模拟肽Gap27抑制缝隙连接蛋白43在帕金森病小鼠模型中的作用

目的探索在6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型中，应用缝隙连接蛋白43(connexin 43，Cx43)选择性抑制剂模拟肽Gap27能否改善多巴胺神经元死亡以及对Cx43表达的影响。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、6-OHDA组与6-OHDA+Gap27组，每组6只，进行双侧黑质脑立体定位注射。对照组注射抗坏血酸盐溶液，6-OHDA组注射6-OHDA溶液，6-OHDA+Gap27组注射6-OHDA和Gap27混合溶液，用免疫组织化学法对多巴胺神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)染色检测多巴胺神经元数量，实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测Cx43信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid，mRNA)表达，免疫荧光染色检测Cx43蛋白分布，Western blot法检测小鼠中脑Cx43蛋白及Cx43的第368位点丝氨酸磷酸化(Cx43 phosphorylation at serine 368，Cx43-ps368)蛋白含量。结果注射6-OHDA后，小鼠出现黑质多巴胺神经元大量死亡，6-OHDA组TH阳性神经元数量降为对照组的27.7%±0.02%(P < 0.01)，模拟肽Gap27的使用减少了多巴胺神经元死亡数量，6-OHDA+Gap27组TH阳性神经元数量为6-OHDA组的(1.64±0.16)倍(P < 0.05)；此外，6-OHDA引起Cx43蛋白含量增加，Cx43-ps368蛋白含量降低。Gap27减弱了6-OHDA引起的Cx43蛋白与Cx43-ps368蛋白含量变化，6-OHDA组中脑总Cx43蛋白含量为6-OHDA+Gap27组的(1.44±0.07)倍(P < 0.05)，为对照组的(1.68±0.07)倍(P < 0.01)，且6-OHDA组Cx43-ps368蛋白含量及占总Cx43蛋白比例显著低于6-OHDA+Gap27组(P＜0.05)。结论模拟肽Gap27在6-OHDA诱导的小鼠模型中可减少黑质多巴胺神经元死亡从而发挥神经保护作用，6-OHDA引起的Cx43蛋白过表达对多巴胺神经元可能存在神经毒性，而降低Cx43蛋白水平及维持Cx43-ps368蛋白水平可能是Gap27发挥保护作用的机制。     

CTLA-4(AT)n多态性与过敏性紫癜的相关性研究

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4) (AT)n多态性与儿童过敏性紫癜的相关性.方法 选取2014年1月至2015年12月在西安交通大学第一附属医院住院诊断为过敏性紫癜的患儿60例为病例组,另选取健康普查的30例健康儿童作为对照组.采用ABI3130xl测序仪进行毛细管电泳对第4外显子3'端的AT重复序列进行基因分型.分析微卫星的等位基因频率在各组间的分布.结果 ①微卫星(AT)n在病例组和对照组共检出等位基因19种,AT重复次数5～ 34不等,当AT重复次数为16时,等位基因频率在病例组与对照组间差异有统计学意义(P =0.034,OR=2.115,95％ CI:1.049 ～4.267);②微卫星(AT)n按有无肾脏损害分层:各等位基因频率在有肾脏损害的过敏性紫癜(HSPN)组与无肾脏损害的过敏性紫癜(NHSPN)组差异均无统计学意义(均P＞0.05);③微卫星(AT)n按性别分层:当AT重复次数为15时,等位基因频率在男女两组间差异有统计学意义(P=0.014,OR=0.210,95％ CI:0.055～0.805).结论 CTLA-4 (AT)n基因多态性与过敏性紫癜(HSP)发病相关,AT基因重复次数为16时可能为HSP发病的易感基因,重复次数为15时可能为女性HSP患儿发病的易感基因.     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met），另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药，褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃，二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃，糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况；Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG，5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化；qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化；Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平；DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大，同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达，抑制Keap1蛋白表达（P < 0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加，降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P < 0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核，上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P < 0.05）来增强细胞抗氧化能力，降低细胞内活性氧的水平。结论褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用，同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达，降低活性氧水平。     

鼠青光眼模型中热休克蛋白27的表达及其作用

目的:探讨热休克蛋白27(HSP27)在鼠青光眼模型视网膜神经节细胞(RGCs)中的表达以及眼压对抗HSP27自身抗体的影响。方法:使用SPSS12.0软件将55只Wistar大鼠随机分为高眼压组(25只鼠)、sham对照(假手术)组(25只鼠)及正常对照组(5只鼠)。采用电凝鼠巩膜表面至少3组静脉及角膜缘周围血管,建立鼠青光眼模型。采用免疫组化和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测术后1,2,3,4及8wk视网膜中RGCs以及神经纤维层(RNFL)HSP27的表达、分布以及血清中抗HSP27抗体水平。结果:随着眼压升高及高眼压持续时间延长,高眼压组右眼RGCs中HSP27表达逐渐增强,与其左眼、sham对照组右、左眼和正常对照组右、左眼比较,差异均有统计学意义(P<0.001),且RNFL中也出现HSP27的表达。高眼压组血清中抗HSP27抗体水平在术后1wk轻度升高(P>0.05),随着眼压升高及高眼压持续至术后8wk,血清中HSP27抗体水平逐渐升高并稳定于较高水平,与sham对照组和正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:内源性HSP27表达增强可能在青光眼视神经病变中具有重要作用。     

沙漠热环境负重行军对淋巴细胞HSP70的影响

目的：探讨沙漠热环境负重行军血淋巴细胞HSP70的变化规律。方法：对沙漠干热环境中以不同速度和时间负重行军的54名战士和14名对照血淋巴细胞HSP70进行对比分析。结果：相同行军时间的不同行军速度间淋巴细胞HSP70有显性差异（P＜0．05）；3．5km/h行军3h组淋巴细胞HSP70明显高于对照和行军2h组（P＜0．05）：5．0km/h行军1．2h组血淋巴细胞HSP70明显高于对照和行军3h组（P＜0．05）。结论：随行军速度和时间的增加，淋巴细胞HSP70增高；当行军速度和时间达到一定水平后，机体淋巴细胞HSP70明显增加。血淋巴细胞HSP70作为热损伤和热耐受的监测指标较血浆HSP70敏感。     

Histone deacetylase inhibitors inhibit cervical cancer growth through Parkin acetylation-mediated mitophagy

Parkin, an E3 ubiquitin ligase, plays a role in maintaining mitochondrial homeostasis through targeting damaged mitochondria for mitophagy. Accumulating evidence suggests that the acetylation modification of the key mitophagy machinery influences mitophagy level, but the underlying mechanism is poorly understood. Here, our study demonstrated that inhibition of histone deacetylase (HDAC) by treatment of HDACis activates mitophagy through mediating Parkin acetylation, leading to inhibition of cervical cancer cell proliferation. Bioinformatics analysis shows that Parkin expression is inversely correlated with HDAC2 expression in human cervical cancer, indicating the low acetylation level of Parkin. Using mass spectrometry, Parkin is identified to interact with two upstream molecules, acetylase acetyl-CoA acetyltransferase 1 (ACAT1) and deacetylase HDAC2. Under treatment of suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA), Parkin is acetylated at lysine residues 129, 220 and 349, located in different domains of Parkin protein. In in vitro experiments, combined mutation of Parkin largely attenuate the interaction of Parkin with PTEN induced putative kinase 1 (PINK1) and the function of Parkin in mitophagy induction and tumor suppression. In tumor xenografts, the expression of mutant Parkin impairs the tumor suppressive effect of Parkin and decreases the anticancer activity of SAHA. Our results reveal an acetylation-dependent regulatory mechanism governing Parkin in mitophagy and cervical carcinogenesis, which offers a new mitophagy modulation strategy for cancer therapy.     

血浆IL-6与IL-27在鉴别早产儿急性呼吸窘迫综合征与呼吸窘迫综合征的初步研究

目的探讨血浆白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-27在鉴别早产儿急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）及新生儿呼吸窘迫综合征（neonatal respiratory distress syndrome，NRDS）中的价值。方法前瞻性纳入2021年3~11月重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊治中心具有呼吸窘迫表现的早产儿，根据诊断结果分为ARDS组（n=18）及NRDS组（n=20）。采用酶联免疫吸附试验法检测患儿血浆IL-6和IL-27水平，受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析各指标诊断ARDS的价值。结果ARDS组血浆IL-6及IL-27水平均高于NRDS组（P<0.05）。ROC曲线分析显示：当IL-6取56.21 pg/mL时，曲线下面积、灵敏度和特异度分别为0.867、61.1%、95.0%；当IL-27取135.8 pg/mL时，曲线下面积、灵敏度和特异度分别为0.881、83.3%、80.0%。结论血浆IL-6和IL-27可作为早期鉴别早产儿ARDS与NRDS的生物学指标。     

p27~(kip1)表达在食管癌放射抗拒中的意义

目的 探讨p27~(kip1)表达与食管癌放射敏感性变化的关系.方法 通过γ射线反复照射人食管鳞癌细胞EC9706(累计放射剂量6 000 cGy),逐步筛选得到具有放射抗拒性的细胞EC9706R.采用克隆形成实验检测两种细胞的放射敏感性,流式细胞仪分析细胞周期特征,免疫细胞化学检测p27~(kip1)的表达.结果 筛选得到的人食管鳞癌细胞EC9706R较亲本细胞显示出明显的放射抗性,EC9706R细胞SF_2=65.71%,D_0=2.20 Gy,D_q=1.61 Gy,N=2.07;EC9706细胞SF_2=46.72%,D_0=1.61 Gy,D_q=0.99 Gy,N=1.85,EC9706R细胞SF_2、D_0、D_q及N值均高于亲本细胞;细胞周期检测显示EC9706R细胞G_1期比例较亲本细胞明显下降,而S期比例明显增加;免疫细胞化学结果 显示具有放射抗性的EC9706R细胞p27~(kip1)表达明显低于亲本细胞.结论 p27~(kip1)表达下调导致细胞周期变化,可能是食管癌细胞产生放射抗拒的机制之一.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期作用及分子机制探讨

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期的作用及机制.方法 用0.5、1.0、1.5;μmol/L MS-275作用于乳腺癌MCF7细胞24 h,用MTT 法观察不同浓度MS-275对乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测乳腺癌MCF7细胞生长及周期,Western-blotting法检测MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期相关基因表达的影响.结果 1.0 μmol/L的MS-275对乳腺癌MCF7细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μxmol/L浓度之上可明显诱导乳腺癌MCF7细胞周期阻滞,增强p21、p27基因的表达,降低CCNDl、Cdk4D基因的表达.结论 一定剂量MS-275抑制乳腺癌MCF7细胞的生长,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、Cdk4D基因表达的减少相关.     

miRNA-27b对人星状细胞系脂代谢与迁移能力的影响

目的探讨在人肝星状细胞系中miR-27b基因表达异常对LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力的影响。方法转染干预miR-27b的表达,油红染色与划痕实验检测LX-2细胞的脂滴沉积与迁移能力,荧光定量PCR检测靶基因RXRa的表达。结果 miR-27b在人肝星状细胞系LX-2细胞活化过程中表达升高,miR-27b的模拟物可以促进LX-2细胞的迁移、减小胞质内脂滴沉积;相反,miR-27b抑制物可以减弱LX-2细胞的迁移,增加胞质内脂滴沉积。荧光定量PCR结果显示RXRa在转染miR-27b模拟物表达降低,抑制物无明显变化。结论上调miR-27b的表达可能是通过靶基因RXRa促进LX-2细胞的迁移,减少细胞胞质内的脂滴沉积。