骨髓增生异常综合征P15INK4B基因甲基化及药物去甲基化作用

目的 检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者P15INK4B基因甲基化状况;探讨5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(decitabine)和三氧化二砷(As2O3)对MDS患者细胞的去甲基化作用.方法 采用限制性内切酶联合PCR方法检测14例MDS患者P15INK4B基因甲基化,选择1例由MDS转化为急性白血病患者的外周血单个核细胞,分组分别加入decitabine和As2O3进行处理,分析甲基化程度变化情况.结论 低危组MDS患者(RCMD)均未发现P15INK4B基因甲基化,4例高危组MDS患者(RAEB)和4例 MDS-AL患者发现P15INK4B基因甲基化.经decitabine和As2O3处理后,MDS患者细胞的甲基化程度均降低50%左右.结论 MDS的发生与P15INK4B基因甲基化密切相关,decitabine和As2O3均对MDS患者细胞高度甲基化的P15INK4B基因具明显去甲基化作用.     

As2O3/CD133抗体双面涂层药物洗脱支架的动物实验研究

目的：初步探讨As2O3/CD133抗体双面涂层药物洗脱支架在动物体内的治疗作用。方法：60只中华小型猪非高脂饮食喂养4周,随机分为球囊损伤组、假手术组和双面涂层支架组,造模后继续喂养4周,行冠状动脉光学相干断层成像（OCT）后处死动物,取心肌组织行免疫组化检测。结果：OCT图像显示,球囊损伤组冠状动脉斑块明显扩大,内膜增厚,纤维帽厚度明显增加;与球囊损伤组相比,双面涂层支架组斑块明显缩小,内膜增厚不明显,纤维帽厚度无明显增加;假手术组冠状动脉基本正常。双面涂层支架组冠状动脉的内膜/中膜面积比和厚度比低于球囊损伤组,但仍高于假手术组（P〈0.05）。免疫组化结果表明,球囊损伤组心肌Bax和Bcl-22的表达明显高于假手术组,双面涂层支架组Bax和Bcl-22的表达明显低于球囊损伤组（P均〈0.01）,而与假手术组无明显差异。结论：As2O3/CD133抗体双面药物涂层支架能显著抑制冠状动脉内膜增殖,抑制心肌凋亡。     

As2O3影响慢性粒细胞白血病细胞VEGF,MMP-2 mRNA表达的实验研究

目的研究As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）骨髓单个核细胞，血管内皮生长因子（VEGF），基质金属蛋白酶2（MMP-2）mRNA及培养上清VEGF蛋白表达的影响作用，从而对白血病的发病机制及As2O3的作用机制进行探讨。方法用RT—PCR技术检测20例CML患者与5例正常人骨髓细胞MMP-2，VEGFmRNA的表达。用ELISA方法检测20例CML患者骨髓单个核细胞经As2O3作用前、后培养上清液VEGF水平的变化，用RT—PCR法检测VEGF，MMP-2mRNA表达阳性患者骨髓单个核细胞mRNA含量的变化。结果CML患者VEGF，MMP-2mRNA水平明显高于正常对照者，5×10^-6mol／L As2O3可明显下调CML患者骨髓单个核细胞培养上清VEGF蛋白的表达（P〈0．05）；As2O3对骨髓单个核细胞VEGF，MMP-2mRNA的表达有下调作用，并为剂量依赖性。结论CML中VEGF与MMP-2mRNA表达异常增高。As2O3下调白血病细胞VEGF，MMP-2的表达可能是其抗白血病作用的机制之一。     

微波消解-原子荧光光谱法测定骨折挫伤胶囊中砷的含量

目的建立聚四氟乙烯消化罐程序升温消解样品的体系,研究并确定原子荧光光谱法测定骨折挫伤胶囊中砷的含量的方法。方法采用聚四氟乙烯消化罐程序升温消解样品,氢化物发生-原子荧光光谱法测定骨折挫伤胶囊中砷的限量。结果线性范围为0～16μg·L^-1;相关系数r为0．9994;方法的检出限为0．2879μg·L^-1;平均回收率为95．32％,RSD为3．61％。结论采用本法检测骨折挫伤胶囊中砷的含量,方法灵敏、准确、可靠。     

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As203细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法,并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203,体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％,其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20,剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05）,各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05）,各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低,As20,的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时,用CCK-8法优于M11’法,均比台盼蓝法更为灵敏。     

ICP-MS测定片仔癀肝宝中6种重金属的含量

目的：建立电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定片仔癀肝宝中铬（Cr）、铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）、汞（Hg）、铜（Cu）6种重金属的含量。方法：样品微波消解处理后,采用电感耦合等离子体质谱法测定。结果：Cr、Cu、As、Cd、Hg、Pb标液的工作曲线线性良好,相关系数大于0.999 3。其中Cr的平均回收率101.2%,相对标准偏差（RSD）7.6%;Cu的平均回收率96.4%,RSD3.5%;As的平均回收率101.3%,RSD1.8%;Cd的平均回收率100.2%,RSD0.3%;Hg的平均回收率100.5%,RSD4.2%;Pb的平均回收率104.2%,RSD5.6%。结论：该方法稳定可靠,灵敏度高,重现性好,可用于测定片仔癀肝宝中Cr、Cu、As、Cd、Hg、Pb 6种重金属的含量。     

川芎嗪对动脉粥样硬化大鼠模型主动脉VCAM-1mRNA表达量的影响

目的利用高脂饲料诱发的动脉粥样硬化(AS)大鼠模型，观察川芎嗪的治疗作用，并在分子水平探讨其作用机制。方法24只雄性Wister大鼠随机分为川芎嗪组(造模成功后给予川芎嗪灌胃)、正常对照组(不造模，饲喂普通饲料)、模型组(造模成功后改喂普通饲料)，于实验前后RT—PCR法检测主动脉中血管细胞粘附分子(VCAM-1)mRNA的表达水平和血脂。结果高脂饮食可诱导大鼠形成AS模型，模型组血脂明显高于正常组，并且有VCAM—1 mRNA表达；川芎嗪组VCAM—1 mRNA表达量水平显著低于模型组；正常对照组无VCAM—1 mRNA表达。结论川芎嗪可以下调主动脉组织VCAM—1 mRNA的表达，降低血脂，具有抗动脉粥样硬化作用，而降低主动脉组织VCAM-1 mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制。用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2μmol/LAs2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞procaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化。结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化。结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,最终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制。     

二硫化二砷联合伊马替尼诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡机制探讨

目的：观察二硫化二砷（As2S2）和伊马替尼（STI571）联合用药对慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株的作用机制。方法：应用MTT增殖抑制实验、锥虫蓝拒染细胞计数、瑞氏染色细胞形态观察、Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞,RT-PCR检测bcr-abl mRNA的表达及蛋白印迹（Western blot）分析BCR-ABL的表达、细胞色素C（cytoC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（caspase）蛋白表达,观察As2S2、STI571联合或单独作用于STI571敏感细胞株K562S及耐药细胞株K562R的情况。结果：2.5μmol/LAs2S2＋0.25μmol/LSTI571或4μmol/LAs2S2＋8μmol/LSTI571联合用药对K562S或K562R有明显生长抑制协同作用和促凋亡协同作用;联合用药对K562S或K562R的bcr-abl mRNA的表达无明显影响,但K562S细胞BCR-ABL表达明显减少,K562R细胞BCR-ABL表达略有减少。且联合用药可促进凋亡诱导蛋白cytoC释放增多及caspase9和caspase3前体下调。结论：STI571与As2S2联合用药对K562S和K562R细胞有明显的生长抑制和促凋亡的协同作用,这一作用可能通过减少BCR-ABL表达及凋亡相关蛋白cytoC释放,并下调caspase9和caspase3前体的表达以促进细胞凋亡。