肝癌组织乙酰肝素酶的表达及其与微血管密度的关系

目的观察乙酰肝素酶（Hpa）在肝癌组织中的表达,并探讨其与微血管密度（MVD）的关系。方法采用RT-PCR法检测47例原发性肝癌组织、癌旁组织1（A组）和癌旁组织2（B组）Hpa mRNA水平;采用免疫组织化学法检测肝癌组织Hpa蛋白和CD34表达水平,并分析Hpa蛋白与肝癌临床病理特征的关系,以及Hpa mRNA水平与MVD值的相关性。结果在不同直径和分化程度、不同临床分期、是否转移复发、AFP水平和有无门脉癌栓等肿瘤组织,Hpa蛋白表达存在明显的差异（P<0.05）;肝癌组织Hpa mRNA水平（0.793±0.184）和MVD值（34.5±12.2）均明显高于A组和B组（P<0.05）,而A组Hpa mRNA水平（0.577±0.145）和MVD值（22.2±10.7）又明显高于B组[（0.384±0.117）和（14.7±7.4）,P<0.05];各组Hpa mRNA水平与MVD值呈正相关（r=0.627,P<0.05）。结论Hpa在肝癌的生长、侵袭和血管生成中发挥着重要作用。     

非小细胞肺癌中肝素酶基因与血管内皮生长因子表达的研究

目的　探讨肝素酶基因及血管内皮生长因子 (VEGF)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其临床病理学意义。方法　选取 85例肺部手术标本 ,所有标本分成两份 ,1份用于逆转录PCR检测肝素酶mRNA ,1份用于免疫组化检测VEGF。结果　 (1)肝素酶mRNA及VEGF在NSCLC中表达率均高于良性病变肺组织 (P <0 0 5 )。 (2 )肝素酶mRNA表达率在淋巴结转移组、远处转移组、Ⅲ期 +Ⅳ期组、低分化组、腺癌组、肿瘤最大径≥ 5cm组分别高于无淋巴结转移组、无远处转移组、Ⅰ期 +Ⅱ期组、高中分化组、鳞癌组、最大径 <5cm组 (P <0 0 5 )。 (3)VEGF表达率在淋巴结转移组、远处转移组、Ⅲ期 +Ⅳ期组分别高于无淋巴结转移组、无远处转移组、Ⅰ期 +Ⅱ期组 (P <0 0 5 )。 (4 )NSCLC中肝素酶mRNA与VEGF表达无相关性 (P >0 0 5 )。结论　肝素酶与VEGF参与了NSCLC的侵袭转移过程 ,可作为判断NSCLC转移潜力指标 ;肝素酶与VEGF通过互不依赖的机制促进NSCLC的侵袭与转移 ,二者联合检测将有利于提高判断NSCLC转移潜力的敏感性及特异性。     

胃癌细胞SGC-7901中乙酰肝素酶基因和CD44v6表达的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡核苷酸(AS-ODN)对CD44v6表达的影响。方法:采用脂质体介导HPAAS-ODN转染人胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测HPAmRNA的表达,采用免疫细胞化学SABC法观察细胞内CD44v6表达的变化。结果:脂质体介导转染HPAAS-ODN48h后MSGC-7901胃癌细胞内HPAmRNA表达下降MCD44v6阳性表达率转染前69.4%M转染不同浓度的AS-ODN后分别为56.5%,54.1%,46.5%和41.3%。转染后细胞CD44v6表达明显减少(P<0.01)。结论:HPAAS-ODN可以有效抑制胃癌细胞CD44v6的表达。     

肾细胞癌血管增生与肝素酶、环氧化酶-2的关系

目的 观察肾细胞癌(RCC)中肿瘤细胞生长、转移及肿瘤血管增生与环氧化酶2(Cox-2)、乙酰肝素酶(Hpa)的关系。方法 采用免疫组化链霉亲和素-生物素-酶复合物法(SABC)法检测60例RCC组织标本和30例癌旁肾组织标本中的Cox-2、Hpa、CD34表达,分析COX-2、Hpa表达和肿瘤血管增生的关系,及微血管密度(MVD)与RCC组织学分级、临床分期和预后的相关性。结果 60例RCC组织标本中,Cox-2阳性率为71.7%,Hpa阳性率为63.3%,与癌旁肾组织比较差异有统计学意义(χ2＝24.308,χ2=20.089,P均<0.05);Cox-2表达与RCC肿块大小差异有统计学意义(χ2=4.34,P<0.05);Hpa表达与肿块大小无统计学意义,但与患者淋巴结转移有密切的相关性(χ2＝12.72,P＜0.05);Cox-2、Hpa 阳性和阴性表达组织中MVD值分别是125.74±35.68和138.56±40.74、70.87±23.64和80.88±21.52,差异有统计学意义(P均<0.05);MVD与RCC组织学分级、临床分期和预后密切相关(P<0.05)。结论 Cox-2高表达与肿块大小有相关性; Cox-2和Hpa可促进血管增生;MVD与患者预后密切相关。     

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。     

正、反义Heparanase基因荧光真核表达载体的构建及胰腺癌SW1990细胞转染

目的构建正、反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并转染人胰腺癌SW 1990细胞.方法用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认.用脂质体法将肝素酶正、反义真核表达载体转染人胰腺癌SW 1990细胞,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果.结果经BamH I酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值一致;测序结果进一步确认了方向的正确性.转染成功的胰腺癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.结论成功构建了人肝素酶正、反义真核表达载体,并成功转染人胰腺癌细胞株SW 1990,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对胰腺癌细胞的转移能力的影响奠定基础.     

乙酰肝素酶在子痫前期孕妇胎盘中的表达研究

目的探讨乙酰肝素酶在子痫前期孕妇胎盘中的表达及其与病情轻重的关系。方法选取患者共43例,分为正常对照组13例,子痫前期轻度组15例,子痫前期重度组15例,采用Western-blot检测孕妇新鲜胎盘组织中乙酰肝素酶的表达情况。结果在3组标本中均有Hpa蛋白表达,子痫前期轻度及重度组明显高于正常对照组（P〈0.001）,且子痫前期重度组与轻度组比较差异有统计学意义（P〈0.001）。结论子痫前期孕妇胎盘中Hpa的含量明显高于正常对照组,且随病情加重而愈加显著。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胰腺癌细胞侵袭力的抑制作用

目的探讨HPSE AS-ODN对人胰腺癌细胞HPSE基因、蛋白表达及体内、外侵袭力的抑制作用。方法用脂质体将HPSE AS-ODN转染Panc-1细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western印迹法分别检测转染后HPSE mRNA和蛋白表达;Transwell法检测体外侵袭力。建立裸鼠皮下Panc-1肿瘤模型,按10 mg／kg体重瘤体内注射AS-ODN隔日1次×10。治疗结束后断颈处死裸鼠,剥瘤称重,计算抑瘤率。结果 AS-ODN组mRNA和蛋白表达受到明显抑制,体外侵袭细胞数(个／视野)为60．00±9．31,体内平均瘤重(g)为1．860±0．505;对照组和NS-ODN组体外侵袭细胞数分别为253．00±9.35和240．75±9．36,体内平均瘤重分别为2．948±0．483和2．768± 0．615。AS-ODN组与对照组相比差异有统计学意义(P<0．01)。结论 AS-ODN抑制人胰腺癌细胞 HPSE mRNA和蛋白的表达,并降低癌细胞的侵袭力。     

Syndecan-1和乙酰肝素酶mRNA表达与胃癌转移和预后的关系

目的探讨syndecan-1和乙酰肝素酶（heparanase）mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌转移和预后的关系。方法采用原位杂交方法,检测118例胃癌组织中syndecan-1和乙酰肝素酶mRNA的表达水平。结果118例胃癌组织中syndecan-1mRNA及乙酰肝素酶mRNA的阳性率分别为42．4％和55．9％;syndecan-1 mRNA及乙酰肝素酶mRNA阳性表达率与肿瘤浸润深度（X^2=32．95,P=0．001;X^2=23．19,P=0．001）、脉管侵犯（X^2=46．22,P=0．001;X^2=33．78,P=0．001）、淋巴结转移（X^2=28．62,P=0．001;X^2=25．43,P=0．001）和远处转移（X^2=63．30,P=0．001;X^2=65．76,P=0．001）密切相关;而syndecan-1 mRNA的表达还与肿瘤大小有相关性（X^2=6．25,P=0．012）。Syndecan-1 mRNA表达水平与乙酰肝素酶mRNA表达呈负相关（r=-0．844,P=0．001）;Syndecan-1 mRNA低表达病例平均生存时间和5年生存率低于高表达组,乙酰肝素酶mRNA阳性表达病例的平均生存时间和5年生存率均明显低于阴性表达的病例。结论Syndecan-1 mRNA低表达和乙酰肝素酶mRNA高表达参与胃癌的浸润和转移过程,是指导临床治疗及估计预后的有意义指标。