ReProComet: a new in vitro method to assess DNA damage in mammalian sperm.

The increasing request of chemical safety assessment demands for the validation of alternative methods to reduce the resort to animal experimentation. Methods that evaluate reproductive toxicity are among those requiring the largest use of animals. Presently, no validated in vitro alternative exists for the assessment of reproductive toxicity. Mammalian sperm are sensitive targets of DNA-reactive chemicals, which form premutagenic adducts. Here, we propose a new method based on comet assay to detect DNA damage induced by potential germ cell mutagens in bull sperm available from assisted reproduction practices. In somatic cells, chemical-induced adducts can be revealed by comet assay that detects DNA breaks produced during adduct repair. Mature sperm, however, are devoid of repair enzymes, and adducts are processed only after fertilization. For this reason, comet assay is not sensitive to detect DNA lesions induced in sperm by most chemicals. To overcome such limitation, we developed a modified comet assay based on the addition of a protein extract from HeLa cells to agarose-embedded sperm on microscopic slides. To test the method, sperm were treated in vitro with methyl methanesulfonate (MMS) or melphalan (MLP) and comet assay was conducted both with and without protein supplementation. No effect of MMS or MLP was detected without protein supplementation; on the contrary, a clear-cut dose-dependent effect was measured after addition of the cell extract. These results represent a proof of concept of a novel in vitro mutagenicity test on sperm that could offer a promising approach to complement previously validated in vivo germ cell genotoxicity assays.     

Expression profile of chemokines and chemokine receptors in epithelial cell layers of oral lichen planus

BACKGROUND: To understand the immunopathological features of oral lichen planus (OLP), we analyzed the expression of chemokines in the epithelial cell layers. Methods: Epithelia from OLP or healthy gingiva were collected by laser microdissection. The chemokine and chemokine receptor expressions in the epithelia were analyzed by DNA microarray. RESULTS: High levels of MIP-3alpha/LARC/CCL20 and its receptor CCR6 were expressed in the lesional epithelia. Furthermore, DC-CK1/CCL18, ELC/CCL19, SDF-1/CXCL12 and CXCR4 expressions were also increased. Immunohistologial analysis showed that high numbers of Langerhans cells (LCs) were present in the epithelia of OLP. Lesional epithelia also expressed high levels of the ligands specific for CXCR3 (e.g. MIG/CXCL9, IP-10/CXCL10 and I-TAC/CXCL11) and CCR5 (e.g. RANTES/CCL5). CONCLUSIONS: Infiltration of LCs is orchestrated by CCR6. Further, LCs residing in the lesional epithelia may be a mature phenotype. Moreover, infiltration of T cells in OLP could be mediated by signaling pathways through CXCR3 and CCR5.     

Karzinomassoziierte Retinopathie (CAR) bei Mammakarzinom und Karzinoid

Fragestellung: Die Karzinomassoziierte Retinopathie (CAR) stellt ein seltenes paraneoplastisches Syndrom dar, das bislang am h?ufigsten bei kleinzelligen Bronchialkarzinomen beschrieben wurde. Wir berichten über 3 Patientinnen mit CAR in Gegenwart eines Mammakarzinoms bzw. eines Karzinoids der Cervix uteri. Patienten und Methode: Es wurden biomikroskopische, perimetrische, angiographische und elektrophysiologische Befunde erhoben. Au?erdem erfolgte eine Testung der Immunreaktivit?t der Seren an humaner Retina. Ergebnisse: Die Befunde umfa?ten ringf?rmige Gesichtsfelddefekte mit statokinetischer Dissoziation und eine pathologische St?bchen- und Zapfenantwort im ERG. Bei 1 Patientin wurde immunhistochemisch eine Reaktion im Bereich der Photorezeptorinnensegmente, der ?u?eren K?rnerschicht sowie der ?u?eren plexiformen Schicht bei fehlendem Nachweis von Antik?rpern gegen Recoverin gefunden. Diskussion: Neben dem kleinzelligen Bronchialkarzinom k?nnen auch andere Prim?rtumoren mit einer CAR vergesellschaftet sein. Der Nachweis von retinalen Autoantik?rpern unterstützt die Annahme einer tumorinduzierten Immunantwort aufgrund der Expression identischer Epitope durch die Tumorzellen. Dabei kommen offensichtlich verschiedene retinale Proteine als Autoantigene in Betracht.      

Erinnerungen an traumatische Erlebnisse in der Zeit des Nationalsozialismus bei (ehemaligen) jüdischen Emigranten und Lagerhäftlingen

Zusammenfassung Halbstrukturierte Inteviews mit 248 (ehemaligen) jüdischen Emigranten und Lagerh?ftlingen in Deutschland und drei Ziell?ndern der jüdischen Emigration zeigen, da? Erinnerungen an traumatische Erlebnisse im Nationalsozialismus in zahlreichen allt?glichen Kontexten auftreten und von zentraler Bedeutung für die Wahrnehmung der pers?nlichen Lebenssituation im Alter sind. Auf der Grundlage der Ergebnisse einer Pilotstudie zur Frage nach der subjektiven Gliederung des Lebenslaufs bei (ehemaligen) jüdischen Emigranten und Lagerh?ftlingen werden unterschiedliche Abschnitte der pers?nlichen Entwicklung nach dem Holocaust unterschieden. Selbsteinsch?tzungen der Untersuchungsteilnehmer zur Intensit?t von Erinnerungen an traumatische Erlebnisse in diesen Entwicklungsabschnitten unterstützen die Annahme, da? belastende Erinnerungen im Alter deutlich zugenommen haben. Die Untersuchungsteilnehmer unterscheiden sich erheblich in den Formen der Auseinandersetzung mit solchen Erinnerungen. Einige Untersuchungsteilnehmer reagierten mit Depressionen, Angstzust?nden, Gefühlen von überlebensschuld und Rückzug aus sozialen Beziehungen. Andere engagierten sich hingegen in hohem Ma?e in sozialen Beziehungen, vor allem zu Angeh?rigen der jüngeren Generation, um dadurch zur Vermeidung von Diskriminierung, Rassismus und Fremdenfeindlichkeit beizutragen. Eingegangen: 14. August 1997, Akzeptiert: 26. Januar 1998     

Chronische Schmerzen des unteren Rückens Prinzipien und prognostische Faktoren gymnastischer Übungen

Zusammenfassung In Konsensusvereinbarungen verschiedener L?nder wie den USA, Gro?britannien, den Niederlanden und Finnland wurde jüngst deutlich Stellung für die Aufnahme von gymnastischen übungen in die Behandlung bei prolongierten und chronischen Beschwerden des unteren Rückens bezogen. Diese übungen sind im 2. Abschnitt des Behandlungsplans nach zumindest teilweiser Schmerzrückbildung vorgesehen, mit dem Ziel, die v?llige Funktionsf?higkeit wiederherzustellen. Die vorliegende Literaturübersicht befa?t sich mit dem Grundprinzip der übungsbehandlung bei Schmerzen des unteren Rückens, bestehenden Wirkungsnachweisen und prognostischen Faktoren für eine funktionelle Wiederherstellung.     

Reizhusten, Belastungsdyspnoe und zystische Lungenveränderungen bei einem 28jährigen Patienten

Zusammenfassung Eine neu aufgetretene Dyspnoesymptomatik und eine symmetrische, apikal betonte retikulonodul?re Zeichnungsvermehrung im R?ntgen-Thorax bei jungen rauchenden Erwachsenen müssen an das seltene Krankheitsbild der pulmonalen Histiocytosis X denken lassen. Klinischer Befund, laborchemische- und Lungenfunktionsuntersuchungen zeigen unspezifische Befunde. Neue radiologische Verfahren wie die hochaufl?sende Computertomographie (HRCT) leisten bei gezielter Indikationsstellung eine entscheidende differentialdiagnostische Hilfestellung. Dieser Fall verdeutlicht die M?glichkeit einer Diagnosesicherung durch transbronchiale Biopsien unter Verzicht auf offene Lungenbiopsien. Eine ambulante Diagnostik war m?glich, das h?here Risiko eines operativen Eingriffes konnte vermieden werden. Die Indikation zur Therapie ist nicht gesichert und wird daher durch den Grad der subjektiven bzw. funktionellen Einschr?nkung sowie den Verlauf bestimmt.     

Research review: DNA polymerases as molecular markers of the regenerating capacity of hepatocytes

Hepatocyte regeneration has been widely investigated, with the mitotic index and the incorporation of [³H]thymidine being used as regeneration markers. We focused on the induction of DNA replication enzymes, particularly DNA polymerases (pol) α, δ, and ε. Using rat models, we have shown that the activity of pol α in crude liver extract well represents the regenerating capacity of hepatocytes. Using pol α as an indicator, we analyzed liver regeneration in rat models under various conditions: obstructive jaundice, external or internal biliary drainage, and the obstruction of portal vein branches. It has been revealed that the ligation of the common bile duct alone induces a certain amount of hepatocyte proliferation. It was striking that external biliary drainage suppressed regeneration capacity in cholestatic rat liver after partial hepatectomy. The strong regeneration in nonligated lobes induced by portal branch ligation was similar to the liver regeneration seen after partial hepatectomy with respect to the induction of DNA polymerases. Taken together, the aspects of DNA replication, particularly the induction of DNA polymerases, may contribute to shedding new light on the regeneration of human liver. This work was supported in part by a Grant-in-Aid for General Scientific Research and for Cancer Research from the Ministry of Education, Science and Culture, Japan, and by grants from the Uehara Memorial Foundation     

Intrafamilial heterogeneous clinical presentation of the mitochondrial 3243 MELAS mutation; molecular investigations among four generations

We have identified the A3243G heteroplasmic point mutation in mitochondrial DNA from a female patient with headache as the main clinical feature. The mitochondrial origin of her disease was only suspected because of her brother with MELAS syndrome. Morphological and biochemical studies failed to reveal mitochondrial respiratory chain dysfunction in her muscle which contained 65% of mutated mitochondrial DNA molecules. Molecular studies performed among four generations (in the blood of seven subjects) showed the variable transmission of mutated molecules and pointed out the difficulty in giving genetic counsel.     

Chronic modifications of lung and heart development in glucocorticoid-treated newborn rats exposed to hyperoxia or room air

We assessed the mechanics and morphology of the lung in 165 rats treated neonatally with either room air (RA), O₂, RA + steroids, or O₂, + steroids. Newborn Sprague-Dawley male rats were randomly assigned to these groups. O₂,-exposure (0.96-1.0 FiO₂ lasted 5 days, and dexamethasone treatment consisted of eight daily S.C. injections of drug or buffer in successive doses of 0.5,0.4.0.3,0.2,0.1, 0.1. 0.1. and 0.1 mg/kg. At 58 days, right ventricular systolic pressure (RVP) was measured. At 60 days, all rats were sacrificed for obtaining lung weight and DNA, saline pressure-volume (P-V) curves, and morphometry. We weighed right ventricles (RV) and left ventricles + septa (LV). Hyperoxia alone did not, but steroid decreased survival rate to 79.4% (95.3% in RA rats, P < 0.02). Only 21 of 40 (52%) O₂ + steroids rats survived, less than in both RA groups (P < 0.001). RV weight, RVP and muscularization of alveolar duct arteries were significantly increased in O₂ vs. RA rats. In RA + steroids rats, weight of the LV was decreased but RV, RVP, and lung vasculature were not affected. These effects were additive in the O₂ + steroid group. Wet lung weights and DNA were increased for RA + steroid rats over all others. O₂ and steroids shifted the P-V curve to the left and O₂+ steroids still further. Maximal lung volume increased significantly with RA + steroids and still further in O₂ + steroids but not in O₂ alone. O₂ and steroids significantly increased the mean linear intercept and O₂ + steroids even more so. In O₂- and steroid-treated rats, the parenchymal air space increased. In conclusion, both neonatal hyperoxia and steroid administration caused aberrations in the growth of lung and connective tissue. The effects of the two were additive. The vascular system, maximal lung volume, and DNA responded differently, presumably by different modes of action. Pediatr Pulmonol. 1993; 16:81–88. © 1993 Wiley-Liss, Inc.