individuals were within the carrier range, 0.41-0.57. According to these data, we estimated the carrier and disease prevalence of SMA at 1/47 and 1/8,496 in Korean population, respectively. These data indicated that there would be no much difference in disease prevalence of SMA compared with western countries. Since the prevalence of SMA is higher than other autosomal recessive disorders, the carrier detection method using real-time PCR could be a useful tool for genetic counseling.     

FV Leiden突变检测方法的建立及在哈萨克族人群中的初步应用

目的：建立FV Leiden突变的检测方法,研究分析中国新疆哈萨克族健康人群中FV Leiden突变的发生率。方法：应用多聚酶链反应－限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）,对新疆地区183例（汉族98例;哈萨克族85例）健康个体进行FV Leiden基因突变研究分析。结果：哈萨克族人群中检出3例FV Leiden（FV Arg^506→Gln）突变杂合子;汉族人群中均无该突变类型,没有发现突变纯合子。哈萨克族人群FV Leiden突变的发生率为3．5％,和汉族人群存在明显差异。结论：中国新疆地区哈萨克族人群中存在FV Leiden基因突变,而受检测组汉族人群中未见到该类型突变,FV Leiden突变可能不是新疆地区汉族人群静脉血栓（VT）发病的主要危险因素。不同种群人群的静脉血栓致病分子机制存在差异。     

鼻咽癌染色体3p14的精细等位基因缺失分析

目的：进一步明确鼻咽癌染色体3p14区区域等位基因杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH)的频率与共同缺失区规范,以便分离该区域内与鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：选择位于3p14的6个高密度微卫星多态标记,对32例鼻咽癌组织进行LOH分析。结果：71．88％（23／31）的鼻咽癌在至少1个位点发生LOH,丢失频率较高的3个位点是D3S1313（46．43％）、D3S1300（50．0％）和D3S1312（44．44％）,在存在丢失的23例患者中,8例表现为一个连续的非随机的LOH区域,其最小共同缺失区为D3S1313－D3S1312（约3．4个厘摩）。且该区域的缺失与鼻咽癌临床分期、EB病毒感染有明显关系。结论：鼻咽癌在3p14的最小共同缺失区位于D3S1313－D3S1312之间,该区域可能存在一个尚克隆的与鼻咽癌发生发展密切相关的抑瘤基因。     

利用右美沙芬区分细胞色素P4502D6纯合子与杂合子快代谢者

本研究目的是建立准确的细胞色素P450 2D6(CYP2D6)的右美沙芬表型测定法,以发现CYP2D6纯合子与杂合子快代谢者的表型差异。通过提高右美沙芬的检测灵敏度(1ng·mL^-1)而建立的HPLC分析法,对已知基因型的3组共168位受试者进行表型测定。结果发现不仅快代谢者与慢代谢者在代谢率上有很大差异,纯合子快代谢者与杂合子快代谢者之间在代谢率上也有差异。提示CYP2D6基因表达时,基因拷贝数起一定的作用。     

一个三组妹同患P450c17α缺陷家系的分子遗传学研究

研究１个三组妹同患Ｐ４５０ｃ１７α缺陷家系的分子遗传学机制。方法采用聚合酶链反应－单链构象多态性,限制性内切酶酶切及自动测序等方法检测患者家系中ＣＹＰ１７基因的突变情况。结论１个三组妹同时患病的中国人Ｐ４５０ｃ１７α缺陷的家系是由于ＣＹＰ１７基因的复合杂合突变所致。     

SASH1基因新杂合错义突变与遗传性泛发性色素异常症一家系相关

目的 探讨一家系遗传性泛发性色素异常症的临床特征和分子遗传学发病基础.方法 对该家系进行详细的遗传学调查、体检,并对先证者进行反射式共聚焦显微镜检查和组织病理学检查.采集8例家系成员(其中患者5例,正常个体3例)和200例家系外无亲缘关系的健康对照的血样,提取基因组DNA,PCR扩增SASH1和ABCB6基因的全部外显子及其侧翼序列,并进行DNA直接测序.结果 该家系符合常染色体显性遗传模式.家系中9例患者均在出生后1年内发病,皮损最初累及面部,后逐渐泛发于全身.健在的8例患者中,7例皮损表现为不规则淡褐色至深褐色色素沉着斑,其余皮肤呈均匀的色素减退.仅先证者大姐皮损表现为泛发性网状色素沉着斑和色素减退斑.患者的口腔黏膜、指(趾)甲、牙齿和一般健康状况均正常.DNA测序显示,5例患者SASH1基因第15号外显子上均出现1个杂合错义突变(c.1761C＞G,p.Ser587Arg),而家系中3例正常个体及家系外200例健康对照均未检测到此突变.此外,均未发现ABCB6基因突变.结论 遗传性泛发性色素异常症的临床特征和分子遗传学发病基础存在异质性.SASH1基因的p.S587R突变可能是该家系患者发病的原因.     

Methamphetamine-induced locomotor activity and sensitization in dopamine transporter and vesicular monoamine transporter 2 double mutant mice

Rationale The dopamine transporter (DAT) and the vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) play pivotal roles in the action of methamphetamine (MAP), including acute locomotor effects and behavioral sensitization. However, the relative impact of heterozygous DAT and VMAT2 knockouts (KOs) on the behavioral effects of MAP remains unknown. Objectives To evaluate the roles of DAT and VMAT2 in MAP-induced locomotor behavior, we examined locomotor activity and sensitization in heterozygous DAT KO (DAT+/−), heterozygous VMAT2 KO (VMAT2+/−), double heterozygous DAT/VMAT2 KO (DAT+/−VMAT2+/−), and wild-type (WT) mice. Results Acute 1 mg/kg MAP injection induced significant locomotor increases in WT and VMAT2+/− mice but not in DAT+/− and DAT+/−VMAT2+/− mice. Acute 2 mg/kg MAP significantly increased locomotor activity in all genotypes. Repeated 1 mg/kg MAP injections revealed a delayed and attenuated development of sensitization in DAT+/− and DAT+/−VMAT2+/− mice compared to WT mice and delayed development in VMAT2+/− mice. In repeated 2 mg/kg MAP injections, DAT+/− and DAT+/−VMAT2+/− mice showed delayed but not attenuated development of sensitization, while there was no difference in the onset of sensitization between VMAT2+/− and WT mice. In DAT+/−VMAT2+/− mice, all of MAP-induced behavioral responses were similar to those in DAT+/− but not VMAT2+/− mice. Conclusions Heterozygous deletion of DAT attenuates the locomotor effects of MAP and may play larger role in behavioral responses to MAP compared to heterozygous deletion of VMAT2.     

喉鳞癌组织中RB1.20座位杂合性丢失和p110RB1蛋白表达的检测

目的探讨喉鳞状细胞癌组织中ＲＢ１基因在喉癌发生发展中的意义，为发现和定位新的抑癌基因提供线索和依据。方法应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ），选择１３号染色体上ＲＢ１．２０座位的微卫星多态标记，对５８例喉鳞状细胞癌组织进行杂合性丢失（ｌｏｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）分析和ｐ１１０ＲＢ１蛋白表达的检测。结果３例原位癌中均无ＲＢ１．２０座位杂合性丢失，５５例浸润癌中４５例可提供信息，杂合性丢失的频率为４０％（１８／４５），４１例中仅有８例ＲＢ蛋白表达缺失，其中６例伴有ＲＢ１．２０座位的杂合性丢失。结论ＲＢ１基因在部分喉癌中发生失活；在ＲＢ１．２０座位附近可能还存在与喉癌发生发展密切相关的抑癌基因。     

遗传性Avellino角膜营养不良一家系转化生长因子β诱导基因的突变研究

背景研究发现角膜营养不良与位于染色体5q31区域转化生长因子β诱导基因（TGFBI）的突变有关,目前发现Avellino角膜营养不良的TGFBI基因突变位点为R124H。目的检测中国遗传性Avellino角膜营养不良一家系的致病基因并进行分子遗传学分析,探讨其TGFBI的基因突变类型。方法本家系先证者在北京大学第三医院确诊,共调查连续4代27名成员,收集遗传性Avellino角膜营养不良患者8例和表型正常成员2名的外周血3ml提取DNA,合成TGFBI第4、11、12外显子的特异性引物,采用聚合酶链反应（PCR）进行扩增,对PCR产物直接进行DNA测序分析并与正常GenBank中的TGFBI基因序列比对。结果该家系中Avellino角膜营养不良的遗传模式符合常染色体显性遗传,8例患者的TGFBI基因第4外显子均显示CGC〉CAC（R124H）突变杂合子,家系中的2名表型正常成员无此基因位点突变。8名家系成员存在第11外显子的472密码子CTC〉CTT的杂合性同义单核苷酸多态性（SNP）,9名家系成员存在第12外显子的540密码子TTT〉TTC的杂合性同义SNP,且SNP与疾病表现型无关。结论该Avellino角膜营养不良家系存在TGFBI基因突变,为R124H杂合突变类型。     

乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定

目的 构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体,为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础.方法 (1)构建了两个乙脑病毒复制子:一个为完全缺失PrM/E基因(命名为Full △prM/E Replicon);一个保留E基因C端213 bp(命名为Partial △prM/E Replicon),并代之以多克隆位点.(2)将复制子RNA转染BHK-21细胞,于24、48、72、96 h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力.(3)于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因,并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞,采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达.结果 (1)两个复制子RNA转染BHK-21细胞后,RNA有随时间增加而不断增多的趋势.(2)含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后,荧光信号持续增强,表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多.结论 构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM/E Replicon及Partial △prM/E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力.