抗氧化剂和Ca2+清除剂调控As2O3诱导白血病细胞凋亡中Bcl-2和p53的表达

目的: 研究抗氧化剂NAC, NDMS, CAT和Ca2+清除剂Quin 2调控As2O3诱导白血病细胞株NB4, K562, HL-60凋亡时Bcl-2和p53表达的作用. 方法: 不同浓度As2O3处理细胞内Bcl-2和p53用相应抗体标记, 并用流式细胞仪检测. 结果: 0.6,2.7和8.1 μmol*L-1 As2O3作用72 h能诱导NB4, K562和HL-60发生0.45±0.04, 0.58±0.06和0.62±0.08凋亡, 上述浓度药物能使NB4, K562, HL-60 3种细胞中Bcl-2蛋白的平均荧光强度分别由109±31, 101±32, 87±23下降到68±22, 54±33, 66±18.相反, 可使3种细胞中p53蛋白的平均荧光强度分别由18±5, 2±1, 3±1上升到30±9, 15±6, 28±8. 而抗氧化剂NAC, NDMS, CAT和Ca2+清除剂Quin 2对3种细胞内Bcl-2和p53表达没有显著影响, 但能抑制As2O3引起的p53表达上调. 对As2O3引起的Bcl-2下降则显示了不同的调控作用. 结论: As2O3诱导的Bcl-2下降、p53上升和细胞凋亡可被抗氧化剂和Ca2+清除剂抑制.     

三氧化二砷诱导血管内皮细胞凋亡和抑制血管生成的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)抑制血管内皮细胞(HUVECs)生长、诱导凋亡和抑制血管生成的作用。方法：As2O3与HUVECs共同孵育一定时间后，观察细胞形态学变化，并用MTT方法测定细胞生长曲线图、TUNEL方法检测细胞凋亡；观测As2O3对鸡胚血管生成的影响。结果：在0．75μmol／L～6μmol／L浓度范围内随药物浓度增加或作用时间延长，细胞生长抑制和细胞凋亡效果越显著；As2O3作用鸡胚绒毛尿囊膜后血管生成减少。结论：As2O3抑制HUVECs生长、诱导细胞凋亡，对血管生成有抑制作用。     

三氧化二砷对不同p53表型胶质瘤细胞程序性死亡相关基因表达的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对两种不同p53表型胶质瘤细胞U87MG、T98G作用后细胞程序性死亡相关基因表达的影响。方法应用基因芯片技术筛选出As2O3作用于两种胶质瘤细胞U87MG、T98G前、后与细胞程序性死亡有关的表达差异有统计学意义的基因；用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率；用电镜和原位凋亡检测（TUNEL）法及及吖啶噔／溴乙啶双荧光染色进行细胞形态观察、流式细胞仪等方法检测细胞程序性死亡改变。结果两种胶质瘤细胞应用As2O3后，透射电镜下T98G中频繁地观察到细胞自噬现象；筛选出U87MG细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共4J6条（上调33条，下调13条）。T98G细胞在As2O3作用前后差异表达且与程序性死亡相关基因共54条（上调34条，下调20条）。结论 As2O3以剂量依赖的方式通过细胞程序性死亡来抑制U87MG和198G细胞的增殖；As2O3诱导下的两种不同P53表型的细胞系中还存在非凋亡调控的细胞程序性死亡（自噬）；P53／ATM通路的基因、Bcl-2家族、TNF配体家族、TNF受体家族基因参与As2O3诱导胶质瘤细胞程序性死亡的发生机制。     

染砷小鼠脑突触结构变化及相关基因差异表达

目的观察染砷小鼠大脑神经突触结构变化及相关基因表达。方法30只昆明种小鼠,按体重分为3组,即对照组、1和4 mg/L染砷组,染毒60 d。应用电镜和基因芯片技术观察砷对小鼠大脑神经突触结构及相关基因表达的影响。结果对照组小鼠大脑突触结构清晰,突触前膜、间隙和后膜特化带清晰,前突触中可见较多的突触小泡。染砷组小鼠大脑突触前膜、间隙及后膜轮廓清晰,突触前膜的突触小泡数量明显减少。基因芯片结果显示,染砷组小鼠大脑突触相关基因差异表达共有10条。上调基因为依赖于钙-钙调蛋白的蛋白激酶IV(Camk4)、速激肽1(Tac1)、多巴胺受体D1A(Drd1a)和多巴胺受体D2(Drd2);表达下调的基因共有6条,分别为complexin蛋白2(Cplx2)、钙通道α1A亚单位(Cacna1a)、谷氨酸受体互变异构NMDA2B(Grin2b)、亲代谢性谷氨酸受体7(Grm7)、肌萎缩性(脊髓)侧索硬化2(Als2)和亲代谢性谷氨酸受体2(Grm²)。结论亚慢性砷暴露对小鼠大脑突触结构及相关基因表达造成损伤性影响,提示大脑神经元突触可能是砷神经毒性作用靶部位。     

三氧化二砷对淋巴瘤T2细胞株SHP-1基因的去甲基化作用

背景与目的:去甲基化作用可能是三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对抗造血系统恶性肿瘤的另一种机制.本研究探讨As2O3对淋巴瘤细胞系T2细胞中抑癌基因酪氨酸磷酸酶(SH2-containinphosphatase-1,SHP-1)的去甲基化作用及对T2细胞生长增殖的生物学影响.方法:T2细胞以As2O3或5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxyoytidine,5-AC)单独处理,或两药联合处理.采用甲基化特异性PCR、荧光定量PCR和Western检测As2O3处理前后SHP-1基因启动子过甲基化及其mRNA和蛋白表达状况、c-kit蛋白表达变化.MTT法检测细胞存活率.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:As2O3能逆转SHP-1基因启动子甲基化,使T2细胞SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,同时c-kit蛋白表达呈下降趋势;As2O3明显抑制T2细胞的增殖,随浓度增加及作用时间延长,其增殖抑制效应增加(P<0.05);2.5μmol/L浓度的As2O3作用T2细胞t,2,3d细胞增殖抑制率(9.8%,20.3%,47.5%)明显低于联合作用组(11.0%,36.7%.61.0%).As2O3可使T2细胞凋亡率增加,且随作用时间延长和浓度增加,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),联合作用组细胞凋亡率(1 d:17.3%;2 d:37.9%;3 d:67.9%)明显高于2.5 μmol/L As2O3单独作用组(6.1%,26.5%,50.9%).结论:As2O3能去除T2细胞中SHP-1基因甲基化,使其重新表达,并可能通过抑制c-kit受体及其信号转导路径的活化而抑制肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

原子荧光光谱法检测薄膜包衣粉中As,Pb含量的前处理方法研究

目的建立适合于原子荧光光谱法检测薄膜包衣粉中As,Pb含量的前处理方法.方法采用干法和消解器法两种消解方法对薄膜包衣粉中As,Pb含量分别进行检测,通过回收率的对比,确定最佳的前处理方法.结果通过干法消解,Pb的回收率约为43%;通过消解器法消解,Pb的回收率约为90%,As的回收率约为80%.结论薄膜包衣粉的消解方法以消解器法最为合适、可行.     

ICP-MS测定香芍软胶囊中砷汞铅镉铜的含量

目的:采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定香芍软胶囊(XSSC)囊心物中砷、汞、铅、镉、铜的含量。方法:样品经微波消解,以Re为内标,以茶叶、圆白菜标准物质为质控,采用ICP-MS测定上述5种元素。结果:对于所测5种元素,标准曲线的相关系数r(0.9996,回收率为95.8～101.6%,RSD(5.8%。结论:本测定方法快捷、准确、灵敏度高,适用于XSSC囊心物中上述5种元素的同时测定。     

沙利度胺联合三氧化二砷对急性非淋巴细胞白血病细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究沙利度胺和三氧化二砷(As2O3)对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,并研究两者是否有协同作用.方法 收集23例ANLL患者的骨髓液,用Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞(MNC),于37℃、5%二氧化碳CO2饱和湿度条件下于RPMI1640培养液中传代培养.取对数生长期细胞以2×106/mL的细胞浓度加入24孔培养板上,沙利度胺以75、150和300μg/mL的浓度加入培养体系中,As2O3以12.5,25和50μmoL/L的浓度加入培养体系中,并将300μg/mL的沙利度胺和50μmol/L的As2O3联合加入培养体系中,同时设空白对照.上述各组分别培养48、72、96和120 h.用ELISA法检测上清液VEGF浓度.结果 沙利度胺和As2O3均可抑制ANLL细胞分泌VEGF,其抑制程度具有剂量-时间依赖性.两药联用的抑制作用更加明显.结论 白血病细胞能自分泌VEGF;沙利度胺和As2O3均能抑制ANLL细胞分泌VEGF;两者联合应用起协同作用.