冬凌草甲素聚乙二醇功能化氧化石墨烯纳米粒的制备及抗结肠癌实验研究

目的制备负载冬凌草甲素(oridonin,ORI)的聚乙二醇功能化氧化石墨烯(PEGylated graphene oxide,GO-PEG)纳米粒(nanoparticles,NPs),并探讨其对结肠癌的抑制作用。方法利用酰胺化反应将端基为氨基的四臂聚乙二醇(PEG)连到氧化石墨烯(GO)上,并通过红外光谱(IR)和差示-热重联用热分析仪(TGA)等对其进行表征;再通过物理共混的方法在GO-PEG上负载抗肿瘤药物ORI,紫外光谱(UV)法测其包封率和载药率,MTT法测定载药体系对人结肠癌细胞SW620和HT29的增殖毒性,并建立荷瘤裸鼠模型考察其体内抗肿瘤活性。结果 IR和TGA测定结果表明PEG已成功偶联到GO上,UV法测得ORI-GO-PEG的包封率和载药率分别为95.81%和48.92%,且在各种生理溶液中具有良好的稳定性。体外细胞毒性实验结果表明,与ORI裸药相比,ORI-GO-PEG-NPs对结肠癌细胞的杀伤能力更强。体内抑瘤实验进一步发现,ORI-GO-PEG-NPs可以更好地抑制体内SW620肿瘤的生长。结论制得的ORI-GO-PEG-NPs具有优良的载药性能和较强的抗结肠癌作用,为今后开发抗肿瘤药物纳米给药系统提供了实验依据。     

首乌丹参方预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤PKC与iNOS mRNA表达的影响

目的观察首乌丹参方(GTSMP)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)保护作用。方法将实验大鼠分为假手术组、模型组、首乌丹参方高剂量组(9g生药/kg)、首乌丹参方中剂量组(4.5g生药/kg)、首乌丹参方低剂量组(2.25g生药/kg)、阳性对照药复方丹参滴丸组(4.5g生药/kg)、工具对照药消心痛组(1.67mg/kg),共7组。采用结扎大鼠冠状动脉前降支30min/开放120min建立心肌I/R模型。通过RT-PCR分子生物学方法,观察蛋白激酶C(PKC) mRNA和iNOS mRNA的表达情况以及首乌丹参方预处理对其的影响。结果与假手术组相比,模型组和首乌丹参方各组PKC mRNA表达均有所下降;与模型组相比,首乌丹参方中剂量组、复方丹参滴丸组和消心痛组表达上调,均表现出显著性差异,首乌丹参方高剂量组及低剂量组也能促进PKC mRNA的表达,但没有显著性差异;假手术组心肌iNOS mRNA弱表达,模型组呈现高表达,首乌丹参方可下调iNOS mRNA基因表达。结论首乌丹参方预处理可促进I/R的大鼠心肌的PKC表达,下调I/R大鼠心肌iNOS mRNA的表达;其通过激动PKC,使心肌组织iNOS mRNA弱表达,可能是首乌丹参方对缺血再灌注损伤的心肌的保护效应机制之一。     

两种不同淋巴结示踪剂在腹腔镜下宫颈癌根治术中的应用对比

目的 探讨亚甲蓝和纳米炭混悬注射液两种不同淋巴结示踪剂在腹腔镜下宫颈癌根治术中的应用效果。方法 收集2015年至2016年50例被确诊为宫颈癌的患者,随机分为亚甲蓝组（n=25）和纳米炭混悬注射液组（n=25）。比较两种不同淋巴结示踪剂在宫颈癌根治术中对前哨淋巴结（SLN）的检出效果。结果 亚甲蓝组和纳米炭混悬注射液组对SLN的检出率均为100.0％。亚甲蓝组25例患者中有22例检出SLN,共48枚,平均2.2枚,识别率为880％, 5例发现淋巴结转移;纳米炭混悬注射液组25例患者中有23例检出SLN,共50枚,平均2.2枚,识别率为92.0％,4例发现淋巴结转移。两组患者均无明显不良反应。结论 亚甲蓝和纳米炭混悬注射液在腹腔镜下宫颈癌根治术中对SLN有较高的识别率和检出率,且安全性高,值得临床推广。     

上转换纳米颗粒应用于肿瘤诊疗一体化平台的进展

上转换纳米颗粒（upconversion nanoparticles,UCNPs）是茁壮成长起来的一种新兴的技术平台,它为肿瘤的诊断与治疗提供了新的契机。UCNPs与生俱来的光、磁等优越性使其能用于肿瘤的双模式及多模式成像,况且UCNPs具有将近红外光转换为紫外线或可见光的独特能力因而被应用于肿瘤的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)和光热治疗(photothermotherapy,PTT)中,再者纳米粒子可作为靶向递送抗肿瘤药物的载体,从而能在精准诊断的同时也发挥抗癌作用而实现肿瘤的诊疗一体化。     

表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响

目的:研究表面修饰对氧化铁纳米粒子类酶活性的影响。方法:用共沉淀法制备γ-Fe2O3纳米粒子,并用透射电子显微镜(TEM)表征。将γ-Fe2O3纳米粒子分别表面修饰二巯基丁二酸(DMSA)、柠檬酸、酒石酸和3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS),并用Zeta电位仪表征。由于γ-Fe2O3纳米粒子可以催化双氧水氧化底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB),从而发生显色反应,这一特性与辣根过氧化物酶(HRP)相似,通过岛津UV-3600紫外-可见分光光度计和酶标仪检测该显色反应,评估氧化铁纳米粒子的催化性能及表面修饰的影响。结果:(1)TEM和Zeta电位测量表明,γ-Fe2O3纳米粒子直径约为13 nm,表面修饰能够有效调控其表面电荷;(2)氧化铁纳米粒子类过氧化物酶催化活性与纳米粒子的表面电荷相关,表面负电荷有利于增加对带正电荷底物TMB的亲和力,从而增加类酶活性;(3)γ-Fe2O3/DMSA具有最高的表面负电荷,米氏常数测量表明Km(TMB)为0.3 mmo.lL-1,表现出与天然HRP对底物TMB类似的亲和力。结论:通过表面修饰可以调控氧化铁纳米粒子的类酶活性,其作为HRP模拟酶具有潜在的应用价值。     

壳聚糖纳米粒介导的PIK3CA基因干扰对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的观察PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子处理胃癌细胞BGC823后,胃癌细胞BGC823侵袭能力的变化,研究壳聚糖纳
米粒子介导PIK3CA干扰在抑制胃癌侵袭转移中的应用价值。方法使用壳聚糖包被PIK3CA siRNA制备纳米粒子,纳米粒子
粒径在350 nm。用其处理胃癌细胞,通过western blot及PCR检测PIK3CA沉默情况,并通过Transwell实验观察细胞侵袭性的
变化。结果PIK3CA siRNA-壳聚糖纳米粒子可显著下调胃癌细胞BGC823中PIK3CA的表达（P<0.01）,并且可明显抑制胃癌
细胞的侵袭性（P<0.001）。结论通过壳聚糖纳米粒子介导的PIK3CA基因干扰可以显著降低胃癌细胞的侵袭能力。
     

游离表阿霉素与表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒治疗大鼠移植性肝癌的对照研究

目的观察表阿霉素和表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒对移植性肝癌的治疗效果。方法建立SD大鼠移植性肝癌动物模型36只,从中随机取12只,暴露肝脏,游标卡尺测定肿瘤的长短径,为治疗前的肿瘤体积。并将余下肿瘤模型大鼠随机分为2组,每组12只。游离表阿霉素组(EPI组)每只尾静脉给表阿霉素1.67 mg.kg-1。表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒组(EPI-PBCA-NP组)每只尾静脉给表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(相当于表阿霉素1.67 mg.kg-1)。1周后记录肿瘤治疗后的生长率、肿瘤的坏死范围、存活天数、生命延长率。结果治疗后两组间肿瘤体积存在差异性(P<0.01),EPI-PACA-NP组肿瘤体积和肿瘤生长率显著低于EPI组(P<0.01)。病理切片见EPI组仍有瘤细胞增生,轻度坏死和中度坏死各占一半。EPI-PACA-NP组可见肿块里有大面积无核结构,纤维组织替代,以重度坏死为主,无轻度坏死。以EPI组为对照组,EPI-PACA-NP组大鼠的生命延长率为80.95%,EPI-PACA-NP组大鼠生存天数比EPI组显著延长(P<0.01)。结论尾静脉注射EPI-PACA-NP组肿瘤生长率明显降低、生命延长率显著提高。     

碳包铁纳米晶结合表阿霉素对HepG-2细胞的作用及对小鼠急性毒性实验研究

目的 观察单纯碳包铁纳米晶(CCIN)粒子及结合表阿霉素(EADM)的CCIN粒子对肝癌细胞的体外作用,并比较单纯EADM与结合了EADM的CCIN对小鼠的急性毒性反应.方法 MTT法检测单纯CCIN以及载EADM的CCIN对HepG-2细胞的毒性,并在光镜、电镜下观察肿瘤细胞对CCIN的吞噬作用.经尾静脉注入不同浓度药物,比较单纯EADM与EADM-CCIN混悬液对小鼠的急性毒性反应.结果 光镜、电镜下可见HepG-2细胞吞噬大量CCIN粒子人胞浆,细胞结构完整,未见明显结构破坏.各浓度的CCIN悬液(包括空白对照组)作用于HepG-2细胞系,所得的吸光度值各组间无差异.单纯EADM对HepG-2细胞株的抑制率比相应浓度的CCIN-EADM混合物高,且含CCIN量比例较低的药物组对HepG-2细胞株的抑制率要高于含CCIN量比例相对较高的组.小鼠急性毒性实验中.单纯EADM经静脉给药的LD50值为16.9 mg/kg,低于相应的EADM-CCIN混悬液的LD50值(20.7 mg/kg).结论 HepG-2细胞可吞噬CCIN粒子;在一定浓度下单纯CCIN对HepG-2细胞无毒性;载药CCIN对肿瘤细胞的抑制在短时间内较单纯相同浓度EADM的抑制作用弱,且随CCIN比例升高抑制作用相应下降;小鼠急性毒性实验中,EADM-CCIN混悬液的急性毒性相对于同剂量的单纯EADM有所降低.     

异硫氰酸荧光素标记的蚓激酶纳米粒的分离

目的 :分离除去蚓激酶白蛋白纳米粒溶液中未成粒的BSA ,利于FITC标记在纳米粒上 ;分离除去未与蚓激酶纳米粒结合的FITC ,降低FITC对检测荧光纳米粒的影响。方法 :采用SephadexG - 1 0 0和SephadexG - 5 0凝胶柱分离纯化。结果 :流速为 3ml/min时 ,SephadexG - 1 0 0柱 (2 1 .5cm ,φ1 .9cm)能够分离除去 (2 9.3± 3.6 ) %未形成纳米粒的BSA ;流速为 0 .2 5ml/min时 ,SephadexG - 5 0凝胶柱 (1 0cm ,φ2cm)可以完全分离除去未与纳米粒结合的FITC。结论 :通过分离 ,FITC有效地标记在纳米粒上 ;降低了背景荧光 ,使荧光纳米粒在荧光显微镜下清晰显现。     

金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测miRNA-721

目的 构建一种自催化发夹组装（CHA）无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法 首先在金纳米颗粒（AuNPs）表面修饰5-羧基荧光素（FAM）标记的DNA发夹探针H1,H1的荧光被金纳米粒子猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNPs上的H1标记荧光素远离AuNPs而发射荧光,随后H1和H2之间发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将20 μL探针AuNPs-H1,50 μL 3 μmol/L探针 H2（退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L NaCl,5 mmol/L MgCl2,pH 7.4）,与50 μL不同浓度的miRNA-721（0.1 ~ 5 μmol/L）在30℃下共反应20 min,最后在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果 以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下得到520 nm处的相对荧光强度变化值（?F = F – F0）与miRNA-721浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程?F = 29232lgC – 52435（R2 = 0.9910）。该荧光法检测限为1.23 nmol/ L。在正常人血清中的加标回收率为92.71% ~ 104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论 该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。