The comparison of effects of processed Aconiti tuber, U50488H and MK-801 on the antinociceptive tolerance to morphine

In the previous studies, we demonstrated that an oriental herbal medicine, processed Aconiti tuber (PAT), at subanalgesic doses could inhibit or reverse the antinociceptive tolerance to morphine. In the present study, we compared the effect of PAT, trans-(+/-)-3,4-dichloro-N-methyl-N-(2-(1-pyrrolidin)cyclohexyl)-benzeneacetamide methane sulfonate hydrate (U50488H), a selective kappa opioid receptor (KOR) agonist, and (-)-5-methyl-10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5,10-imine-maleate (MK-801), a N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor antagonist, on the antinociceptive tolerance to morphine in the same experimental condition. Mice received subcutaneous morphine (10 mg/kg), and oral PAT at a subanalgesic dose (0.3 g/kg for mechanical or 1.0 g/kg for thermal test), or intraperitoneal U50488H at a subanalgesic dose (3 mg/kg), or MK-801 at a subanalgesic dose (0.1 mg/kg) once daily for 14 days. The mechanical nociceptive threshold was measured before, and at 60 min by tail pressure testing, and thermal nociceptive latency was measured before, and at 30 min by hot plate testing, after daily morphine injections. PAT and U50488H could not only inhibit the development of morphine tolerance but also reverse the already-developed morphine tolerance, while MK-801 could only inhibit the development of morphine tolerance but not reverse the already-developed morphine tolerance, in both mechanical and thermal nociceptive tests. These data suggested that PAT, an indirect-acting KOR agonist, share the common pharmacological property of KOR agonists on morphine tolerance, and that PAT may be superior to some NMDA receptor antagonists which do not reverse already-developed morphine tolerance.     

CACNA1H基因敲除对小鼠孤独症样行为及海马神经元形态学的影响

目的研究CACNA1H基因敲除(knockout, KO)对小鼠孤独症样行为及海马神经元形态学的影响。方法25只3~4周龄C57BL/6背景的CACNA1H KO小鼠作为实验组, 26只同年龄同背景的野生型(wild type, WT)小鼠作为对照组。通过三箱实验和旷场实验观察小鼠社交、焦虑和重复刻板行为后测量其脑质量与脑体积, 用尼氏染色法(Nissl staining)观察海马神经元数目。将CACNA1H杂合子小鼠与Thy1-GFP-O小鼠杂交, 构建CACNA1H^-/--Thy1⁺(KO-GFP)及CACNA1H^+/+-Thy1⁺(WT-GFP)小鼠, 观察海马神经元树突棘密度及成熟度。结果三箱实验中, 社交测试阶段, KO小鼠在陌生鼠箱中的时间比空箱更长(F_{1, 14}=95.086, P < 0.05;Post-Hoc: P < 0.05), 探索的偏好指数与对照组相比差异无统计学意义(t=1.044, P>0.05);新社交对象识别测试阶段, KO小鼠在新陌生鼠箱与陌生鼠箱中的时间差异无统计学意义(F_{1, 14}=18.062, P < 0.05;Post-Hoc: P>0.05), 探索的偏好指数低于对照组(t=2.390, P < 0.05)。旷场实验中, KO小鼠在旷场中心活动时间明显少于对照组(t=2.503, P < 0.05), 自梳理时间明显多于对照组(t=-2.299, P < 0.05)。形态学结果显示, KO小鼠脑质量/体质量和脑体积与对照组相比差异均无统计学意义(t=0.356, P>0.05;t=-0.660, P>0.05), 但其海马齿状回区神经元数目较对照组减少(t=2.323, P < 0.05), 且KO-GFP小鼠海马齿状回区树突棘密度较对照组增加(t=-2.374, P < 0.05), 而成熟度差异无统计学意义(t=-1.935, P>0.05)。结论CACNA1H KO小鼠具有孤独症样行为, 可能与海马齿状回区神经元数目减少及树突棘密度增高有关。     

肿瘤治疗存在的问题及中西医结合的研究重点

目前的肿瘤治疗主要存在以下几个问题：(1)肿瘤的过度治疗普遍存在；(2)急功近利而缺乏长远规划；(3)综合治疗缺乏合理的内涵；(4)缺少有效的个体化治疗方案；(5)对中医药的优势认识不足、发挥不够。中西医结合在肿瘤防治中大有可为，应重点围绕以下几个方面开展研究工作：(1)加强中医对恶性肿瘤基础知识的认识和研究；(2)加强中西医结合治疗肿瘤合理化、规范化方案的研究；(3)加强中西医结合治疗恶性肿瘤疗效标准的研究；(4)加强中西医结合防治肿瘤术后复发、转移的研究。     

模拟肽Gap27抑制缝隙连接蛋白43在帕金森病小鼠模型中的作用

目的探索在6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型中，应用缝隙连接蛋白43(connexin 43，Cx43)选择性抑制剂模拟肽Gap27能否改善多巴胺神经元死亡以及对Cx43表达的影响。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、6-OHDA组与6-OHDA+Gap27组，每组6只，进行双侧黑质脑立体定位注射。对照组注射抗坏血酸盐溶液，6-OHDA组注射6-OHDA溶液，6-OHDA+Gap27组注射6-OHDA和Gap27混合溶液，用免疫组织化学法对多巴胺神经元标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)染色检测多巴胺神经元数量，实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测Cx43信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid，mRNA)表达，免疫荧光染色检测Cx43蛋白分布，Western blot法检测小鼠中脑Cx43蛋白及Cx43的第368位点丝氨酸磷酸化(Cx43 phosphorylation at serine 368，Cx43-ps368)蛋白含量。结果注射6-OHDA后，小鼠出现黑质多巴胺神经元大量死亡，6-OHDA组TH阳性神经元数量降为对照组的27.7%±0.02%(P < 0.01)，模拟肽Gap27的使用减少了多巴胺神经元死亡数量，6-OHDA+Gap27组TH阳性神经元数量为6-OHDA组的(1.64±0.16)倍(P < 0.05)；此外，6-OHDA引起Cx43蛋白含量增加，Cx43-ps368蛋白含量降低。Gap27减弱了6-OHDA引起的Cx43蛋白与Cx43-ps368蛋白含量变化，6-OHDA组中脑总Cx43蛋白含量为6-OHDA+Gap27组的(1.44±0.07)倍(P < 0.05)，为对照组的(1.68±0.07)倍(P < 0.01)，且6-OHDA组Cx43-ps368蛋白含量及占总Cx43蛋白比例显著低于6-OHDA+Gap27组(P＜0.05)。结论模拟肽Gap27在6-OHDA诱导的小鼠模型中可减少黑质多巴胺神经元死亡从而发挥神经保护作用，6-OHDA引起的Cx43蛋白过表达对多巴胺神经元可能存在神经毒性，而降低Cx43蛋白水平及维持Cx43-ps368蛋白水平可能是Gap27发挥保护作用的机制。     

严重创伤患者早期外周血淋巴细胞变化与预后之间的关系

目的探讨严重创伤早期外周血淋巴细胞变化趋势与预后间的关系。方法选取2017年6月至2020年6月北京大学人民医院创伤救治中心收治的严重多发伤患者作为研究对象进行回顾性研究, 观察入院后连续5 d血常规中淋巴细胞变化趋势并进行分组, 第1组: 淋巴细胞减少后在5 d内恢复正常; 第2组: 淋巴细胞减少后未恢复正常; 第3组: 淋巴细胞一直处于正常水平, 并记录各组患者在住院28 d后的转归情况。对收集的临床资料进行统计学分析, 了解创伤早期淋巴细胞变化趋势与预后间的关系。同时, 为排除年龄的影响, 依据年龄是否≥65岁进行分层, 并根据住院时间是否≥28 d分为住院时间延长组和住院时间非延长组, 在不同年龄组中分别探讨淋巴细胞变化与住院时间的关系。结果共纳入患者83例, 其中男性66例, 女性17例, 主要受伤机制为车祸伤和高处坠落伤, 创伤严重程度评分(injury severe score, ISS)为(30±11)分。根据连续5 d淋巴细胞变化趋势分组, 第1组32例, 第2组33例, 第3组18例。第2组33例患者中, 在住院28 d内死亡5例, 死亡率为15.2%(5/33), 未出院9例, 均高于其他两组(P < 0.05)。进一步按年龄进行分层后, 发现在高年龄患者中淋巴细胞处于低水平是住院时间≥28 d的危险因素, 但在低年龄患者中, 发现中性粒细胞持续偏高与预后不良相关。结论严重创伤后外周血淋巴细胞一直处于低水平与预后不佳密切相关, 尤其在高年龄患者中明显, 淋巴细胞可作为一项可靠指标用于预后评估。     

基于长短期记忆网络和Logistic回归的重症监护病房脑卒中患者院内死亡风险预测

目的基于引入注意力机制的长短期记忆网络(long short-term memory，LSTM)和L1正则化的Logistic回归筛选变量，再通过传统的Logistic回归建立重症监护病房(intensive care unit，ICU)脑卒中患者院内死亡风险预测模型并评价模型效果。方法选取重症医学信息数据库(Medical Information Mart for Intensive Care-Ⅳ，MIMIC-Ⅳ)中的脑卒中患者作为研究对象，以是否发生院内死亡作为结局变量，备选预测因子包括人口学特征、合并症、入院48 h内实验室检查和生命体征检查等。将数据根据结局指标以8 ∶2的比例随机进行10次训练集和测试集的划分，在训练集上构建LSTM和L1正则化的Logistic回归模型，在测试集上选取重要程度排名前10的变量的并集纳入Logistic回归建立预测模型，以受试者工作特征曲线下面积(area under curve, AUC)、灵敏度、特异度、预测准确度为指标对模型进行评价，并与未预先进行变量筛选的前进法Logistic回归模型的预测效果进行比较。结果共纳入2 755例脑卒中患者的2 979条ICU入院记录，其中院内死亡记录占17.66%。两个变量筛选模型中，L1正则化的Logistic回归模型的AUC显著优于LSTM模型(0.819±0.031 vs. 0.760±0.018, P < 0.001)，两个模型中重要程度均位于前10的变量包括年龄、血糖和尿素氮。最终预测模型的AUC为0.85，灵敏度为85.98%，特异度为71.74%，预测准确率为74.26%，优于未预先进行变量筛选的前进法Logistic回归模型。结论用引入注意力机制的LSTM和L1正则的Logistic回归筛选出的变量的预测效果较好，具有一定的临床价值。     

不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层多孔支架的影响

目的探讨不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层(decellularized small intestinal submucosa, SIS)多孔支架理化性能及生物相容性的影响。方法(1) 将新鲜SIS塑形为三维多孔支架并采用戊二醛(glutaraldehyde, GA)、碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, EDC]和原花青素(procyanidine, PA)3种交联剂进行交联, 获得3组交联后支架, 分别为GA组、EDC组和PA组。(2)理化性能评价: 对3组多孔支架进行宏观形貌观察, 使用场发射环境扫描电镜进行微观形貌观察并测定孔径及孔隙率, 使用茚三酮法测定交联度, 使用酶促降解法评价抗降解性能, 使用万能力学测试机测定应力应变曲线及压缩强度。(3)生物相容性评价: 使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测交联处理对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)增殖的影响, 使用Calcein-AM/PI活死细胞染色法评价交联处理后支架的细胞毒性。结果宏观形貌观察可见交联修饰未破坏支架三维结构; 微观形貌观察可见各组多孔支架具有大小均匀、相互连通的孔隙结构。EDC组孔径最大, 与另两组差异具有统计学意义(P < 0.05);PA组孔隙率最低, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。PA组交联度最高而溶胀率最低, EDC组溶胀率最高。EDC组和GA组的体外降解速率均高于PA组, 其中GA组降解速度最快, PA组抗降解能力最佳, 降解至第15天时3组质量丧失率间的差异有统计学意义(P < 0.05)。EDC组和GA组压缩强度近似, PA组压缩强度最高, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。GA组支架的细胞毒性最大, hBMSCs在EDC组和PA组支架上具有更好的增殖能力, 在GA组增殖较慢。结论3种交联剂处理均可达到较高的交联度, 经EDC和PA交联处理的SIS多孔支架在拥有较好理化性能的同时具有良好的生物相容性, 相比于GA是更有应用前景的交联处理方法。     

妊娠合并感染性心内膜炎1例

Infective endocarditis in pregnancy is extremely rare in clinical practice. Guidelines addressing prophylaxis and management of infective endocarditis do not extensively deal with concomitant pregnancy, and case reports on infective endocarditis are scarce. Due to increased blood volume and hemodynamic changes in late pregnancy, endocardial neoplasms are easy to fall off and cause systemic or pulmonary embolism, respiratory, cardiac arrest and sudden death may occur in pregnant women, the fetus can suffer from intrauterine distress and stillbirth at any time, leading to adverse outcomes for pregnant women and fetuses. The disease is dangerous and difficult to treat, which seriously threatens the lives of mothers and babies. Early diagnosis and reasonable treatment can effectively improve the prognosis of patients. The most important method for the treatment of infective endocarditis requires early, adequate, long-term and combined antibiotic therapy. Moreover, surgical controversies regarding indication and timing of treatment exist, especially in pregnancy. In terms of the timing of termination of pregnancy, the timing of cardiac surgery, and the method of surgery, individualized programs must be adopted. A pregnant woman with 30⁺⁵ weeks of gestation is reported. She was admitted to hospital due to intermittent chest tightness, suffocation and fever, with grade Ⅲ cardiac insufficiency. Imaging revealed large mitral valve vegetation, 22.0 mm×4.1 mm and 22.0 mm×5.1 mm, respectively, and severe valve regurgitation. Mitral valve perforation was more likely, blood culture suggested Staphylococcus epidermidis infection, after antibiotic conservative treatment, the effect was poor. After the joint consultation including cardiology, neonatology, interventional vascular surgery, anesthesiology, and obstetrics, the combined operation of obstetrics and cardiac surgery was performed in time. The heart was blocked for 60 minutes, the bleeding was 1 200 mL, the newborn was mildly asphyxiated after birth, and the birth weight was 1 890 g. Nine days after the operation, the patient was discharged from the hospital, and the newborn was discharged with the weight of 2 020 g. Critical cases like this require a thorough weighing of risks and benefits followed by swift action to protect the mother and her unborn child. An optimal outcome in a challenging case like this greatly depends on effective interdisciplinary communication, informed consent of the patient, and concerted action among the specialists involved.     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met），另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药，褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃，二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃，糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况；Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG，5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化；qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化；Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平；DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大，同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达，抑制Keap1蛋白表达（P < 0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加，降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P < 0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核，上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P < 0.05）来增强细胞抗氧化能力，降低细胞内活性氧的水平。结论褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用，同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达，降低活性氧水平。     

干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组），利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核，建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠，取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织，采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态，利用免疫荧光检测Iba-1、P2X4受体的表达情况；应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs，采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况；采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况；采用siRNA P2X4，下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达，RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达；利用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果与对照组相比，荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P < 0.0001），且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）；使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后，M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001），M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001），但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著，同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA（P < 0.01）及蛋白表达水平（P < 0.01，P < 0.05）降低，并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。