尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制研究

目的 探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及其耐药机制。方法 收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1-12月尿液分离大肠埃希菌308株，通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株；PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因；采用多序列位点分型（MLST）对菌株进行遗传相关性分析，采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs的菌株168株（54.54％）；产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株（10.71%）。其中，ESBLs耐药基因携带率为blaSHV 88.9%（16/18）、blaCTX-M 77.8%（14/18）、blaTEM-208，5.6%（1/18）；blaTEM-1b 61.1%（11/18）；fosA3基因的携带率为83.3％（15株）。 MLST分型主要为ST131（27.78%），接合试验表明，fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论 产ESBLs的大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低的水平，fosA3基因是这些菌株磷霉素耐药的主要机制，该基因位于可接合的质粒上，易于水平传播，需要高度重视。 关键词：大肠埃希菌； 产超光谱β内酰胺酶； 磷霉素； 耐药机制     

Characterization of cephalosporin-resistant clinical Enterobacteriaceae for CTX-M ESBLs in Bahrain

ObjectiveTo detect the presence of specific CTX-M class of extended spectyum β-lactamases (ESBLs) in a collection of cephalosporin-resistant Enterobacteriaceae isolates from Bahrain.MethodsA subset of 80 cephalosporin-resistant Enterobacteriaceae collected from Salmaniya Medical Complex, Bahrain, were characterized further for the presence of specific genogroups of CTX-M β-lactamases by multiplex- and monoplex- PCRs. The primers used for the multiplex and monoplex PCRs were of genogroups- 1, 2, 8, 9 and 25. Sequencing of the representative isolates was performed to find the circulating CTX-M-types.ResultsA total of 93.8% (75/80) isolates showed the amplicons corresponding to any of the genogroups (1, 2, 8, 9, 25) and the remaining 6.2% isolates turned out negative in multiplex PCR. Some of the isolates demonstrated multiple bands corresponding to the sizes of different genogroups. Further confirmation with respective monoplex PCR on these 75 isolates demonstrated that 93.3% (70/75) harbored CTX-M genogroup-1 and 6.7% (5/75) harbored genogroup-9. We did not find the presence of genogroups 2, 8, and 25 in these isolates by monoplex PCR. Sequencing results of genogroup-1 isolates demonstrated the presence of CTX-M-15-like ESBL, however, discrepant results were noticed in genogroup-9 isolates, sequencing showed them as CTX-M-55-like ESBL.ConclusionsThis is the first report from Bahrain characterizing the CTX-M genogroups of ESBLs and reporting the emergence of bla_CTX-M-55-like gene in this region.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性特点。方法对我院2004年7月～2006年7月间各类临床标本分离出的大肠埃希菌307株和肺炎克雷伯菌202株，用CLSI／NCCLS推荐的表型确证法检测其ESBLs，采用K-B纸片琼脂扩散法进行药敏试验，分析产ESBLs菌株的分布及耐药性。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLS菌株的检出率分别为38．4％（118／307）和31．7％（64／202），主要分布于尿和痰、咽拭子中，病区主要集中于肺科、神经外科、感染科、泌尿外科、ICU室。产ESBLs菌株对亚胺培南和美罗培南呈高度敏感，对哌托西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁耐药率较低，对其他抗菌药物均出现较高耐药。结论产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分布在不同病区的不同标本中，碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南是治疗产ESBLS菌株感染的较佳药物。     

生物被膜肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的检测

目的探讨生物被膜菌的耐药机制，为临床合理应用抗生素提供理论依据。方法对2004年4月至2005年11月中国医科大学附属第二医院应用改进的平板培养法建立的肺炎克雷伯菌生物被膜模型，用银染法和扫描电镜观察鉴定。以亚胺培南为诱导剂诱导生物被膜菌超广谱β-内酰胺酶的产生。采用标准纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶，等电聚焦电泳测β-内酰胺酶的等电点。结果浮游肺炎克雷伯菌（A组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为20．0％（8／40）；生物被膜肺炎克雷伯菌（B组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为42．5％（17／40）；亚胺培南诱导生物被膜肺炎克雷伯菌（C组）超广谱β-内酰胺酶的检出率为65．0％（26／40）。对A组和B组的检出率，B组和C组的检出率进行x^2检验，结果差异均有显著性（P均〈0．05）。结论生物被膜的形成和产生超广谱β-内酰胺酶的协同作用是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因之一。     

细菌性痢疾流行特点及志贺菌耐药性研究

目的研究近年来肠道门诊细菌性痢疾流行概况及志贺菌耐药特点,为细菌性痢疾临床治疗和预防控制提供依据。方法采用志贺菌及沙门菌琼脂培养基培养,可疑菌株经VITEK-32细菌鉴定仪及血清凝集鉴定到群,K-B法检测抗菌药物的耐药性,纸片确认试验检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,三维试验检测AmpCβ-内酰胺酶（AmpC酶）。结果 279例细菌性痢疾感染患者主要以宋内志贺菌（201株,占72.4%）和福氏志贺菌（76株,占27.2%）感染为主,且患者主要集中在0～11岁年龄段,占总感染率的71.3%（199/279）,高发季节为7-11月。药敏结果显示,志贺菌对氨苄西林、哌拉西林和复方新诺明的耐药率较高,均〉60%;对环丙沙星和左旋氧氟沙星的耐药率较低,均〈40%,未发现耐哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南的志贺菌。151株志贺菌纸片确认试验为产ESBLs阳性菌株,占54.1%（151/279）;未发现AmpC酶阳性者。结论我院肠道门诊细菌性痢疾以感染宋内志贺菌和福氏志贺菌的婴幼儿为主,且宋内志贺菌有增高趋势,2种志贺菌对部分种类的抗菌药物药敏性差别较大,临床医师应根据菌群鉴定及药物敏感试验结果合理选择抗菌药物。     

多重耐药菌监测与医院感染控制

目的 加强多重耐药菌监测,为临床对多重耐药菌医院感染的预防控制工作提供依据.方法 按CLSI2008年版标准文件采用药敏纸片扩散法,对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)、耐万古霉素肠球菌(VRE)、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌以及多重耐药的鲍曼不动杆菌等的耐药表型检测.对多重耐药菌感染患者和定植患者实施全面的预防控制措施.结果 2008～2011年多重耐药菌检出率为MRS 56.0%、65.0%、56.5%、60.0%;VRE 0%、0%、0%、0%;ESBLs 大肠埃希菌69.5%、71.0%、61.0%、59.4%;ESBLs 肺炎克雷伯菌44.5%、26.5%、11.0%、7.1%;多重耐药的鲍曼不动杆菌0%、0%、0%、0%.结论 医疗机构应加强多重耐药菌目标性监测并实施全面的医院感染预防控制措施,能有效预防和控制住院患者多重耐药菌在医院内的传播.     

Characterization of extended-spectrum beta-lactamases, antimicrobial resistance genes, and plasmid content in Escherichia coli isolates from different sources in Rio de Janeiro, Brazil

We analyse the diversity of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs), antibiotic resistance genes, and plasmid content among Escherichia coli from a community and a hospital setting in Rio de Janeiro, Brazil. ESBL producers (CTX-M-2, CTX-M-9, CTX-M-59) belonged to different phylogroups/sequence types, and bla(CTX-M) were identified in IncA/C plasmids, reinforcing the possible intraplasmid evolution of bla(CTX-M-59) from bla(CTX-M-2) and the implication of IncA/C on bla(CTX-M) spread.     

室间质评中耐药表型检测结果分析

目的促进临床微生物实验室积极开展耐药表型检测,提高实验室整体检测水平。方法由临床检验中心统一发放菌种,要求各实验室在给定的几项耐药表型检测中根据鉴定结果选择一至两项,严格按照CLSI推荐的方法进行检测,并在规定的时间内回报结果。结果做耐药表型检测的6株细菌平均鉴定符合率为96%,对它们表型试验的选择以及最终检测结果的影响相对较小。6株菌耐药表型检测平均符合率为71%,其中200710号标本检测符合率较低,MRSA检测符合率为48%,D-试验检测符合率为43%。结论室间质评中增加耐药表型检测能够有效促进临床微生物室重视细菌耐药性检测,提高耐药性检测水平。     

533株革兰阴性杆菌的分离鉴定和耐药性监测

目的 为提高临床用药的科学性。方法 采用法国梅里埃VITEK32系统。结果 分离680株革兰阴性杆菌，其中分离率前6位的有533株，它们依次为大肠埃希菌占30．02％，肺炎克雷菌占18．39％，铜绿假单胞菌占15．95％，柠檬杆菌属占13．32％，肠杆菌属占12．38％，不动杆菌属占9．94％。结论 氨苄西林的耐药率均＞80％，头孢噻肟、头孢他啶的耐药率较低；亚胺培南极少出现耐药。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产ESBLs菌株，建议临床不用β－丙酰胺类抗生素，而推荐用碳青霉烯类、氨基糖苷类及加入棒酸类的复合抗生素。     

Prevalence of clinical isolates of Escherichia coli and Klebsiella spp. producing multiple extended-spectrum beta-lactamases

Eleven thousand two hundred seventy-two Escherichia coli, 1109 Klebsiella pneumoniae, 1124 Salmonella enterica, and 602 Klebsiella oxytoca unrelated clinical isolates were obtained between 2001 and 2004 in a university hospital in Salamanca, Spain. One hundred thirteen E. coli (1%), 32 K. pneumoniae (2.9%), 4 K. oxytoca (0.66%), and 5 S. enterica (0.44%) isolates produced extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs). We obtained 42.2% of the ESBL-producing isolates from outpatients and 57.8% from inpatients. The most commonly detected ESBLs were CTX-M 14 (43.5% of ESBL-producing isolates), TEM-116 (22.1%), and SHV-2 (15.6%). A CTX-M 27-producing E. coli is 1st reported in Spain in this study. Two (20 isolates, 13%) or 3 (7 isolates, 4.5%) ESBLs were produced by 17.5% of ESBL-producing isolates (27 isolates). The most frequent combinations were CTX-M 14 + TEM-116 (5.7%), SHV-12 + TEM-116 (2.6%), and SHV-2 + CTX-M 14 + TEM-116 (2.6%). Clonal diversity was high even between isolates producing the same combinations of 2 or 3 beta-lactamases.