手足口病合并急性弛缓性麻痹患儿的脊髓及头颅MRI随访研究

目的研究手足口病(HFMD)合并急性弛缓性麻痹(AFP)患儿的脊髓及头颅MRI特点,通过临床随访研究分析影像与预后的关系。方法 9例HFMD并发AFP病例中,1例四肢瘫痪,1例双上肢瘫,1例右上肢瘫,2例双下肢瘫痪,4例单侧下肢瘫痪。观察9例HFMD合并AFP患儿的临床特点,大多于发病2周行脊髓和头颅MRI检查,并对患儿进行2年随访。结果 6例合并脑炎的患儿查体无颅神经损伤的相应体征。9例急性迟缓性麻痹患儿,3例痊愈,其余6例患儿仍有不同程度的瘫痪,但症状均较急性期明显改善。MRI示患儿头颅病变集中于中脑、脑桥、延髓的背侧,脊髓病变集中于C2～7和(或)T12～L1的脊髓前角,2年后病变仅遗留少许小范围异常信号。3例痊愈的患者,脊髓MRI仍能观察到异常信号。脊髓病变累及的长度越长,患者瘫痪的恢复越差。脊髓病变累及1～2个节段,经过康复痊愈。脊髓病变累及3个节段或以上、病变位于脊髓颈段、肌力0级者,预后不良。结论 HFMD患儿,急性期MRI显示病变主要位于脑干背侧和脊髓前角,脑干病变未遗留神经系统后遗症状,而脊髓病变遗留AFP后遗症与脊髓病变长度有关。急性期MRI检查能灵敏、准确地显示脊髓病变,对预测预后有一定帮助。     

抗肠道病毒71型特异性卵黄抗体的制备及鉴定

目的:制备特异性抗肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的卵黄抗体并检测其生物学性能,这对EV71感染手足口病的预防和治疗具有重大的意义。方法:用纯化并灭活后EV71作为抗原免疫健康产蛋鸡。采用本实验室水提综合聚乙二醇法提取纯化鸡卵黄抗体;用Bradford法测定卵黄抗体提取液的蛋白含量;还原性SDS-PAGE凝胶电泳分析测定提取蛋白的纯度及相对分子质量;分别用ELISA、双向免疫琼脂扩散检测纯化特异性卵黄抗体抗EV71效价;Western blot分析特异性卵黄抗体的免疫反应性。结果:卵黄中卵黄抗体含量达7.76 mg/ml,卵黄抗体的纯度为94.86%。初免10天后蛋黄中可检测到特异性抗EV71卵黄抗体,初免40天后ELISA检测抗体效价高达1∶20 480,双向琼脂扩散检测效价达1∶16。提取的卵黄抗体具有良好的免疫反应性,能与EV71特异性结合。结论:水提综合聚乙二醇法提取纯化得到的抗EV71卵黄抗体产量和纯度高、效价好且具有良好的免疫反应性。     

广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体水平调查

目的调查广州地区健康儿童肠道病毒71型抗体IgG（EV71-IgG）的水平,分析与EV71所致手足口病（HFMD）发病的关系。方法以来源于广州市妇女儿童医疗中心（我院）中心实验室分离到的EV71 C4亚型标本,制备EV71诊断抗原,建立EV71-IgG抗体诊断试剂盒方法,并进行实验室评价。收集2010年1~3月在我院儿保科抽血进行常规保健检测的标本,筛选出无发热、无HFMD症状的健康儿童血清标本,检测EV71-IgG抗体。选取我院2010年全年门诊及住院HFMD患儿的咽拭子标本进行EV71特异性核酸检测。结果①本研究建立的试剂盒EV71-IgG抗体检测临界值为0.148;与细胞中和实验方法阳性符合率为100%,阴性符合率为92%,与柯萨奇A16病毒抗体无交叉反应。②819名健康儿童血清标本中,男481名,女338名。〈1岁组（60%,60/100名）和~2岁组（39.3%,72/183名）EV71-IgG抗体阳性率显著高于其他各年龄组[~3岁、~4岁、~5岁和~14岁组分别为12.9%（15/116名）、27.1%（38/140名）、14.2%（16/113名）和22.8%（38/167名）]。EV71-IgG抗体阳性率无显著性别差异。③4 780例EV71阳性HFMD患儿中,男3 070例,女1 718例。〈1岁310例（6.5%）,~2岁1 157例（24.2%）,~3岁1 337例（28.0%）,~4岁1 094例（22.9%）,~5岁450例（9.4%）,~14岁432例（9.0%）。④各年龄组EV71-IgG抗体阳性率与EV71阳性年龄构成比呈相反趋势,〈1岁组EV71-IgG抗体阳性率最高,EV71阳性年龄构成比最低;~3岁组EV71-IgG抗体阳性率最低,EV71阳性年龄构成比最高。结论 〈1岁健康儿童EV71-IgG阳性率最高,EV71阳性年龄构成比与EV71-IgG阳性率呈相关现象。     

肠道病毒71型3C蛋白表达后细胞蛋白质组差异分析

目的 利用蛋白质组学技术研究肠道病毒71型(EV71)编码3c蛋白对宿主细胞蛋白表达的影响.方法 在293T细胞中瞬时过表达EV71 3C蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳(20-DICE)检测3C表达后293T细胞中蛋白的差异.选取表达水平有明显变化的蛋白用Western blot进行验证.结果 在293T细胞中过表达3...     

79例重症手足口病儿童病原学分析

目的分析重症手足口病的病原体,为预防和控制重症手足口病提供依据。方法采集我院PICU收治的79例重症手足口病患儿的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液等标本进行RT-PCR定性检测肠道病毒通用引物及EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。结果共收集标本257份,肠道病毒通用引物阳性164例,EV71阳性118例,CoA16阳性40例,其他6例。其中粪便标本79份,病毒分离阳性61份,阳性率为77.2%;肛拭子79份,病毒分离阳性53份,阳性率为67.1%;咽拭子79份,病毒分离阳性41份,阳性率为51.9%;疱疹液20份,病毒分离阳性9份,阳性率为45%。结论 EV71是引起重症手足口病的主要病原体。粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液的阳性率不同,以粪便阳性率最高。     

手足口病EV71型中和抗体变化的研究

目的评价手足口病(HFMD)患儿急性期和愈后的血清EV71型中和抗体变化。方法对安徽阜阳2008年4～8月因HFMD住院的患儿采集急性期和愈后1年血样,采用微量细胞病变中和试验方法检测EV71型中和抗体滴度。结果共调查到急性期组患儿83人和愈后1年组患儿57人。对这些病例的血清中和试验研究发现:急性期组和愈后组中和抗体阳性率差异分别为96.4%和82.5%,差异具有统计学意义(χ2=7.784,P<0.05)。急性期组和愈后组抗-EV71中和抗体GMT值分别为388.3和540.0,差异无统计学意义(t=0.907,P>0.05)。结论患儿愈后可以产生较高的抗-EV71中和抗体,且抗体可持续至少1年。     

肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞表位的预测

目的预测C4基因亚型肠道病毒71型的VP1蛋白二级结构及B细胞表位,为EV71疫苗研制提供理论基础。方法本研究将宁波地区EV71分离株与国内外EV71代表株进行同源性分析和并构建亲缘进化树。以VP1基因序列为材料,应用EX-PASY服务器上的GOR4、SOPMA两种方法分析预测蛋白质二级结构,并结合蛋白质的亲水性、柔韧性、表面可能性等指标综合评价VP1蛋白的B细胞抗原表位。结果同源性分析和亲缘进化分析得出,2010年宁波EV71分离株属于C4a基因亚型,与基因库检索到的C4a基因亚型代表株核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为93.6%～99.3%和98.3%～100%。VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,有多处抗原指数较高的区段,结合亲水性、柔韧性、表面可能性等指标,综合预测VP1蛋白的B细胞抗原表位在第39～40、159～167、212～220、287～290位氨基酸残基的可能性较大。结论 EV71VP1蛋白多个区段具有抗原潜力通过生物信息学方法预测VP1蛋白二级结构及B细胞表位为EV71疫苗研制提供理论基础。     

EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251抗瘤作用初步研究

目的 探讨EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251的生长、凋亡和人端粒酶反转录酶(hTE RT)表达的影响.方法 采用RPMI 1640培养U251细胞,培养24 h后随机分为实验组和对照组,实验组按感染复数值为1加入EV71,并共培养72 h,对照组不加EV71.加入EV71后0h、24 h、48 h和72 h用倒置显微镜观察U251细胞形态和生长情况,流式细胞仪测定U251凋亡率,半定量RT-PCR检测hTERT的相对表达水平.结果 倒置显微镜观察发现,与对照组比较,实验组加入EV71后24 h,U251细胞生长明显受到抑制,48 h和72 h时U251细胞明显皱缩、变小、形态不规则,而对照组细胞则大小均匀.流式细胞仪检测发现,实验组加入EV71后24h、48 h和72 h,U251细胞的凋亡率均明显高于对照组[24 h:(12.55±2.38)％比(1.42±0.21)％,48 h:(65.60±8.48)％比(1.42±0.17)％,72 h:(87.52±3.05)％比(1.41±0.16)％,P均=0.000],且细胞凋亡率逐日升高,对照组细胞凋亡率无明显变化.实验组加入EV71后24h、48 h和72 h,U251细胞的hTERT相对表达水平均明显低于对照组[24 h:(0.58±0.05)比(0.89±0.05),48 h:(0.23±0.04)比(0.89 ±+0.03),72 h:(0.10±0.03)比(0.90±0.06),P均=0.000],且表达水平逐日下降,对照组表达水平无明显变化.结论 EV71能有效抑制U251细胞的生长,诱导细胞凋亡,具有潜在的抗瘤作用,其作用机制可能部分与下调U251细胞的hTERT表达有关.     

肠道病毒71型外壳蛋白VPl基因克隆、表达及活性鉴定

肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxAl6)是引起手足口病最为常见肠道病毒,其中EV71是引起当前我国手足口病的病原优势株?。目前临床对EV71感染以对症治疗为主,尚无有效的抗病毒药物,研制安全有效的疫苗和早期诊断试剂是预防控制手足口病疫情的经济有效地措施,为此进行以下相关研究。